Analysis and research on fitness biomarkers in volleyball athletes during competition / Análise e pesquisa sobre biomarcadores de condicionamento físico em atletas de vôlei durante competição / Análisis e investigación de los biomarcadores de aptitud física en atletas de voleibol durante competición

ABSTRACT Introduction: Athletes' physical conditioning is closely related to the type of sport dedicated, training levels, intrinsic conditions of the athletes, type of load, and recovery status after exercise training. There is ample documentation on the physical conditioning of volleyball athletes in normal situations, but the literature is lacking in surveys during competition periods. Objective: To explore the physical conditioning through analysis of body biomarkers in volleyball athletes in competition. Methods: Before and after the summer training, fasting urine and blood samples were collected from five female volleyball players. Biomarkers involving white blood cells, red blood cells, hemoglobin, etc., were detected, recorded, and the data were statistically analyzed. After the general analysis of the sample, a case study of two elite female athletes was conducted. Results: The urea nitrogen value of athlete A decreased from 7.62mmol/L to 4.91mmol/L, and the urea nitrogen value of athlete B decreased from 6.91mmol/L to 6.57mmol/L; the urea nitrogen values of both athletes showed a downward trend. Athlete A's physical function status decreased significantly after summer training, while Athlete B's physical function status improved slightly. Conclusion: During the summer training period, it is necessary to perform continuous index measurements on the athletes to increase the timeliness of the data, which is conducive to in-depth analysis of the athletes' fitness status. Level of evidence II; Therapeutic studies - investigation of treatment outcomes.

RESUMO Introdução: O condicionamento físico dos atletas está intimamente relacionado ao tipo de esporte dedicado, níveis de treinamento, condições intrínsecas das atletas, tipo de carga e status de recuperação após o treinamento dos exercícios. Há vasta documentação sobre o condicionamento físico dos atletas de vôlei em situações normais, porém a literatura deixa a desejar nos levantamentos durante o período de competições. Objetivo: Explorar o condicionamento físico através de análise de biomarcadores corporais nos atletas de vôlei em competição. Métodos: Antes e depois do período de treinamento de verão, foram coletadas amostras de urina e sangue, em jejum, de cinco jogadoras de vôlei feminino. Biomarcadores envolvendo glóbulos brancos, glóbulos vermelhos, hemoglobina, etc. foram detectados, registrados, e os dados foram analisados estatisticamente. Após a análise geral da amostra, foi realizado um estudo de caso de duas atletas de elite. Resultados: O valor de nitrogênio de ureia da atleta A diminuiu de 7,62mmol/L para 4,91mmol/L, e o valor do nitrogênio de ureia da atleta B diminuiu de 6,91mmol/L para 6,57mmol/L, os valores de nitrogênio da ureia de ambas as atletas apresentaram tendência de queda. O estado de função física da atleta A diminuiu significativamente após os treinos de verão, enquanto o estado de função física da atleta B melhorou ligeiramente. Conclusão: Durante o período de treinamento de verão, é necessário realizar uma medição contínua do índice sobre os atletas para aumentar a pontualidade dos dados, o que é propício à análise aprofundada do estado de condicionamento físico das atletas. Nível de evidência II; Estudos terapêuticos - investigação dos resultados do tratamento.

RESUMEN Introducción: El acondicionamiento físico de los deportistas está íntimamente relacionado con el tipo de deporte al que se dedican, los niveles de entrenamiento, las condiciones intrínsecas de los deportistas, el tipo de carga y el estado de recuperación tras los ejercicios de entrenamiento. Existe una amplia documentación sobre el acondicionamiento físico de los deportistas de voleibol en situaciones normales, pero la literatura deja mucho que desear en los estudios durante el periodo de competiciones. Objetivo: Explorar la condición física mediante el análisis de biomarcadores corporales en atletas de voleibol en competición. Métodos: Antes y después del periodo de entrenamiento de verano, se recogieron muestras de orina y sangre en ayunas de cinco jugadoras de voleibol. Se detectaron y registraron los biomarcadores relativos a los glóbulos blancos, los glóbulos rojos, la hemoglobina, etc., y los datos se analizaron estadísticamente. Tras el análisis general de la muestra, se realizó un estudio de casos de dos atletas de élite. Resultados: El valor de nitrógeno ureico del atleta A disminuyó de 7.62mmol/L a 4.91mmol/L, y el valor de nitrógeno ureico del atleta B disminuyó de 6.91mmol/L a 6.57mmol/L, los valores de nitrógeno ureico de ambos atletas mostraron una tendencia a la baja. El estado de la función física del atleta A disminuyó significativamente después del entrenamiento de verano, mientras que el estado de la función física del atleta B mejoró ligeramente. Conclusión: Durante el período de entrenamiento de verano, es necesario realizar mediciones continuas de los índices en los atletas para aumentar la puntualidad de los datos, lo que favorece el análisis en profundidad del estado de forma física de los atletas.Nivel de evidencia II; Estudios terapéuticos - investigación de los resultados del tratamiento.

Deep learning for analysis of changes in vital capacity and blood markers after swimming matches based on blended learning / Aprendizado profundo para análise das alterações da capacidade vital e marcadores sanguíneos após jogos de natação baseados no aprendizado combinado / Aprendizaje profundo para el análisis de los cambios en la capacidad vital y los marcadores sanguíneos después de los partidos de natación basados en el aprendizaje combinado

ABSTRACT Introduction Nowadays, more people are concerned with physical exercise and swimming competitions, as a major sporting event, have become a focus of attention. Such competitions require special attention to their athletes and the use of computational algorithms assists in this task. Objective To design and validate an algorithm to evaluate changes in vital capacity and blood markers of athletes after swimming matches based on combined learning. Methods The data integration algorithm was used to analyze changes in vital capacity and blood acid after combined learning swimming competition, followed by the construction of an information system model to calculate and process this algorithm. Results Comparative experiments show that the neural network algorithm can reduce the calculation time from the original initial time. In the latest tests carried out in about 10 seconds, this has greatly reduced the total calculation time. Conclusion According to the model requirements of the designed algorithm, practical help has been demonstrated by building a computational model. The algorithm can be optimized and selected according to the calculation model according to the reality of the application. Level of evidence II; Therapeutic studies - investigation of treatment outcomes.

