Evaluation of the safety of intracameral trypan blue injection on corneal tissue using oxidative stress parameters and apoptotic activity: an experimental study / Avaliação da segurança de injeção de azul de tripan intracameral no tecido da córnea utilizando parâmetros de estresse oxidativo e atividade apoptótica: um estudo experimental

Purpose: The present experimental study aimed to investigate the effects of intracameral trypan blue (TB) on oxidative stress parameters and apoptosis in corneal tissue. Methods: Thirty rats were randomly assigned to three groups of 10 rats each: the sham group (Group 1); control group (Group 2); and treatment group (Group 3). The control group was administered 0.01 cc of balanced salt solution. The treatment group was administered 0.006 mg/0.01 cc of TB. The total antioxidant status (TAS) and total oxidant status (TOS) in corneal tissue and blood were measured and the oxidative stress index (OSI) was calculated. Finally, corneal tissue histopathology was evaluated using staining for caspase-3 and -8, and apoptotic activity was examined. Results: The TAS, TOS and OSI levels in the blood samples were not significantly different (p>0.05 for all). Compared with the sham and control groups, the TOS and OSI levels in corneal tissue were significantly different in the treatment group (p<0.05 for all). No significant difference was observed between the sham group and the control group (p>0.05). Immunohistochemical staining for caspase-3 and caspase-8 demonstrated higher apoptotic activity in the TB group than in the sham and control groups. Conclusion: The present study showed that intracameral TB injection is safe systematically but may be toxic to corneal tissue, as demonstrated using oxidative stress parameters and histopathological evaluation. .

Objetivo: Este estudo experimental tem como objetivo investigar os efeitos do azul de tripan intracameral (TB) sobre parâmetros de estresse oxidativo e apoptose no tecido da córnea. Métodos: Trinta ratos foram divididos aleatoriamente em três grupos de 10 animais cada: grupo simulação (Grupo 1); grupo controle (Grupo 2); e grupo tratamento (Grupo 3). No grupo controle foi administrado 0,01 cc de solução salina balanceada (BSS). No grupo tratamento foi administrado 0,006 mg/0,01 cm de TB. O estado antioxidante total ( TAS) e estado oxidante total ( TOS) no tecido da córnea e sangue foram medidos e o índice de estresse oxidativo (OSI) foi calculado. Finalmente, histopatologia do tecido da córnea foi avaliada por meio da coloração para caspase-3 e -8; atividade apoptótica também foi examinada. Resultados: Os níveis de TAS, TOS e OSI das amostras de sangue não foram significativamente diferentes (p>0,05 para todos). Em comparação com os grupos simulação e controle, os níveis de TOS e OSI no tecido da córnea foram significativamente diferentes no grupo tratamento (p<0,05 para todos). Não houve diferença significativa entre o grupo simulção e o grupo controle (p>0,05). A coloração imuno-histoquímica com a caspase-3 e caspase-8 demonstrou maior atividade apoptótica no grupo tratamento do que nos grupos controle e simulação. Conclusão: Este estudo mostrou que a injeção intracameral TB é segura sistematicamente, mas pode ser tóxica ao tecido da córnea, como demonstrado através de parâmetros de estresse oxidativo e avaliação histopatológica. .

Compounds used to produce cloned animals are genotoxic and mutagenic in mammalian assays in vitro and in vivo

The compounds 6-dimethylaminopurine and cycloheximide promote the successful production of cloned mammals and have been used in the development of embryos produced by somatic cell nuclear transfer. This study investigated the effects of 6-dimethylaminopurine and cycloheximide in vitro, using the thiazolyl blue tetrazolium bromide colorimetric assay to assess cytotoxicity, the trypan blue exclusion assay to assess cell viability, the comet assay to assess genotoxicity, and the micronucleus test with cytokinesis block to test mutagenicity. In addition, the comet assay and the micronucleus test were also performed on peripheral blood cells of 54 male Swiss mice, 35 g each, to assess the effects of the compounds in vivo. The results indicated that both 6-dimethylaminopurine and cycloheximide, at the concentrations and doses tested, were cytotoxic in vitro and genotoxic and mutagenic in vitro and in vivo, altered the nuclear division index in vitro, but did not diminish cell viability in vitro. Considering that alterations in DNA play important roles in mutagenesis, carcinogenesis, and morphofunctional teratogenesis and reduce embryonic viability, this study indicated that 6-dimethylaminopurine and cycloheximide utilized in the process of mammalian cloning may be responsible for the low embryo viability commonly seen in nuclear transfer after implantation in utero.

Risco de contaminacão do corante azul de tripano após primeira utilizacão / Risk of contamination of trypan blue dye after first use

OBJETIVOS: Determinar o potencial risco de contaminacão do frasco de azul de tripano (AT) depois de utilizado pela primeira vez e estocado em diferentes condicões de temperatura e umidade, assim como identificar os possíveis fatores de contaminacão, microrganismos mais freqüentemente envolvidos e simultaneamente avaliar as propriedades bacteriostáticas e bactericidas do corante. MÉTODOS: Realizado estudo experimental, prospectivo, em que 30 frascos de AT foram divididos em três grupos (A: controle, B: armazenamento em geladeira e C: armazenamento em armário). O corante era aspirado e semeado em placas de ágar sangue e tubo de ágar Sabouraud. No grupo A o AT foi semeado apenas logo após a abertura dos frascos (tempo zero - T0), nos grupos B e C ocorreu semeadura nos T0, T1 (1 dia), T2 (2 dias), T7 (7 dias) e T10 (10 dias) após abertura dos frascos. No 10º dia os frascos dos grupos B e C também foram submetidos a um raspado do lado interno do frasco após abertura. Concomitantemente foi realizado teste de acão inibitória do corante AT para estudo da atividade bacteriostática e bactericida. RESULTADOS: As semeaduras realizadas no T0 não apresentaram contaminacão. Entre os T1 e T10 mais o raspado houve apenas 1 frasco contaminado armazenado em geladeira. O microrganismo encontrado foi o Aspergillus niger. Foi comprovado que o corante não apresenta acão bactericida e bacteriostática para as bactérias testadas. CONCLUSÕES: Nas condicões do estudo não houve contaminacão dos frascos armazenados em armário e 1 frasco (10 por cento) armazenado em geladeira apresentou contaminacão após abertura e uso inicial. A fonte de contaminacão talvez seja o lado externo do produto. O AT não apresenta propriedades bactericidas e bacteriostáticas para as bactérias testadas e na concentracão utilizada.

Effects of trypan blue on the action of adrenergic agonists in the guinea-pig isolated atrium.

It has been reported that trypan blue, a diazo dye with polyamphipathic structure, can inhibit the coupling of receptors to G-proteins. The present study was carried out to investigate the effect of trypan blue on the actions of adrenoceptor agonists in the guinea-pig atrium. Trypan blue (10 and 100 microM) antagonized the positive inotropic effects of isoprenaline and dobutamine by shifting their concentration-response curves to the right. With the selective beta 2-adrenoceptor agonist, salbutamol, there was a reduction of response in the presence of trypan blue. Therefore, we concluded that trypan blue diminish the response to beta-adrenoceptor agonists possibly via decoupling receptors from Gs. Trypan blue and similar agents, due to their unique mode of action, can be used as tools for the investigation of the mechanism of receptor-G protein coupling in the whole tissue preparation.