Antibiotic resistant Vibrio harveyi isolated from shrimp pond and anti-Vibrio activity of Combretum quadrangulare Kurz. and Mimosa pudica extracts

Aims@#The occurrence of bacterial disease in shrimp ponds is a major problem faced in shrimp farming. Thus, the aims of this study were to isolate and evaluate antibiotic resistant profile of Vibrio harveyi strain isolated from shrimp pond water, as well as to study the potential anti-Vibrio activity of Combretum quadrangulare Kurz. (CQ) and Mimosa pudica (MP) leaves extracts.@*Methodology and results@#Vibrio harveyi WSC103 was isolated from water in white shrimp (Litopenaeus vannamei) culture pond and identified using 16S rRNA gene sequencing analysis. This strain showed characteristics of multidrug-resistant (7 antibiotics). It had become more sensitive to antibiotics (9 out of 10 antibiotics) after plasmid curing. It is showed CQ and MP leaves extracts contain potent bioactive compounds (tannins, flavonoids, steroids, cardiac glycosides and alkaloids) against V. harveyi WSC103. The aqueous, 95% ethanolic and 75% acetone extracts of CQ (MIC value of 3.13-12.50 mg/mL) and MP (MIC value of 3.13-25.00 mg/mL) leaves revealed strong vibriostatic activity, but aqueous and 95% ethanolic extracts in both plants showed vibriocidal activity. The 95% ethanolic extract of both CQ and MP leaves displayed the excellent vibriocidal property with MBC value of 100 mg/mL with zone of inhibition at 11.44 ± 1.01 and 11.78 ± 1.01 mm by agar disc diffusion.@*Conclusion, significance and impact of study@#The isolated Vibrio harveyi WSC103 was successfully characterized as a novel multidrug-resistant strain. The ethanolic C. quadrangulare Kurz. and M. pudica extracts exhibited prominent vibriostatic and vibriocidal capacities. These finding is proven that C. quadrangulare Kurz. and M. pudica extracts would be an alternative anti-Vibrio agent for aquaculture infectious treatment.

Amplification of tlh gene in other Vibrionaceae specie by specie-specific multiplex PCR of Vibrio parahaemolyticus

Background The surveillance of Vibrio parahaemolyticus in the Chilean coast has been mainly performed by multiplex PCR amplification of three different hemolysin genes, which are specie-specific virulence factors. These genes are also employed in the determination of V. parahaemolyticus pathogenic load in seafood and for characterization of pathogenic strains associated to diarrhea cases in human. During environmental surveillance that we performed every summer, we occasionally observed a thermolabile hemolysin (tlh) PCR product of a slightly smaller size than expected, which was coincident with low loads of V. parahaemolyticus in the environment. In order to understand this observation, we probed the specificity of tlh primers for the detection of V. parahaemolyticus at different bacterial loads and DNA concentrations. Results Primers used for the detection of V. parahaemolyticus specific tlh amplified a slightly smaller tlh gene, which is found in Vibrio alginolyticus and other related strains. These amplicons were observed when V. parahaemolyticus was absent or in undetectable loads in the environment. Conclusions Surveillance of V. parahaemolyticus using tlh primers can be imprecise because amplification of a V. parahaemolyticus specific marker in V. alginolyticus and other related strains occurs. This situation complicates potentially the estimation of bacterial load in seafood, because do not ensure the correct identification of V. parahaemolyticus when his load is low. Additionally, it could complicate the tracking of outbreaks of V. parahaemolyticus infections, considering the genetic markers used would not be specie-specific.

Production of 2, 3-butanediol and succinic acid by Salinivibrio YS / 生物工程学报

The production of 2, 3-butanediol and succinic acid by a moderate halophile under anaerobic condition was investigated. This halophile, termed Salinivibrio YS, was isolated from the solid samples collected from Aydingkol Lake. Based on the single factor experiment, the parameters and their values for the production were obtained. Then, the optimum values of these parameters by the orthogonal experiments were obtained: temperature, 33 degrees C; initial pH of fermentation, 8.0; the pH during fermentation, 7.0; the concentration of acetic acid was 3 g/L and NaC1 was 10 g/L. Finally, a 3-L fermentation based on these conditions was carried out. After 108 h of fermentation under anaerobic condition, 35.05 g/L of 2, 3-butanediol and 22.46 g/L of succinic acid were obtained. About 50% of total glucose conversion was achieved. The study on 2, 3-butanediol and succinic acid by a halophile under anaerobic condition will expand the applications of halophiles and open a new area of production of 2, 3-butanediol and succinic acid.

