Overexpression of a recombinant gamma-glutamyltranspeptidase from Escherichia coli Novablue.

A truncated Escherichia coli Novablue gamma-glutamyltranspeptidase (EcGGT) gene, lacking the first 48-bp coding sequence for part of the signal sequence, was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into expression vector pQE-30 to generate pQE-EcGGT. The maximum production of His6-tagged enzyme by E. coli M15 (pQE-EcGGT) was achieved with 0.1 mM IPTG induction for 12 h at 20 degrees C. The overexpressed enzyme was purified to homogeneity by nickel-chelate chromatography to a specific transpeptidase activity of 4.25 U/mg protein and a final yield of 83%. The molecular masses of the subunits of the purified enzyme were determined to be 41 and 21 kDa respectively by SDS-PAGE, indicating the precursor EcGGT still undergoes the post-translational processing even in the truncation of signal sequence. His6-tagged EcGGT migrated relative to the molecular mass of approximately 120 kDa and its heterodimeric structure was confirmed by a native-PAGE gel.

Tiempo de normalización de los niveles de gammaglutamil transpeptidasa en ovinos con fasciolosis experimental tratados con triclabendazol / Normalization period of gammaglutamyl transpeptidase serum levels in sheep with fasciolosis treated with triclabendazole

Se determinaron los niveles séricos de gammaglutamil transpoptidasa (GGT) en ganado ovino infectado experimentalmente con Fasciola hepatica, con el objetivo de valorar el tiempo en que se normalizan después del tratamiento con triclabendazol. Se empleó un lote de corderos adultos y se conformaron 3 lotes de 5 animales cada uno. Los lotes 1 y 2 fueron infectados con 60 metacarcarias de Fasciola hepatica, los días 1, 30 y 75 del experimento. A los 90 días de la infección, se trató el lote 1 con triclabendazol a una dosis de 10 mg/kg; el lote 3 no fue infectado ni tratado, fue el testigo negativo. Los niveles séricos de GGT fueron cuantificados 8 días antes de la infección y posteriormente cada 30 días durante 165. Se encontró un incremento significativo (P< 0.05) de GGT en los lotes 1 y 2 en relación con el 3 posinfección, con una x de 35.4 y de 44.7 UY, y un pico a los 90 días con una x de 71.7 y 57.3 unidades internacionales, respectivamante. Los niveles séricos de GGT se normalizaron en los ovinos a los 75 días de haber sido tratados con triclabendazol