Preparation of a working seed lot of BCG and quality control by PCR genotyping / Preparación de un lote semilla de trabajo de BCG y control de calidad por genotipificación por PCR

The bacillus Calmette-Guérin (BCG) was obtained in 1920 after successive passages leading to the attenuation of a Mycobacterium bovis strain. For the following 40 years, BCG had been replicated, resulting in substrains with genotypic and phenotypic differences. Several genomic studies have compared two BCG strains, M. bovis and Mycobacterium tuberculosis, and observed that deleted regions in the different strains could be related to differences in antigenic properties. In this work, a working seed lot was obtained from a lyophilized secondary seed lot from the BCG Pasteur strain 1173 P2 and genetically characterized. The genome was analyzed by PCR directed to five regions (RD1, RD2, RD14, RD15, DU2), using the seed lot and different available strains as templates. No genetic differences were found in the fragments studied as compared to the Pasteur strain. A total of 20 passages were carried out and no differences were found in the size of the fragments amplified by PCR. In conclusion, this method allows to control a working seed lot genotypically and to assess the stability of the BCG genome.

El bacilo de Calmette-Guérin (BCG) se obtuvo en 1920, después de sucesivos pasajes que llevaron a la atenuación de una cepa de Mycobacterium bovis. A lo largo de los 40 años subsiguientes la cepa BCG fue replicada y surgieron subcepas con diferencias fenotípicas y genotípicas. Se realizaron varios estudios de comparación genómica de diferentes cepas de BCG, M. bovis y Mycobacterium tuberculosis, y se observó que las deleciones de regiones en las diferentes cepas podrían estar relacionadas con diferencias en las propiedades antigénicas. En este trabajo se describe la preparación y caracterización genética de un lote semilla de trabajo obtenido a partir de un lote semilla secundaria liofilizado de la cepa BCG Pasteur 1173 P2. Se analizaron por PCR cinco regiones (RD1, RD2, RD14, RD15, DU2) en el lote semilla de trabajo utilizando como control las diferentes cepas disponibles. No se hallaron diferencias genéticas en los fragmentos estudiados al comparar el lote semilla de trabajo con la cepa BCG Pasteur 1173 P2. Asimismo, se efectuaron hasta 20 pasajes y no se encontraron diferencias en el tamaño de los fragmentos amplificados por PCR. En conclusión, se ha puesto a punto un método que permite controlar el genotipo de un lote semilla de trabajo y evaluar la estabilidad del genoma del BCG.

Re-evaluation of the basic procedures involved in the storage of measles vaccine in puplic health units of the municipality of niterói, state of Rio de Janeiro, Brazil

Quatro anos após a primeira visita, dezessete unidades Sanitárias do Município de Niterói - RJ foram visitadas novamente e reavaliadas de acordo com as normas técnicas específicas estabelecidas pelo Programa Nacional de Imunizaçäo. Constatou-se que em 100 por cento das Unidades visitadas os cuidados com os refrigeradores e a arrumaçäo das vacinas no interior dos aparelhos eram adequados ou regulares mas quanto ao controle de temperatura dos refrigeradores este percentual caía para 64,7 por cento. De todos os itens avaliados, o mais problemático foi o apoio técnico imediato frente a situaçöes de emergência, considerado insuficiente em 94,1 por cento dos casos. Em 55,2 por cento das amostras vacinais recolhidas das unidades sanitárias, os títulos estavam abaixo da potência mínima preconizada para tal produto no momento da aplicaçäo. Verifica-se, deste modo, a necessidade de uma contínua avaliaçäo dos fatores que intervêm na cadeia de frio evitando-se, assim, que seja comprometida a qualidade das vacinas a serem utilizadas

Fotossensibilidade e termoestabilidade de vacinas contra o sarampo (CEPA BIKEN CAM-70) liofilizadas e/ou reconstituídas para administraçäo / Photosensitivity and stability of freeze-dried and reconstituted measles vaccines (Biken CAM-70 strain)

Três lotes de vacinas contra o sarampo, produzidos com a cepa de vírus Biken CAM-70, sob as formas liofilizada e reconstituída, pertencentes ao estoque da rede de vacinaçäo da Secretaria de Estado da Saúde de Säo Paulo, Brasil, foram submetidos a testes de sensibilidade a luz, a temperatura de 2 a 8§C, e de termoestabilidade (protegidos da luz) as temperaturas de 28, 36,5 e 45§C, objetivando verificar por quanto tempo retinham sua potência, isto é, a concentraçäo ideal recomendada para a cepa de vírus presente. A análise de retas de regressäo ajustadas demonstrou que, de modo geral, tanto os lotes de vacinas liofilizados como de potência no decorrer do experimento, a qual foi mais acentuada para vacinas expostas a luz. Reconstituídos e mantidos a 2 a 8§C, os lotes näo apresentaram homogeneidade no referente a sensibilidade a luz. Quando a fotossensibilidade de lotes de vacinas liofilizadas foi testada a 2 a 8§C eles mostraram-se mais sensíveis a degradaçäo térmica quando expostos a luz do que quando protegidos dela. Entretanto, expostos ou protegidos, a potência foi inferior a mínima aceita para a cepa Bikien CAM-70. As demais temperaturas, mesmo ao abrigo da luz, os dois lotes näo retiveram potência mínima. Quanto as vacinas do lote 3, conservadas a 2 a 8§C, mantiveram-se de acordo com os requerimentos mínimos de potência durante 60 dias quando protegidas da luz, e durante 40 dias quando expostas a ela. A degradaçäo térmica as demais temperaturas foi mais acentuada (28§C: 5 dias...

Prueba de potencia de vacunas antipoliomieliticas orales trivalentes: comparación de dos metodos de lectura / Potency test for trivalent oral poliovaccines: compararison of reading methods

La prevención de la poliomielitis se realiza en Argentina mediante la administración de vacuna antipoliomielítica oral trivalente. El control de potencia de esta vacuna se realiza mediante la determinación del título infectivo de los 3 tipos de virus (tipo 1, 2 y 3) que la componen en cultivos celulares susceptibles (línea Hep-2 Cincinnati), registrándose la aparición de efecto ciropatico (ECP) HASTA EL 7-10 día post infección (pi). Para comparar el método tradicional de lectura con el de tinción de las monocapas celulares con cristal violeta-formol se titularon virus de referencia y algunos lotes de vacuna trivalente. Entre los días 3 y 10 pi se leyeron las placas al microscopio e inmediatamente después de cada lectura se tiñieron. Se observó que el título viral máximo se produce entre los días 5-7 pi; el ECP aparecido a partir del día 7 pi no modifica el resultado. El estado de las monocapas celulares influye notablemente en la precisión de la lectura ya que la confluencia incompleta o el enfejecimiento producido a partir de los días 6-7 pi debilita la intensidad de la coloración dificultando la definición entre positivos y negativos; en la mayoría de estos casos la lectura al microscopio no ofrece dificultades. Estos datos permiten concluir que la lectura por tinción aumenta la probabilidad de error en al titulación de las vacunas antipolimelíticas orales. Sisn embargo es una alternativa para tener en cuenta en caso de no contarse con un microscopio invertido o cuando se debe leer un gran número de placas; se recomienda entonces realizar la tinción al día 7pi