RESUMO Introdução Atualmente, mais pessoas preocupam-se com o exercício físico e as competições de natação, como evento esportivo de destaque, tornou-se foco de atenção. Tais competições exigem atenção especial aos seus atletas e o uso de algoritmos computacionais auxiliam nessa tarefa. Objetivo Projetar e validar um algoritmo para avaliação das alterações da capacidade vital e marcadores sanguíneos dos atletas após os jogos de natação baseados no aprendizado combinado. Métodos O algoritmo de integração de dados foi usado para analisar as mudanças de capacidade vital e ácido sanguíneo após competição de natação de aprendizado combinado, seguido à construção de um modelo de sistema de informação para calcular e processar esse algoritmo. Resultados Experiências comparativas mostram que o algoritmo de rede neural pode reduzir o tempo de cálculo a partir do tempo inicial original. Nos últimos testes levados à cabo em cerca de 10 segundos, isto reduziu muito o tempo total de cálculo. Conclusão De acordo com os requisitos do modelo do algoritmo projetado, foi demonstrada a ajuda prática pela construção de um modelo computacional. O algoritmo pode ser otimizado e selecionado de acordo com o modelo de cálculo, segundo a realidade da aplicação. Nível de evidência II; Estudos terapêuticos - investigação dos resultados do tratamento.

RESUMEN Introducción Hoy en día, cada vez más personas se preocupan por el ejercicio físico y las competiciones de natación, como evento deportivo destacado, se han convertido en un foco de atención. Estas competiciones requieren una atención especial para sus atletas y el uso de algoritmos computacionales ayuda en esta tarea. Objetivo Diseñar y validar un algoritmo para evaluar los cambios en la capacidad vital y los marcadores sanguíneos de los atletas después de los partidos de natación basado en el aprendizaje combinado. Métodos Se utilizó el algoritmo de integración de datos para analizar los cambios de la capacidad vital y la acidez de la sangre tras la competición de natación de aprendizaje combinado, seguido de la construcción de un modelo de sistema de información para calcular y procesar este algoritmo. Resultados Los experimentos comparativos muestran que el algoritmo de la red neuronal puede reducir el tiempo de cálculo con respecto al tiempo inicial. En las últimas pruebas realizadas en unos 10 segundos, esto redujo en gran medida el tiempo total de cálculo. Conclusión De acuerdo con los requisitos del modelo del algoritmo diseñado, se ha demostrado la ayuda práctica mediante la construcción de un modelo computacional. El algoritmo puede optimizarse y seleccionarse según el modelo de cálculo en función de la realidad de la aplicación. Nivel de evidencia II; Estudios terapéuticos - investigación de los resultados del tratamiento.

Correlation between salivary biomarkers and plaque-induced gingivitis exacerbated by pregnancy

Objetive: To evaluate the correlation between salivary biomarkers (the salivary antioxidant ability, salivary level of polyphenols, and other antioxidants) with plaque-induced gingivitis exacerbated by pregnancy in pregnant and nonpregnant women. Material and Methods: For this observational study, medical records, dental examinations, and analyses of saliva samples were carried out in pregnant and nonpregnant women. A p-value of <0.05 was considered significant. Results: The pregnant women (n =17) exhibited a lower antioxidant capacity (p-value=0.0041), higher levels of polyphenols, gingival index, bleeding on probing, and subjects consuming mineral-enriched products (p-value from <0.0001 to 0.0466), and unchanged levels of phosphotungstic acid reactive substances, proteins, oral hygienic habits, plaque index and probing depth (p-value from 0.0683 to 0.8358), in comparison with the nonpregnant women (n=9). Also, a positive correlation between the gingival index and salivary polyphenol content was observed (r-value = 0.4087, p-value = 0.0202). Conclusion: The salivary polyphenols correlate with plaque-induced gingivitis exacerbated by pregnancy, suggesting a deficiency of salivary antioxidant protection.

Objetivo: Evaluar la correlación entre los biomarcadores salivales (la capacidad antioxidante salival, el nivel salival de polifenoles y otros antioxidantes) con la gingivitis inducida por placa exacerbada por el embarazo en mujeres embarazadas y no embarazadas. Material y Métodos: Para este estudio observacional, se realizaron registros médicos, exámenes dentales y análisis de muestras de saliva en mujeres embarazadas y no embarazadas. Se consideró significativo un valor de p<0,05. Resultados: Las gestantes (n=17) presentaron menor capacidad antioxidante (p=0,0041), mayores niveles de polifenoles, índice gingival, sangrado al sondaje y los sujetos que consumían productos enriquecidos con minerales (p<0,0001 a p<0,0466), y no hubo diferencias en los niveles de sustancias reactivas al ácido fosfotúngstico, proteínas, hábitos de higiene bucal, índice de placa y profundidad de sondaje (p=0,0683 a 0,8358), en comparación con las mujeres no embarazadas (n=19). Además, se observó una correlación positiva entre el índice gingival y elcontenido de polifenoles salivales (r = 0,4087, p= 0,0202). Conclusión: Los polifenoles salivales se correlacionan con la gingivitis inducida por placa y exacerbada por el embarazo, lo que sugiere una deficiencia de protección antioxidante salival.

