Validation of an HPLC-UV method for the identification and quantification of bioactive amines in chicken meat / Validação de metodologia por HPLC/UV para identificação e quantificação de aminas bioativas em carne de frango de corte

A high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV) method was validated for the study of bioactive amines in chicken meat. A gradient elution system with an ultraviolet detector was used after extraction with trichloroacetic acid and pre-column derivatization with dansyl chloride. Putrescine, cadaverine, histamine, tyramine, spermidine, and spermine standards were used for the evaluation of the following performance parameters: selectivity, linearity, precision, recovery, limits of detection, limits of quantification and ruggedness. The results indicated excellent selectivity, separation of all amines, a coefficient of determination greater than 0.99 and recovery from 92.25 to 102.25% at the concentration of 47.2mg.kg-1, with a limit of detection at 0.3mg.kg-1 and a limit of quantification at 0.9mg.kg-1 for all amines, with the exception of histamine, which exhibited the limit of quantification, of 1mg.kg-1. In conclusion, the performance parameters demonstrated adequacy of the method for the detection and quantification of bioactive amines in chicken meat.(AU)

Um método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para pesquisa de aminas bioativas em carne de frango foi validado. Foi utilizado um sistema de gradiente de eluição com detector ultravioleta, após extração com ácido tricloroacético e derivação pré-coluna com cloreto de dansila. Os padrões de putrescina, cadaverina, histamina, tiramina, espermidina e espermina foram utilizados para avaliação dos seguintes parâmetros de desempenho: seletividade, linearidade, precisão, recuperação, limites de detecção, limites de quantificação e robustez. Os resultados mostraram excelente seletividade e separação de todas as aminas, coeficiente de determinação superior a 0,99, recuperação entre 92,25 e 105,25% na concentração 47,2mg.kg-1, limites de detecção de 0,3mg.kg-1 e limite de quantificação de 0,9mg.kg-1 para todas as aminas, com exceção da histamina, que apresentou o limite de quantificação mais alto, de 1mg.kg-1. Foi concluído que os parâmetros de desempenho demonstraram adequação do método para detecção e quantificação de aminas bioativas em carne de frango.(AU)

Aislamiento y rendimiento del GMP mediante precipitación de lactosuero con ácido tricloroacético / GMP isolation and yield by whey precipitation with trichloroacetic acid

Durante la elaboración del queso, la k-caseína es hidrolizada por la renina (Quimosina E.C.3.4.23.4) en el enlace peptídico Fen105-Met106 generando dos fracciones: la para-k-caseína y el glicomacropéptido (GMP) que se libera al lactosuero. El GMP presenta una estructura química particular donde predominan los aminoácidos con cadena lateral ramificada, no presenta aminoácidos aromáticos y contiene carbohidratos unidos a residuos de treonina; por esta razón se le ha atribuido una variedad de actividades biológicas. Se ha estimado que en Venezuela se generan alrededor de 713 toneladas de lactosuero anualmente. Un volumen considerable de este subproducto se produce en el estado Zulia, constituyéndose esto en una fuente de péptidos y proteínas de alta calidad nutricional que está siendo subutilizada. Con el propósito de evaluar el aislamiento y rendimiento del GMP a partir de la precipitación de lactosuero de ricotta con ácido tricloroacético 50 por ciento, se realizaron 6 extracciones con este ácido a 50 mL de cada tipo de suero analizado: suero ricotta, suero comercial resuspendido y suero ácido (control negativo). Se verificó mediante pruebas químicas y PAGE-SDS 15 por ciento de manera indirecta, la presencia de GMP en las preparaciones obtenidas. Se observaron bandas de 6,5; 18,3 y 19,0 kDa en suero ricotta y suero comercial resuspendido. Las bandas de 18,3 y 19,0 posiblemente correspondan a la forma trimérica del péptido. El rendimiento del GMP en términos de proteínas fue en promedio 1,17 mg/50mL (1,17 por ciento) y 4,51 mg/50mL (0,81 por ciento), para suero ricotta y suero comercial, respectivamente. Los resultados indican que es factible obtener preparaciones del GMP, sin embargo, para plantear la producción a escala industrial de este péptido para su aprovechamiento, se requiere evaluar otros procedimientos donde se obtenga a bajo costo una preparación purificada del GMP.

During cheese manufacturing k-casein is hydrolyzed by rennin (Quimosine E.C.3.4.23.4) on peptidic bond Fen105- Met106 releasing two fractions: para-k-casein and glycomacropeptide (GMP). GMP shows a particular chemical structure in which ramified lateral chain aminoacids prevail, without aromatics aminoacids, but with carbohydrates short chains linked to some threonine residues; because of this, a variety of biological activities have been attributed to molecule. It has been considered that in Venezuela, 713 tons of whey are generated annually. An important volume of this byproduct is produced in the Zulia State, becoming itself a source of peptides and proteins of high nutritional quality that has been subused. With the purpose of evaluating GMP isolation and yield from ricotta whey precipitation with 50 percent trichloroacetic acid treatment, 6 extractions where performed with this acid to 50 mL of each analyzed whey: ricotta whey, resuspended commercial whey and acid whey (negative control). By means of chemical tests and PAGE-SDS 15 percent, indirect presence of GMP was verified in all preparations. Bands of 6.5, 18.3 and 19.0 kDa were observed in ricotta and commercial whey. Bands of 18.3 and 19.0 possibly correspond to the peptide trimeric structure. GMP yield in terms of protein content was 1.17 mg/50mL (1.17 percent) and 4.51 mg/50mL (0.81 percent), for ricotta and commercial whey, respectively. Results show that it feasible to obtain preparations of GMP, however, in order to produce this peptide industrially for its use, evaluation of low cost procedures for GMP purification is required.