Detecção molecular e resistência a antimicrobianos no grupo V. fluvialis - V. furnissii / Molecular detection and antimicrobial resistance in group V. fluvialis - V. furnissii

Vibrio fluvialis é um microorganismo que provoca a gastroenterite muito semelhante à cólera, mas também há relatos de casos extra-intestinais como sepse, ferida, peritonite e celulite hemorrágica e encefalite. Acredita-se que a infecção por esse microorganismo esteja vinculada ao consumo de peixes crus ou mal cozidos contaminados e / ou frutos do mar. A identificação dessa bactéria por métodos fenotípicos continua a ser um problema devido à sua grande semelhança com Aeromonas hydrophila e V.furnissii; por isso, a utilização de uma ferramenta de diferenciação entre essas espécies é importante. Nas últimas décadas, o aumento da resistência aos antimicrobianos tem sido um fator preocupante, porque ela interfere na escolha dos medicamentos para o tratamento eficaz e há uma necessidade de rápida produção de novos antibióticos. Ambientes costeiros e estuários estão em perigo de serem contaminados por esgoto, que pode conter drogas que agem de forma seletiva, permitindo o desenvolvimento de resistência aos antimicrobianos. Vários estudos demonstraram que estirpes clínicas de V. fluvialis são resistentes a múltiplas drogas. Objetivos - Desenvolver um marcador molecular baseado no 16S rDNA capaz de detectar o grupo V. fluvialis-V. furnissii, e avaliar a susceptibilidade a antibióticos destas espécies, principalmente a partir de amostras ambientais. Métodos - Após a elaboração dos iniciadores a partir do alinhamento das espécies do gênero Vibrio, foram utilizadas cepas identificadas fenotipicamente como V. fluvialis e de V. furnissii para a sua detecção molecular. O perfil de susceptibilidade a antibióticos pelo método da disco-difusão foi realizada, assim como a investigação molecular da presença do elemento SXT e de seus genes de resistência a antimicrobianos. Resultados: Com a utilização dos iniciadores desenvolvidos foi possível confirmar corretamente as espécies. Observou-se alta porcentagem de resistência a ampicilina e cefalotina, sendo que 65,9por cento...

Vibrio fluvialis is a microorganism that causes gastroenteritis very similar to cholera, however there are also reports of extraintestinal cases as sepse, skin wounds, peritonitis and hemorrhagic cellulitis and cerebritis. It is believed that infection by this organism is linked to the consumption of raw or undercooked contaminated fish and / or seafood. Identification of this bacteria by phenotypic methods remains a problem due to its great similarity with Aeromonas hydrophila and V.furnissii, therefore the use of a tool to differentiate these species is important. In recent decades, increasing antimicrobial resistance has been a concerning factor because it interferes in the choice of drugs for effective treatment and there is a need for rapid production of new antibiotics. Coastal and estuarine environments are in danger of being contaminated by sewage, which may contain drugs that will act selectively, allowing the development of antimicrobial resistance. Several studies have demonstrated that clinical strains of V. fluvialis are resistant to multiple drugs. Objectives - To develop a 16S rDNA - molecular marker able to detect the group V. fluvialis-V.furnissii, and to evaluate the antibiotic susceptibility of this species mainly from environmental samples. Methods - After the development of primers from alignment of the genus Vibrio strains phenotypically identified as V. fluvialis and V. furnissii were used for their molecular identification. The profile of antibiotic susceptibility was performed by the disk diffusion method, and the molecular investigation of the presence of the SXT element and their antimicrobial resistance genes. Results - The primers developed were able to confirm correctly the species. A high percentage of resistance to ampicillin and cephalothin was observed, V. fluvialis and V. furnissii showed resistance to at least two of the antibiotics used, 65.9 per cent and 43.24 per cent respectively. Only in one strain of...