Gingival crevicular fluid as Biomarker's source for alzheimer's disease / Fluido crevicular gingival como biomarcador de enfermedad de Alzheimer

Abstract Periodontitis is a low-grade inflammatory disease caused by a subgingival dysbiotic microbiota. Multiple studies have determined the higher prevalence of tooth loss and poor oral hygiene in patients with Alzheimer's disease (AD). However, the periodontal diagnosis, periodontal bacteria or mediators has not been measured to date. Aim: To determine the periodontal status, the pro-inflammatory mediators, Porphyromonas gingivalis load, and Apoliporpotein E (ApoE) in patients with AD. A complete dental examination was performed on 30 patients, and cognitive status was determined by the Montreal Cognitive Assessment (MoCA). Subgingival microbiota and GCF samples were then taken from all patients from the deepest sites. Total DNA was isolated from the microbiota samples for the quantification of the 16S ribosomal subunit. Pro-inflammatory mediators and ApoE were quantified from the gingival crevicular fluid (GCF). Patients with AD had periodontitis stage III-IV in 80%, a higher concentration of pro-inflammatory and ApoE mediators, and a higher P. gingivalis load compared to healthy subjects. The pro-inflammatory mediators, P. gingivalis load had a negative correlation with the MoCA test scores. Finally, a ROC curve was performed to assess the specificity and sensitivity of ApoE levels, detecting an area of 84.9%. In AD patients, we found a more severe periodontitis, a higher levels of pro-inflammatory mediators, and higher bacterial load. In addition, there is an increase in ApoE that allows to clearly determine patients with health, periodontitis and periodontitis and AD.

Resumen La periodontitis es una enfermedad crónica no transmisible que se caracteriza por generar una inflamación sistémica de bajo grado causada por una microbiota disbiótica subgingival. Múltiples estudios han determinado la mayor prevalencia de pérdida de dientes y mala higiene bucal en pacientes con enfermedad de Alzheimer (EA). Sin embargo, el diagnóstico periodontal, bacterias periodontales o mediadores pro-inflamatorio no se ha medido hasta la fecha. Determinar el estado periodontal, los mediadores pro-inflamatorios, la carga de Porphyromonas gingivalis y la apoliporpoteína E (ApoE) en pacientes con EA. Se realizó un examen odontológico completo en 30 pacientes y el estado cognitivo se determinó mediante la Evaluación Cognitiva de Montreal (MoCA). Luego, se tomaron muestras de microbiota subgingival y FCG de todos los pacientes de los sitios más profundos. Se aisló el DNA total de las muestras de microbiota para la cuantificación de la subunidad ribosómica 16S. Los mediadores pro-inflamatorios y la ApoE se cuantificaron a partir del líquido crevicular gingival (GCF). Los pacientes con EA tenían periodontitis en estadio III-IV en 80%, una mayor concentración de mediadores pro-inflamatorios y ApoE, y una mayor carga de P. gingivalis en comparación con los sujetos sanos. Los mediadores pro-inflamatorios y la carga de P. gingivalis tuvieron una correlación negativa con las puntuaciones de la prueba MoCA. Finalmente, se realizó una curva ROC para evaluar la especificidad y sensibilidad de los niveles de ApoE, detectando un área del 84,9%. En los pacientes con EA encontramos una periodontitis más severa, mayores niveles de mediadores pro-inflamatorios y mayor carga bacteriana. Además, un aumento de ApoE que permite determinar claramente a los pacientes con salud, periodontitis y periodontitis y EA.

Manifestaciones pulmonares al diagnóstico de 170 pacientes con vasculitis asociadas a anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos: cohorte retrospectiva de un centro universitario / Pulmonary manifestations at the diagnosis of 170 patients with vasculitis associated with anticytoplasmic neutrophil antibodies: retrospective cohort of a university center

INTRODUCCIÓN: Las Vasculitis Asociadas a Anticuerpos Anticitoplasma de Neutrófilos (VAA) son infrecuentes, pero de amplio espectro de presentación. Si bien el consenso de clasificación de Chapel Hill del año 2012, sigue vigente, la tendencia actual es clasificarlas de acuerdo al marcador inmunológico: anti-Proteinasa 3 (PR3) o anti-mieloperoxidasa (MPO). Las manifestaciones pulmonares clásicas son la hemorragia alveolar y los nódulos pulmonares. En los últimos 10 años se ha descrito la enfermedad pulmonar difusa (EPD). Los estudios epidemiológicos son escasos, y suelen representar en su mayoría poblaciones norteamericanas o europeas. El objetivo es describir las características del compromiso pulmonar al debut en VAA en un centro universitario. PACIENTES Y MÉTODO: De un total de 190 pacientes con diagnóstico de VAA se incluyeron 170 en seguimiento en nuestro centro. Se revisaron aspectos clínicos, demográficos, laboratorio e imagenológicos de los pacientes incluidos. RESULTADOS: De los 170 pacientes, 112 (65,88%) presentaron compromiso pulmonar. 106 (94,64%) de los pacientes fueron anticuerpos anti citoplasma de neutrófilos (ANCA) positivos; de estos, 56 (53,27%) MPO (+) y 39 (36,45%) PR-3 (+). Un tercio de los pacientes de ambos grupos presentó hemorragia alveolar. En los pacientes MPO (+) predomina la EPD (53,5%) y en PR-3 (+) los nódulos pulmonares (69,23%). Destaca la baja frecuencia de patología obstructiva asociada. CONCLUSIONES: El compromiso pulmonar en las VAA es prevalente y heterogéneo. En nuestra serie, destaca la frecuencia de EPD en VAA MPO (+), lo que releva la importancia del estudio con ANCA en paciente con diagnóstico y seguimiento por EPD.

INTRODUCTION: Antineutrophil Cytoplasmic Antibodies (ANCA) associated vasculitis (AAV) are uncommon, but of broad spectrum of presentation. Although the 2012 Chapel Hill classification consensus remains valid, the current trend is to classify them according to the immunological marker: anti-Proteinase 3 antibody (PR-3) or anti-Myeloperoxidase antibody (MPO). The classic pulmonary manifestations are alveolar hemorrhage and pulmonary nodules. Interstitial lung disease (ILD) has been described in the last 10 years. Epidemiological studies are scarce, and they usually represent mostly North American or European populations. The objective is to describe the characteristics of lung involvement upon debut in AAV in a university center. PATIENTS AND METHODS: Of a total of 190 patients diagnosed with AAV, 170 were included in follow-up at our center. Clinical, demographic, laboratory and imaging aspects of the included patients were reviewed. RESULTS: Of the 170 patients, 112 (65.88%) had lung involvement. 106 (94.64%) of the patients were ANCA (+); of these, 56 (53.27%) MPO (+) and 39 (36.45%) PR-3 (+). One third of the patients in both groups had alveolar hemorrhage. In MPO (+) patients, ILD predominates (53.5%) and in PR-3 (+) pulmonary nodules (69.23%). The low frequency of associated obstructive pathology stands out. CONCLUSIONS: Pulmonary manifestations in AAVs are frequent and heterogeneous. Locally, the association of ILD and AAV MPO (+) stands out, which highlights the importance of ANCA study in patients with diagnosis and follow-up by ILD.

Caracterização funcional do gene codificador de proteína CD14 e do gene não codificador de proteína LINC01133 em linhagens celulares humanas de câncer de mama triplo negativo / Functional characterization of the CD14 protein-coding gene and the non-protein-coding LINC01133 gene in triple negative human breast cancer cell lines

Dentre os subtipos de câncer de mama, o triplo negativo (TNBC) é o que apresenta as maiores taxas de mortalidade, sendo, portanto, considerado um enorme desafio para a clínica. O uso de moléculas como marcadores tumorais vem auxiliando o clínico no diagnóstico, no prognóstico e, até mesmo, no tratamento do TNBC, sendo essenciais na redução de suas altas taxa de mortalidade. No entanto, um pequeno grupo de marcadores tumorais são validados na prática clínica, estimulando à busca por novos alvos, e sua caracterização funcional, como forma de se entender a Biologia desta doença. Assim, o objetivo deste trabalho é caracterizar funcionalmente o gene codificador de proteína CD14 e o gene não codificador de proteína LINC01133 em linhagens celulares humanas de TNBC, no intuito de descobrir o papel destas moléculas na progressão tumoral. Na primeira parte deste trabalho, analisou-se a expressão do CD14 frente à um painel de linhagens celulares que representam os diferentes subtipos dos tumores mamários. O CD14 exibiu elevados níveis de expressão nas linhagens nãotumorigênicas MCF10A e MCF12A e baixos níveis na linhagem triplo negativa Hs578T. A partir destes resultados, o CD14 foi superexpresso na linhagem Hs578T. Ensaios de caracterização funcional mostraram que a superexpressão do CD14 reduziu a capacidade migratória e invasiva das células, efeito que foi hipoteticamente relacionado ao aumento da expressão da E-caderina. No entanto, observou-se aumento no potencial tumorigênico, levando-nos a sugerir seu envolvimento num possível mecanismo utilizado pelas células para compensar a significativa redução do potencial migratório e invasivo. Os resultados obtidos indicam que o nível basal de expressão do CD14 observado na linhagem Hs578T é importante, podendo contribuir para a desenvolvimento primário do tumor, atuando como um oncogene. Na segunda parte deste trabalho, analisou-se a expressão de 10 RNAs longos não codificadores (lncRNAs), frente ao mesmo painel de linhagens descritoanteriormente. Dentre estes, o lncRNA LINC01133 exibiu baixos níveis de expressão nas linhagens não-tumorigênicas MCF10A e MCF12A e elevados níveis na linhagem triplo negativa Hs578T, sendo, então, escolhido como alvo de estudo. A partir destes resultados, decidimos superexpressar, de forma indutível, o LINC01133 na linhagem MCF10A e nocautear este gene, via sistema CRISPR/Cas9, na linhagem Hs578T. Ensaios de caracterização funcional mostraram que a superexpressão do LINC01133 na linhagem MCF10A reduziu a proliferação celular e inibiu o crescimento de colônias dependente de ancoragem, mas, em contrapartida, aumentou o crescimento de colônias independente de ancoragem e a capacidade migratória e invasiva destas células. No entanto, sugerimos que isto não seja suficiente para tornar estas células tumorigênicas e metastáticas. Por outro lado, o nocauteamento do LINC01133 na linhagem triplo negativa Hs578T aumentou de forma considerável todos os parâmetros de malignidade analisados. Baseado nos dados obtidos, sugerimos que o elevado nível de expressão do LINC01133 na linhagem Hs578T é importante na regulação negativa de processos relacionados com a progressão tumoral, atuando com um supressor tumoral. Os dados obtidos em nosso estudo contribuem para o enriquecimento de informações relacionadas à Biologia do TNBC, auxiliando, desta forma, no desenvolvimento de potenciais protocolos clínicos e terapêuticos utilizandos estes biomarcadores