Vibrio na água e sedimento de viveiros de quatro fazendas de carcinicultura no estado do Ceará, Brasil / Vibrio in pond water and sediment from four shrimp farms in Ceará state, Brazil

Foram realizadas 16 coletas, oito no período chuvoso e oito no período de estio, em quatro fazendas de carcinicultura do Estado do Ceará, nos estuários dos rios Jaguaribe (fazendas A e B) e Acaraú (fazendas C e D), totalizando 32 amostras. O objetivo da pesquisa foi quantificar e identificar Vibrio spp. nas amostras de água e sedimento. Os valores máximos da Contagem Padrão em Placas (CPP) de Vibrio spp. encontrados para as amostras de água, no período chuvoso, foram de 5.103 UFC/mL est. e, para o sedimento, de 7,5.103 UFC/g est. No período de estio, a CPP máxima para água foi de 4,35.102 UFC/mL est. e de 3,55.103 UFC/g est. para as amostras de sedimento. Foram obtidos 36 isolados de Vibrio: Vibrio spp. (17), V. vulnificus B1(3); V. calviensis (2), V. cholerae (2), V. litoralis (2), V. metschnikovii (2), V. agarivorans (1), V. alginolyticus (1), V. campbellii (1), V. coralliilyticus (1), V. diazotrophicus (1), V. logei (1), V. mediterranei (1), V. vulnificus B2 (1). O conhecimento da presença de espécies, nunca anteriormente isoladas em viveiros de fazendas de carcinicultura, tais como o V. coralliilyticus, V. agarivorans, V. litoralis e V. calviensis são importantes para o monitoramento microbiológico contínuo desses ambientes.

Sixteen collections were taken, eight during rainy season and eight on the draught season in four shrimp farms in Ceará State, from Jaguaribe River (farms A and B) and Acaraú River (farms C and D) estuaries, totalizing 32 samples. The goal of the research was to identify and quantify Vibrio spp. in water and in sediment samples. The maximum Standard Plate Count (SPC) values of Vibrio spp. calculated for the rainy season, from water, was 5.103 CFU/mL est., and for the sediment 7.5.103 CFU/g est.. For the draught season, maximum counting for water was 4.35.102 CFU/mL est. and for sediment 3.55.103 CFU/g est.. Thirty six strains of Vibrio were isolated: Vibrio spp. (17), V. vulnificus B1(3), V. calviensis (2), V. cholerae (2), V. litoralis (2), V. metschnikovii (2), V. agarivorans (1), V. alginolyticus (1), V. campbellii (1), V. coralliilyticus (1), V. diazotrophicus (1), V. logei (1), V. mediterranei (1), V. vulnificus B2 (1). The isolation of species never previously isolated of shrimp farms, such as V. coralliilyticus, V. agarivorans, V. litoralis and V. calviensis are important for the continuous microbiological monitoring these environments.

Non-specific Immune Response of Rainbow Trout (Oncorhynchus Mykiss) by Dietary Heat-inactivated Potential Probiotics

BACKGROUND: The effects of the dietary administration of two heat-inactivated whole bacteria from the Vibrionaceae family, singly or combined, on innate immune response of the rainbow trout were studied. The two bacteria (Pdp11 and 51M6), which were obtained from the skin of rainbow trout, showed in vitro characteristics that suggested they could be considered as potential fish probiotics. METHODS: The fish were fed four different diets: control (non-supplemented), or diets supplemented with heat-inactivated bacteria at 10(8) cfu/g Pdp11, 10(8) cfu/g 51M6 or with 0.5x10(8) cfu/g Pdp11 plus 0.5x10(8) cfu/g 51M6 for 4 weeks. Six fish were sampled at weeks 1, 2, 3 and 4, and then the main humoral (natural haemolytic complement activity and serum peroxidase content) and cellular innate immune responses (leucocyte peroxidase content, phagocytosis, respiratory burst and cytotoxicity) were evaluated. RESULTS: The serum peroxidase content and the natural haemolytic complement activity increased with time, reaching the highest values in the third and fourth weeks of feeding, respectively. The phagocytic ability of specimens fed the mixture of the two inactivated bacteria was significantly higher than in the controls after 2 and 3 weeks of treatment. The same activity increased significantly in rainbow trout fed the Pdp11 diet for 2 weeks or the 51M6 diet for 3 weeks. Respiratory burst activity was unaffected by all the experimental diets at all times assayed. Cytotoxic activity had significantly increased after 3 weeks in fish fed the 51M6 diet. CONCLUSION: Our results demonstrated the usefulness of incorporating inactivated probiotic bacteria into fish diets.

Perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de bactérias isoladas em diferentes sistemas de cultivo de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) / Profile of antimicrobial resistance in bacterial populations recovered from different Nile tilapia (Oreochromis niloticus) culture systems

Caracterizaram-se as populações bacterianas isoladas de três sistemas de cultivo de tilápias, sem utilização prévia de antimicrobianos. No sistema 1 usou-se tanque de alvenaria com arraçoamento, no sistema 2, tanque de terra com arraçoamento e no sistema 3, tanque de terra com adubação orgânica. Posteriormente, foi verificado o perfil qualitativo de resistência a antimicrobianos de 98 amostras bacterianas. Membros da família Vibrionaceae predominaram nos três sistemas analisados. Observou-se elevado número de bactérias resistentes principalmente à ampicilina e à eritromicina. Bactérias resistentes à norfloxacina e à gentamicina não foram freqüentes e cerca de 50 por cento das amostras dos isolados bacterianos foram resistentes à tetraciclina. Dentre as amostras testadas, 96 por cento apresentaram resistência simultânea a dois ou mais antimicrobianos (MAR>0,2). O índice MAR médio para os três sistemas de criação foi 0,4, e foram mesmo considerados fontes de risco para disseminação de bactérias resistentes

Bacterial populations from different tilapia culture system with no antimicrobial use were characterized. Concret pond and commercial feed, land pond and commercial feed, and land pond and animal manure were used in systems I, II and III, respectively. Ninety-eight bacterial strains were subjected to sensitivity testing. Members of Vibrionaceae were the most prevalent in all systems analysed. The most bacterial strains were resistant to ampicillin and erithromicin, but resistance to norfloxacin and gentamicin were uncommon. A half to bacterial isolates was resistant to tetracycline. From the 98 bacterial isolates, 96 percent were resistant to two or more antimicrobials. The multiple antimicrobial resistance index was determined and it was similar for all systems analyzed (Mar= 0.4), indicating a high risk source for multiple antibiotic resistance

Vibrio spp. isolados de mamíferos marinhos capturados na região litorânea do Sudeste ao Sul do Brasil / Vibrio spp. isolated from marine mammals captured in coastal regions from southwestern to southern Brazil

Avaliou-se a incidência de Vibrio spp. a partir de lesões superficiais em mamíferos marinhos encalhados ou capturados em redes de pesca nas regiões litorâneas do Sudeste (Rio de Janeiro) e Sul (RS) do Brasil. Foram coletadas 198 amostras, pelas instituições de pesquisa DEENSP, GEMARS e Ceclimar, as quais foram enviadas ao Labent/IOC/FIOCruz, onde foram submetidas ao enriquecimento em Agua Peptonada Alcalina (APA) adicionada de 1 por cento e 3 por cento de NaCl e in-cubadas a 37°C por 18-24 horas. Em seqüência foram semeadas em meio Agar Tiossulfato Citrato Bile Sacarose (TCBS) e as colônias suspeitas submetidas à caracterização bioquímica. Foram isoladas 108 cepas bacterianas, destacando-se Vibrio alginolyticus, V. parahaemolyticus, V. vulnificus e V. fluvialis como os principais patógenos isolados. Os resultados obtidos apontam para a necessidade de implementar atividades de vigilância e monitorização bacteriológica, particularmente de espécies selvagens, e reforçar os programas de proteção ambiental em casos de mamíferos marinhos ameaçados de extinção.

In the present investigation was evaluated the incidence of Vibrio spp. from superficial lesions at marine mammals beached or captured by fishing net in the southwestern (RJ) and southern (RS) coastal regions of Brazil. One hundred and ninety eight swabs were collected by DEENSP, GEMARS and Ceclimar institutes and sent to Labent/IOC/FIOCruz where the samples were submitted to enrichment in Alkaline Peptone Water (APW) added with 1 percent and 3 percent of sodium chloride (NaCl) incubated at 37°C for 18-24 hours. After the samples were streaked onto Thiossulfate Citrate Bile Sucrose Agar (TCBS), the suspected colonies were submitted to biochemical characterization. The results showed 108 strains, and Vibrio alginolyticus, V. parahaemolyticus, V. vulnificus and V. fluvialis were the main pathogens isolated. These results appoint the importance of surveillance and microbiological monitoring accomplishment and reinforcement of environmental protective programs applied to marine mammals endangered with extinction.