Among the breast cancer subtypes, the triple negative (TNBC) displays the highest mortality rates, being, therefore, considered a major challenge for the clinic. The use of molecules as tumor markers has helped clinicians in the diagnosis, prognosis and even in treatment of TNBC, being essential in reducing its high mortality rate. However, a small group of tumor markers is validated in clinical practice, stimulating the search for new targets, and their functional characterization, as a way to understand the biology of this disease. Thus, the aim of this work is to functionally characterize the CD14 protein-coding gene and the non-protein-coding LINC01133 gene in human TNBC cell lines, in order to probe into the role of these molecules in tumor progression. In the first part of this work, the expression of CD14 was analyzed in a panel of cell lines that represent the different subtypes of breast tumors. High expression levels of CD14 were observed in the non-tumorigenic MCF10A and MCF12A lineages and low levels in the triple negative Hs578T lineage. Based on these results, CD14 was overexpressed in the Hs578T lineage. Functional characterization assays showed that CD14 overexpression reduced the migratory and invasive capacity of cells, an effect that was hypothetically related to increased E-cadherin expression. However, increased in the tumorigenic potential was observed, leading us to suggest its involvement in a possible mechanism used by cells to compensate for the significant reduction in the migratory and invasive potential. The results obtained indicate that CD14 expression basal level observed in the Hs578T lineage may be important to contribute to the primary development of tumor, thus acting as an oncogene. In the second part of this work, the expression of 10 long non-coding RNAs (lncRNAs) was analyzed against the same lineage panel described above. Among these, the LINC01133 lncRNA exhibited low expression levels in the non-tumorigenic MCF10A and MCF12A lineages and high levels in the triple negative Hs578T lineage, being, then, chosen as a target for this study. Based on these results, we decided toinducibly overexpress LINC01133 in the MCF10A lineage and knockout this gene, via the CRISPR/Cas9 system, in the Hs578T lineage. Functional characterization assays showed that overexpression of LINC01133 in the MCF10A lineage reduced cell proliferation and inhibited anchorage-dependent colony growth, but, on the other hand, increased anchorage-independent colony growth and the migratory and invasive capacity of these cells. However, we suggest that this is not sufficient to render these cells tumorigenic and metastatic. On the other hand, the knockout of LINC01133 in the triple negative Hs578T lineage considerably increased all the analyzed malignancy parameters. Based on the results obtained, we suggest that the high expression level of LINC01133 in the Hs578T lineage is important for down-regulation of processes related to tumor progression, acting as a tumor suppressor. The data obtained in our study contribute to the enrichment of information related to TNBC Biology, thus assisting in the development of potential clinical and therapeutic protocols using these biomarkers

Application of CRISPR-Cas9 to interrogate novel gene functions in cutaneous melanoma

Melanoma accounts for 3% of skin neoplasms and is the leading cause of death from skin disorders worldwide. The high mortality rate associated with this disease stems from the high capacity of melanoma patients to develop metastases and treatment relapse with inhibitors of the MAPK signaling pathway (such as BRAF inhibitors), commonly used in melanoma therapy. Thus, the investigation of genes involved in the mechanisms of melanoma development is essential for new and more effective therapeutic strategies. Hence, we describe in this thesis two projects involving the genes SIN3B and IRF4 as possible biomarkers for cutaneous melanoma. Initially, through bioinformatics analyses performed by our group, an upregulation of SIN3B was found in metastatic melanomas. This result together with the understanding of SIN3B role in regulating gene expression and oncogenic transformation, prompted us to describe in this thesis some mechanisms by which SIN3B may influence melanoma development. We then sought to characterize the gene function using SIN3B-deleted cells, generated by the CRISPR-Cas9 methodology. Initially, we observed increased SIN3B expression in BRAF-mutant metastatic melanomas, where we noted that the long splicing variant of the gene (NM_001297595.1) was effectively prevalent in melanomas. Subsequently, we designed gRNAs between the exons 2 and 3 of the human SIN3B gene and engineered three knockout clones and three control clones (containing empty lentiCRISPRv2 plasmid) from different melanoma cell lines (SKMEL28, A2058, and A375). Through functional analyses, it was observed that the absence of the gene did not interfere in the proliferation of tumor cells; however, it led to a decrease in invasive properties. These results were verified by Boyden chamber assays and transcriptome analysis (total RNA sequencing of deleted cells), where a decrease in migration and motility pathways was observed. Additionally, a screening of synthetically lethal genes with SIN3B was performed with a genome wide CRISPR library. These results showed that USP7 and STK11 genes, which belong to the FoxO signaling pathway, were essential in SIN3B-depleted melanoma cells. Finally, through a collaborative project with the Wellcome Trust Sanger Institute, previous large-scale sequencing analyses demonstrated that deletion of the IRF4 gene was lethal for melanoma cells. Accordingly, we performed IRF4 silencing in vitro and noticed that the lack of IRF4 promotes cell death and apoptosis, independently of MYC and MITF, known in the literature to be downstream targets of this gene. Therefore, these data suggest that IRF4 plays a vital role in melanoma cell survival. Taken together, both works herein described in this thesis demonstrate how CRISPR-Cas9 can be applied to study the functions and mechanisms of genes involved in melanoma progression, collectively helping in the development of more effective therapeutic strategies for this tumor