A Case of Aeromonas hydrophila Necrotizing fasciitis in Patient on Hemodialysis / 감염과화학요법

Aeromonas hydrophila is a facultative, anaerobic gram-negative bacillus. It's a member of the family Vibrionaceae. Aeromonas, which is known to cause gastroenteritis and wound infections ranging from mild cellulitis to fulminant myonecrosis. It is responsible for opportunistic infections in patients with compromised immune function due to an underlying disease such as malignant hematological disorders, liver cirrhosis, and malignant neoplasm. We report a case of 72-year-old woman who recovered from necrotizing fasciitis caused by A. hydrophila. The patient had undergone prolonged hemodialysis and had no history of trauma.

A Case of Aeromonas hydrophila Necrotizing fasciitis in Patient on Hemodialysis / 감염과화학요법

Aeromonas hydrophila is a facultative, anaerobic gram-negative bacillus. It's a member of the family Vibrionaceae. Aeromonas, which is known to cause gastroenteritis and wound infections ranging from mild cellulitis to fulminant myonecrosis. It is responsible for opportunistic infections in patients with compromised immune function due to an underlying disease such as malignant hematological disorders, liver cirrhosis, and malignant neoplasm. We report a case of 72-year-old woman who recovered from necrotizing fasciitis caused by A. hydrophila. The patient had undergone prolonged hemodialysis and had no history of trauma.

Estudo de Vibrio ssp. potencialmente patogênicos através de métodos moleculares / Study of virulence factors in Vibrio ssp through molecular methods

De forma similar ao V. cholerae, outros vibrios potencialmente patogênicos podem causar doença no homem em uma variedade de formas de quadros auto-limitantes até diarréia severa a cólera, septicemia, celulite e infecções de pele. Com o advento da biologia molecular, novas técnicas vêm sendo empregadas para o estudo do gênero Vibrio com o intuito de determinar presença de fatores de virulência, traçar rotas de transmissão, ou ainda como ferramenta no estudo epidemiológico destes organismos. O presente estudo visou pesquisar a presença de genes codificadores de virulência em cepas de V. cholerae provenientes de vários países, e ainda estudar do polimorfismo genético, com o emprego de iniciadores para seqüências ERIC e BOX e eletroforese em campo pulsado (PFGE), para determinar a relação entre cepas de V. cholerae, V. mimicus, V. parahemolyticus, V. fluviais e V. alginolyticus isolados de amostras de ostras e mexilhões no Brasil, e V. metschnikovii isolados de amostras de peixe isolados de outros países bem como com o Padrão ATCC de cada espécie. Foi realizada também, a confirmação da posição taxonômica de cepas de V. metschnikovii isolados de amostras de peixes, e a comparação dos padrões de bandas com isolados de outros países e cepa padrão da espécie. A posição taxonômica de cepas de V. metschnikovii foi confirmada através da Hibridização DNA/DNA, e o estudo do polimorfismo genético através de ERIC PCR, BOX PCR e eletroforese em campo pulsado demonstrou que essas são poderosas ferramentas para estudos epidemiológicos do gênero Vibrio.

Patógenos emergentes (aeromonas hydrophila, vibrio vulnificus e plesiomonas shigelloides) e resistência antimicrobiana em mexilhões na Baía de Guanabara: implicações para a saúde pública / Emergent Patógenos (aeromonas hydrophila, vibrio vulnificus and plesiomonas shigelloides) and resistance antimicrobian in mussels in the Baía de Guanabara: implications for the public health

O ecossistema aquático é habitado por mexilhões, animais filtradores que refletem a qualidade ambiental através da sua análise microbiológica. Neste estudo pretendeu-se avaliar a presença de patógenos, clássicos (Salmonella sp.) e emergentes (Vibrio vulnificus, Aeromonas hydrophila e Plesiomonas shigelloides), a partir de mexilhões in natura e pré-cozidos isolados de uma Estação Experimental de Cultivo de Mexilhões situada em Jurujuba, Niterói, Rio de Janeiro. Embora, não tenha sido identificado o patógeno Salmonella sp., as análises laboratoriais realizadas permitiram o isolamento de diversas espécies de microrganismos pertencentes às famílias Vibrionaceae e Aeromonadaceae, algumas com relevante potencial patogênico (Vibrio parahaemolyticus, V. vulnificus e A. hydrophila). Diversos microrganismos isolados apresentaram perfil de resistência a antimicrobianos utilizados na clínica humana (ampicilina, tetraciclina, nitrofurantoína, sulfametoxazol-trimetoprim e pefloxacina). Considerando a relevância epidemiológica dos agentes patogênicos identificados e os resultados obtidos nesta investigação, faz-se urgente alertar as autoridades sanitárias quanto à presença desses patógenos na cadeia alimentar e no ambiente. Dada sua capacidade de causar enfermidades diversas nas populações humanas após consumo de mexilhões in natura ou pré-cozidos, torna-se premente e de extrema importância o desenvolvimento de estratégias de vigilância epidemiológica e sanitária, assegurando, entre outras medidas, o monitoramento constante dos mexilhões oriundos da Baía de Guanabara, no sentido de prevenir ou minimizar os riscos nas diferentes etapas da sua extração e comercialização.

Ocorrência de Vibrio spp potencialmente patogênicos em moluscos bivalves comestíveis comercializados nos anos 2000 a 2002 nos municípios da área de influência da Baía de Todos os Santos e Valença, Bahia - Brasil / Presence of potentially pathogenic Vibrio spp in edible bivalve shellfish commercialized during the years of 2000 to 2002 in the area of the Baía de Todos os Santos and Valença, Bahia - Brazil

Introduçäo. Víbrios estäo associados a diarréia em humanos após o consumo de água ou moluscos bivalves contaminados. Objetivos. Pesquisar a ocorrência de Vibrio ssp em moluscos bivalves comestíveis comercializados entre 2000 e 2002 nos municípios da área de influência da Baía de Todos os Santos e Valença. Materiais e Métodos. 122 amostras (107 de moluscos bivalves; 15 de zooplâncton) foram analisadas por métodos microbiológicos e moleculares (PCR; ERIC-PCR). Rsultados. 1077 cepas foram identificadas sendo 17 cepas Vibrio cholerae näo-O1 näo O139; 216 cepas Vibrio parahaemolyticus; 64 cepas Vibrio alginolyticus; 24 cepas Vibrio fluvialis e 14 cepas Vibrio vulnificus. As cepas de V. cholerae apresentam os cassetes de virulência incompletos, especialmente pela ausência dos genes ctxA E tcpA. Os dendrogramas de similaridade genética intraespecífica mostraram que há diversidade genética entre as espécies e cepas bacterianas isoladas. Conclusäo. Há risco de se contrair gastroenterite tanto pelo consumo de moluscos bivalves crus, mal cuzidos ou preparados em más condiçöes de higiene, adquiridos nos municípios da área de influência da Baía de Todos os Santos e Valença. As cepas implicadas em surtos de gastroenterites podem ser identificadas com futura contruçäo de banco de dados para uso em Vigilância Epidemiológica de gastroenterites, a partir dos perfis genotípicos obtidos via ERIC-PCR.

Diversidade genética e genes de virulência em Vibrio mimicus / Genetic diversity and genes of virulence in Vibrio mimicus

Non-O1. Atualmente está claro que as duas espécies diferem em um número significativo de características fenotípicas e genotípicas. Ambas as espécies têm como habitat natural os ecossistemas aquáticos, onde podem ser encontradas sob a forma livre ou em associação com outros organismos. Para melhor compreender a biologia e genética do V. mimicus nós trabalhamos com isolados ambientais e clínicos analisando sua diversidade genômica e caracterizando genes associados à virulência. Foi demonstrado que através do perfil isoenzimático (MEE) é possível separar estas duas espécies relacionadas em dois grupos distintos, sendo para isto necessário apenas a combinação de quatro loci. Considerando os resultados das análises por RAPD-PCR, REP-PCR, por perfil de isoenzimas e até mesmo os resultados das provas bioquímicas, V. mimicus têm se apresentado como um grupo geneticamente heterogêneo. Também demonstramos que a abordagem que usa PCR específico para a região intergênica dos genes ribossomais, proposta por Chun et al. (1999), para distinguir as duas espécies, dá resultados falso positivos para V. mimicus. Detectamos em 50 (por cento) de nossas amostras o gene da toxina termoestável. Determinamos, pela primeira vez, que o gene stm presente em V. mimicus está associado às seqüências repetitivas de V. cholerae e que estas seqüências estão também ladeando várias outras regiões como acontece em V. cholerae. Foi identificada a presença, em dois distintos isolados ambientais, do genoma completo do VPIF (profago contendo a ilha de patogenicidade de vibrio). O isolado 573 carreia um novo alelo do gene tcpA e o outro (343) possui alelo similar áquele característico de V. cholerae biotipo clássico. Os dois isolados contém também o genoma do CTXF; o isolado 573 possui cópia completa correspondente ao genótipo encontrado em isolados do biotipo El Tor isolado na Austrália enquanto o outro (343) apresentada todos os genes da região do core exceto o operon ctxAB...