O melanoma representa 3% dos tipos de neoplasias cutâneas e é a maior causa das mortes por distúrbios de pele no mundo. A alta taxa de mortalidade associada à essa doença advém da alta capacidade de pacientes com melanoma desenvolverem metástases, e apresentarem recidiva após tratamento com inibidores da via de sinalização MAPK (como da proteína BRAF), comumente utilizados no tratamento de pacientes metastáticos. Assim, a investigação de genes envolvidos nos mecanismos de desenvolvimento do melanoma é primordial para novas estratégias terapêuticas mais efetivas. Dessa forma, descrevemos no presente trabalho dois projetos envolvendo os genes SIN3B e IRF4 como possíveis biomarcadores para melanoma cutâneo. Em análises prévias de bioinformática realizados pelo nosso grupo, SIN3B foi identificado tendo maior expressão em melanomas metastáticos. Além disso, diversos estudos mostraram que o gene está envolvido na regulação da expressão gênica e transformação oncogênica. Dessa forma, descrevemos nessa tese alguns mecanismos pelos quais SIN3B pode influenciar no desenvolvimento do melanoma, através da caracterização funcional de células SIN3B-deletadas pela metodologia CRISPR-Cas9. Inicialmente, observamos aumento na expressão de SIN3B em melanomas metastáticos BRAF-mutados, onde notamos que a variante de splicing longa do gene (NM_001297595.1), era efetivamente prevalente em melanomas. Assim, desenhamos sequências de RNA guias entre os éxons 2 e 3 do gene SIN3B humano e, obtivemos três clones knockout e outros três clones controle (contendo plasmídeo vazio) em diferentes linhagens de melanoma (SKMEL28, A2058 e A375), para caracterização funcional. Observou-se que a ausência do gene não interferiu na proliferação das células tumorais, contudo, acarretou na diminuição de processos invasivos. Esses resultados foram averiguados através de ensaios em câmara de Boyden e análises de transcriptoma (sequenciamento de RNA total das células deletadas), onde notou-se diminuição das vias de migração e motilidade. Adicionalmente, um rastreamento de genes sinteticamente letais com SIN3B foi realizado com uma biblioteca de CRISPR capaz de silenciar todo o genoma. Esses resultados mostraram que os genes USP7 e STK11, ambos pertencentes à via de sinalização de FoxO, são essenciais nas células SIN3B deletadas. Por fim, através de um projeto colaborativo com o Wellcome Trust Sanger Institute, análises prévias de sequenciamento de larga escala demonstraram que a deleção do gene IRF4 era letal para células de melanoma. Dessa forma, realizamos o silenciamento de IRF4 in vitro e notamos que a ausência do gene promove morte celular e apoptose, independentemente de MYC e MITF, conhecidos na literatura por serem alvos downstream do gene. Portanto, esses dados sugerem que IRF4 tem um papel importante na sobrevivência de células de melanoma. Em conjunto, ambos trabalhos descritos nessa tese, demonstram como a metodologia CRISPR-Cas9 pode auxiliar no entendimento de processos importantes para a malignidade do melanoma e contribuir para estratégias terapêuticas mais efetivas para esse tumor

Quality markers of Zingiberis Rhizoma Carbonisata before and after processing / 中国中药杂志

Based on the previous research results of our group and literature research, the chemical components, mechanisms, pharmacodynamics, and pharmacokinetics of Zingiberis Rhizoma Carbonisata were summarized to determine the quality markers(Q-markers) of Zingiberis Rhizoma Carbonisata and Zingiberis Rhizoma. Our research group has clarified the differential components of Zingiberis Rhizoma Carbonisata and Zingiberis Rhizoma, the meridian-warming hemostatic effect of Zingiberis Rhizoma Carbonisata, the related targets and pathways of the effect, the endogenous biomarkers of Zingiberis Rhizoma Carbonisata, and the hemodynamic processes of Zingiberis Rhizoma Carbonisata and Zingiberis Rhizoma. Moreover, based on high-performance liquid chromatography-diode array detector-electrospray ionization mass spectrometry(HPLC-DAD-ESIMS), a method for determining the content of Q-mar-kers was established. In conclusion, the study finally determined that gingerone, 6-shogaol, and diacetyl-6-gingerol were the Q-mar-kers of Zingiberis Rhizoma Carbonisata decoction pieces, and 6-gingerol, 8-gingerol, and 10-gingerol were Q-markers of Zingiberis Rhizoma decoction pieces. The result is expected to provide a reference for the establishment of quality standards for Zingiberis Rhizoma Carbonisata decoction pieces and Zingiberis Rhizoma decoction pieces.

Effect of trans-resveratrol on oxidative stress biomarkers associated with atherosclerosis / Efeito do trans-resveratrol em biomarcadores de estresse oxidativo associados à aterosclerose

Growing evidence indicates that oxidative stress plays an important role in the pathophysiology of many cardiovascular diseases, including atherosclerosis. In this context, the use of bioactive compounds with antioxidant action can bring health benefits, especially in the prevention and control of pathophysiological events. Studies suggest that the polyphenol trans-resveratrol can reduce oxidative stress by acting on the nuclear factor erythroid-2-related factor 2 (Nrf2) and this effect would be associated with dosage. Thus, the present study aimed to investigate the effect of different doses of trans-resveratrol on biomarkers related to atherosclerosis and oxidative stress. In the first step, 27 randomized clinical trials, which evaluated the effect of trans-resveratrol on atherosclerosis-related biomarkers, were classified according to their protocol characteristics and profile of each outcome. Biochemical data from 12 biomarkers were selected to calculate the net change (%). Using multivariate analysis, the trials were distributed into 3 clusters. The studies that composed Clusters II and III were more effective in improving blood pressure and reducing dyslipidemia, respectively. These studies were characterized by a longer intervention time (> 2 months) with doses of around 200-500 mg/day. These results showed that the effects of transresveratrol are mainly related to dosage and intervention time. Based on these results, two doses were selected to apply in an experimental protocol to investigate the effect of trans-resveratrol on hepatic oxidative stress biomarkers mediated by Nrf2 pathway. LDLr(-/-) mice were fed for 8 weeks on a standard diet, followed by over 24 weeks on a Western diet, both containing trans-resveratrol at doses of 250 mg/kg diet/day (low dose resveratrol, LRD) or 400 mg/kg diet/day (high dose resveratrol, HRD). A control group (CONT) was maintained without supplementation. In general, both doses of trans-resveratrol did not affect the body weight and lipid profile of the animals. Only the LRD group showed reduced levels of two important biomarkers of oxidative stress in the liver (GSH/GSSG ratio and malonaldehyde), besides to reduced expression of factor nuclear kappa B (NF-kB). However, contrary to our hypothesis, both doses reduced Nrf2 expression in the liver compared to the CONT group. Regarding inflammatory cytokines, no changes were observed in the levels of TNF-α and IL-10. Furthermore, both doses increased the level of the pro-inflammatory cytokine IL-6. Taken together, our results suggest that trans-resveratrol supplementation at doses lower than 500 mg/day may contribute to the reduction of biomarkers related to atherosclerosis and oxidative stress