Diversidade genética e genes de virulência em Vibrio Mimicus / Genetic diversity and virulence genes in Vibrio Mimicus

A espécie V.Mimicus foi proposta inicialmente para classificar isolados bioquimicamente atípicos de V. cholerae non-01. Atualmente está claro que as duas espécies diferem em um número significativo de características fenotípicas e genotípicas. Ambas as espécies têm como habitat natural os ecossistemas aquáticos, onde podem ser encontradas sob a forma livre ou em associação com outros organismos. Para melhor compreender a biologia e genética do V.Mimicus nós trabalhamos com isolados ambientais e clínicos analisando sua diversidade genômica e caracterizando genes associados à virulência. Foi demonstrado que através do perfil isoenzimático(MEE) é possível separar estas duas espécies relacionadas em dois grupos distintos, sendo para isto necessário apenas a combinação de quatro loci. Considerando os resultados das análises por RAPD-PCR, REP-PCR, perfil de isoenzimas e até mesmo nos resultados das provas bioquímicas, V.Mimicus têm se apresentado como um grupo geneticamente heterogênio. Também demonstramos que a abordagem que usa PCR específico para região intergênica dos genes ribossomais, proposta por Chun et al(1999), para distinguir as duas espécies, dá resultados falso positivos para V. Mimicus. Detectamos em 50 por cento de nossas amostras o gene da toxina termoestável. Determinamos, pela primeira vez, que o gene stm presente em V. Mimicus está associado às sequências repetitivas de V. Cholerae(VCR) e que estas sequências estão também ladeando várias outras regiões como acontece em V.Cholerae. Foi identificada a presença, em dois distintos isolados ambientais, do genoma completo do VPI(profago contendo a ilha de patogenicidade de vibrio). O isolado 573 carreia um novo alelo do gene tcpA e o outro(343) possui alelo similar aquele característico de V.Cholerae biotipo clássico. Os dois isolados contém também o genoma do CTX, o isolado 573 possui cópia completa correspondente ao genótipo encontrado em isolados do biotipo ElTor isolado na Austrália enquanto que o outro(343) apresentava todos os genes da região do core exceto o operon ctxAB. Podemos concluir que distintos clones de V.Mimicus não toxigênicos estão evoluindo através da aquisição independente de distintas ilhas de patogenicidade. Esta espécie pode atuar na disseminação de genes de virulência assim como representar um reservatório natural do gene da toxina termoestável. O conjunto dos resultados sugerem ser possível a emergência de um novo isolado de V. Mimicus toxigênico e epidêmico.

A Case of Septicemia by Plesiomonas shigelloides / 대한임상미생물학회지

Plesiomonas shigelloides is an oxidase-positive, fermentative, gram-negative rod currently classified as a member of the family Vibrionaceae. P. shigelloides has been implicated as the causative agents of gastroenteritis as well as extraintestinal infections such as septicemia, neonatal meningitis, cellulitis, and cholecystitis. Septicemia due to P. shigelloides is very rare but is severe and has been associated with a high mortality rate. We report a case of septicemia caused by P. shigelloides in a 66-year-old male with diabetes mellitus who had diagnosed as liver cirrhosis 7 years before.

Microbiological and chemical changes in freshwater prawn ("Macrobrachium rosembergii") stored under refrigeration

Microbiological and chemical changes were evaluated in freshwater prawn stored under refrigeration at 0ºC and 5ºC during 10 days, with special emphasis on indole production as chemical spoilage indicator. The total psychrotrophic and indole positive microflora were mainly mesophilic, with indole positive microorganisms being less than 10(per cent) of the total microflora after 10 days storage under refrigeration. Bacteria from "Enterobacteriaceae" and "Vibrionaceae" families prevailed among the isolated indole positive strains. The use of the Most Probable Number-MPN method, using tryptone broth as culture medium, was the most reliable approach for the quantitative evaluation of the indole positive microflora. The stored samples showed increases in pH, L-tryptophan and total volatile bases (TBV), which were more intensive at 5ºC. The psychrotrophic counts and TVB values of samples stored at 0ºC werw lower than the recommended limits (1.0E+7 CFU/g and 30 mg N/100g, respectively), even after 10 days storage. However, in samples stored at 5ºC, these values were reached after 10 and 5 days, respectively. The presence of indole in levels above the limit recommended by FDA/USA (25(micro)g/100g) was confirmed in only one sample, suggesting that this substance, alone wouldn't be a good indicator of freshwater prawn quality stored under refrigeration

Bacterial contamination of bottle milk in infants under 6 months in Children's Hospital, Bangkok, Thailand.