Evidências crescentes indicam que o estresse oxidativo desempenha um papel importante na fisiopatologia de muitas doenças cardiovasculares, incluindo a aterosclerose. Nesse contexto, o uso de compostos bioativos com ação antioxidante pode trazer benefícios à saúde, principalmente na prevenção e controle de eventos fisiopatológicos. Estudos sugerem que o polifenol trans-resveratrol pode reduzir o estresse oxidativo atuando na via do fator nuclear eritroide 2 relacionado ao fator 2 (Nrf2) e que esse efeito estaria associado a dosagem. Assim, o presente estudo teve como objetivo investigar o efeito de diferentes doses de trans-resveratrol sobre biomarcadores relacionados à aterosclerose e estresse oxidativo. Na primeira etapa, 27 ensaios clínicos randomizados, que avaliaram o efeito do trans-resveratrol em biomarcadores relacionados à aterosclerose, foram classificados de acordo com suas características de protocolo e perfil de cada resultado. Dados bioquímicos de 12 biomarcadores foram selecionados para calcular a variação líquida (%). Usando análise multivariada, os ensaios foram distribuídos em 3 Clusters. Os estudos que compuseram os Clusters II e III foram mais eficazes na melhora da pressão arterial e na redução da dislipidemia, respectivamente. Esses estudos foram caracterizados por um tempo de intervenção mais longo (> 2 meses) com doses de cerca de 200-500 mg/dia. Esses resultados mostraram que os efeitos do transresveratrol estão relacionados principalmente à dosagem e ao tempo de intervenção. Com base nesses resultados, duas doses foram selecionadas para aplicar em um protocolo experimental para investigar o efeito do trans-resveratrol em biomarcadores de estresse oxidativo hepático mediados pela via do Nrf2. Camundongos LDLr(-/-) foram alimentados por 8 semanas com dieta padrão, seguidos por mais de 24 semanas com Western diet, ambos contendo trans-resveratrol nas doses de 250 mg/kg de dieta/dia (baixa dose de resveratrol, LRD) ou 400 mg/kg de dieta/dia (alta dose de resveratrol, HRD). Um grupo controle (CONT) foi mantido sem suplementação. Em geral, ambas as doses de trans-resveratrol não afetaram o peso corporal e o perfil lipídico dos animais. Apenas o grupo LRD apresentou níveis reduzidos de dois importantes biomarcadores de estresse oxidativo no fígado (razão GSH/GSSG e malonaldeído), além da redução da expressão de fator nuclear kappa B (NF-kB). No entanto, ao contrário da nossa hipótese, ambas as doses reduziram a expressão de Nrf2 no fígado em comparação com o grupo CONT. Em relação às citocinas inflamatórias, não foram observadas alterações nos níveis de TNF-α e IL-10. Além disso, ambas as doses aumentaram o nível da citocina pró-inflamatória IL-6. Em conjunto, nossos resultados sugerem que a suplementação de trans-resveratrol em doses menores de 500 mg/dia podem contribuir para a redução de biomarcadores relacionados à aterosclerose e ao estresse oxidativo

Identification of new human mesenchymal stem cell biomarker by aptamers / Identificação de novos biomarcadores de células tronco mesenquimais de origem humana por meio de aptâmeros

Stem cells are undifferentiated cells that can be distinguished from others by their ability to self-renew and to differentiate into new specific cell types. Mesenchymal stem cells (MSC) are adult stem cells that can be obtained from different sources, such as adipose tissue, bone marrow, dental pulp, and umbilical cord. They can either replicate, originating new identical cells, or differentiate into cells of mesodermal origin and from other germ layers. MSC have been studied as new tools for regenerative therapy. Although encouraging results have been demonstrated, MSC-based therapies still face a great barrier: the difficulty of isolating these cells from heterogeneous environments. MSC are currently characterized by immunolabelling through a set of multiple surface membrane markers, including CD29, CD73, CD90 and CD105, which are also expressed by other cell types. Hence, the present work aimed to identify new specific biomarkers for the characterization of human MSC using DNA aptamers produced by the SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential Enrichment) technique. Our results showed that MSC from different origins bound to DNA candidate aptamers, that is, DNA or RNA oligonucleotides selected from random libraries that bind specifically to biological targets. Aptamer-bound MSC could be isolated by fluorescenceactivated cell sorting (FACS) procedures, enhancing the induction of differentiation into specific phenotypes (chondrocytes, osteocytes and adipocytes) when compared to the whole MSC population. Flow cytometry analyses revealed that candidate aptamers bound to 50% of the MSC population from dental pulp and did not present significant binding rates to human fibroblasts or lymphocytes, both used as negative control. Moreover, immunofluorescence images and confocal analyses revealed staining of MSC by aptamers localized in the surfacemembrane of these cells. The results also showed internal staining of human monocytes by our investigated aptamers. A non-specific control aptamer (CNTR APT) obtained from the random pool was then utilized to compare the specificity of the aptamers bound to the analyzed non-apoptotic cells, showing no staining for MSC. However, 40% of the monocytes bound to the CNTR APT. Normalized data based on the cells bound to candidate aptamers compared to those bound to the CNTR APT, revealed a 10 to 16-fold higher binding rate for MSC against 2-fold for monocytes. Despite its low specificity, monocyte-aptamer binding occurs probably due to the expression of shared markers with MSC, since monocytes are derived from hematopoietic stem cells and are important for the immune system ability to internalize/phagocyte external molecules. Given that, we performed a pull-down assay followed by mass spectrometry analysis to detect which MSC-specific protein or other target epitope not coexpressed by monocytes or the CNTR APT would bind to the candidate aptamer. Distinguishing between MSC and monocyte epitopes is important, as both cells are involved in immunomodulatory effects after MSC transplantations. ADAM17 was found to be a target of the APT10, emerging as a possible biomarker of MSC, since its involvement in the inhibition of the TGF signaling cascade, which is responsible for the differentiation of MSC. Thus, MSC with a higher stemness profile should overexpress the protein ADAM17, which presents a catalytic site with affinity to APT10. Another target of Apt 10 is VAMP3, belonging to a transmembrane protein complex that is involved in endocytosis and exocytosis processes during immune and inflammatory responses. Overall, proteins identified as targets of APT10 may be cell surface MSC biomarkers, with importance for MSC-based cell and immune therapies