The bacterial contamination of bottle milk samples obtained randomly from 500 infants under 6 months of age who came to the Out-patient Department of Children's Hospital Bangkok was determined by collecting bottle milk samples prepared at home following interview of their caretakers after obtaining their consent. Bacterial contamination was found in 91.8% (459/500) of bottle milk samples. Among the positive samples, 82.8% (380/459) contained enteric bacteria, another 17.2% were unidentified bacteria. The dominant enteric bacteria isolated from bottle milk were Klebsiella spp (56.6%), Enterobacter spp (41.3%), Aeromonas spp (14.4%), E. coli (13.4 %) and Vibrio cholerae non 0-1 (1.8%). Isolated E. coli were further identified as enteropathogenic E. coli (7.8%, 4/51) and enterotoxigenic E. coli (3.9%, 2/51). About 74% of the contaminated bottle milk contained one type of bacteria, 23.7% had two types and 2.3 % had 3 or more types of bacteria. A level of bacterial contamination greater than the US government limited number (USGLN 2x10(4) CFU/ml) was found in 86.4% of total examined samples (432/500) [geometric mean (GM) of 2.9 x 10(6) CFU/ml]. About 66% (333/500) of bottle milk samples had coliforms greater than the USGLN (1 x l0(2) CFU/ml) with GM of 1.3 x 10(4) CFU/ml. Therefore, in the preparation of bottle milk, feeding practice should be emphasized in every setting of maternal-child health care and promotion of breast-feeding should be encouraged by the health personnel.

Evaluation of 10 Tube System for the Identification of Enterobacteriaceae / 대한임상병리학회지

BACKGROUND: The selection of identification (ID) system of Enterobacteriaceae depends mainly on accuracy of identification system, cost of operation and convenience of testing. Commercial ID kits are easy to use but too expensive. Therefore, we designed a computerized ID system based on 10 tubes which were composed of 14 conventional biochemical tests to identify the Enterobacteriaceae and Vibrionaceae. The purpose of this present study was to assess the clinical usefulness of 10 tube system as an identification system for Enterobacteriaceae in clinical microbiology laboratories. METHODS: During the period of January 1998, 189 Enterobacteriaceae and 2 Aeromonas spp. consecutively isolated from clinical specimens were simultaneously identified by 10 tube system and the API rapid ID 32 E. Fourteen conventional biochemical tests used in 10 tube system were lactose, sucrose, and H2S in Kligler's iron agar media; motility, indole, and ornithine decarboxylase in motility-indole-ornithine decarboxylase agar media; citrate, urease, lysine decarboxylase, phenylalanine deaminase, arginine dihydrolase, arabinose, trehalose, and adonitol. Identification program used in 10 tube system were % ID method and ID score method. RESULTS: Among the 191 isolates, agreement rate of identification between 10 tube system and API rapid ID 32 E were 96.0% to the species level and 99.4% to the genus level. And identification accuracy of 10 tube system was 90.6% to the species level and 93.2% to the genus level. CONCLUSIONS: 10 tube system has been shown to be an accurate, cost-effective alternative to the use of commercial kit systems for identification of Enterobacteriaceae.

Numerical taxonomy of vibrionaceae isolated from bivalves and fishes in Valparaíso coasts Chile

Se realizó un estudio taxonómico de 123 cepas de la familia vibronaceae aisladas desde bivaldos y peces en las costas de Valparaíso. Todas las cepas fueron caracterizadas con 86 test fenotípicos que se agruparon usando el coeficiente Ssm y el análisis de la unión de UPGMA. Las especies fueron agrupadas en tres fenones con un nivel de similitud del 80 porciento. Estas especies fueron identificadas como aeromonas hydrophila, vibrio sp. y plesiomonas shigelloides