Células tronco são células indiferenciadas que podem ser distinguidas de outros tipos celulares por meio da habilidade de se auto renovarem e de se diferenciarem em novos tipos celulares. Células tronco mesenquimais (MSC) são células tronco adultas encontradas em diferentes tecidos como tecido adiposo, polpa de dente e cordão umbilical. Estas células podem se autodividir em células idênticas ou se diferenciarem em células de origem mesodermal. Estas células têm sido estudadas em novas aplicações que envolvem terapia regenerativas. Embora resultados encorajadores tenham sido demonstrados, terapias que utilizam MSC ainda encontram uma grande barreira: a dificuldade no isolamento destas células a partir de um ambiente heterogêneo. MSC são caracterizadas por populações positivas em ensaios de imunomarcação para os epítopos membranares CD29, CD73, CD90 e CD105, presentes também em outros tipos celulares. Assim, o presente trabalho tem o objetivo de identificar novos biomarcadores de MSC de origem humana, utilizando aptâmeros de DNA produzidos pela técnica SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential Enrichment) como ferramenta. Nossos resultados mostraram que MSC de diferentes origens ligam-se a aptâmeros (oligonucleotídeos de DNA ou RNA que atuam como ligantes específicos de alvos moleculares) de DNA candidatos que atuam no isolamento de MSC por meio da técnica FACS de separação celular, promovendo uma maior indução de diferenciação em células específicas (condrócitos, osteócitos e adipócitos) comparada com a população total de MSC. Análises de citometria de fluxo mostraram que os aptâmeros candidatos se ligam a 50% das MSC de polpa de dente e não apresentam taxa de ligação significante para fibroblastos e linfócitos de origem humana - utilizados como controles negativo. Além domais, imagens de imunofluorescência e confocal mostraram ligação na superfície da membrana de MSC e a marcação interna de monócitos a estes aptâmeros. Portanto, um aptâmero controle (CNTR APT) foi utilizado para comparar a especificidade dos aptâmeros ligados a células viáveis, mostrando a não ligação deste aptâmero a MSC. Porém, 40% da população de monócitos ligou-se ao CNTR APT. Uma normalização baseada na comparação entre as taxas de ligação entre células ligadas com aptâmeros candidatos e o aptâmero controle gerou uma taxa de especificidade entre 10-16 vezes maior para MSC contra 2,5 vezes para os monócitos. Deste modo, embora os resultados tenham mostrado uma taxa de ligação entre monócitos e aptâmeros, as MSC ligadas aos aptâmeros candidatos possuem uma maior taxa de especificidade devido a uma maior presença de antígenos que são expressos em ambas as células. Um ensaio de Pull Down seguido de espectrometria de massas foi utilizado para a identificação de biomarcadores que se ligariam aos aptâmeros candidatos, e que não seriam co-expressos por monócitos e por antígenos ligados ao aptâmero controle. Deste modo, a proteína ADAM17 foi identificada nas amostras de APT10 ligadas às MSC. Tal proteína está relacionada à inibição de uma cascata de sinalização da família de proteínas TGF, responsável pela diferenciação de MSC. Assim, MSC com maior potencial tronco deveriam expressar ADAM17 em maior quantidade. Tal proteína apresenta um sítio catalítico que demonstra interagir com o APT10, de acordo com predição Docking entre proteína e DNA. Foi identificada também, a proteína VAMP3, que pertence a um complexo proteico transmembranar responsável pelos processos de endocitose e exocitose, e que podem ter um papel importante na liberação de citocinas e outras moléculas relacionadas às respostas imune e inflamatórias. Deste modo, o APT10 identificou proteínas importantes que devem estar relacionas com a melhora de imunoterapias que utilizam MSC

Evaluation of miR-15a, miR-16-1, ZAP-70, Ang-2, and Bcl-2 as potential prognostic biomarkers in chronic lymphocytic leukemia

Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a blood cancer characterized by the accumulation of clonal B-lymphocytes. This study evaluated the mRNA gene expression of miR-15a, miR-16- 1, ZAP-70, and Ang-2 by qPCR, as well as the plasma levels of Bcl-2 by Elisa immunoassay, in CLL patients and healthy controls. Significant differences were observed when comparing patients and controls regarding miR-15a (p < 0.001), miR-16-1 (p < 0.001) mRNA, Ang-2 gene expression, and Bcl-2 plasma levels (p < 0.001). When stratified by risk, differences were maintained with a significantly reduced expression in high-risk patients. A positive correlation was observed between miR-15a and platelets (R2 = 0.340; p = 0.009) as well as between Bcl-2 and leukocytes (R2 = 0.310; p = 0.019). Conversely, negative correlations were observed between ZAP-70 and platelets (R2 = - 0.334; p = 0.011), between miR-15a and lymphocytes (R2 = - 0.376; p = 0.004), as well as between miR-16-and lymphocytes (R2 = - 0.515; p = 0.00004). The data suggest that a reduction in miR-15a and miR-16-1 expressions, in addition to an overexpression of Bcl-2, are associated with the reduction in apoptosis and, consequently, to a longer survival of lymphocytes, thus contributing to lymphocyte accumulation and aggravation of the disease. By contrast, Ang-2 expression was significantly higher in A than in B + C Binet groups. This context leads to the speculation that this biomarker should be investigated in more robust studies within populations with a still relevantly indolent form of the disease in an attempt to identify those patients with a greater potential for an aggravation of the disease

Fecal calprotectin as a predictor of COVID-19 severity

Coronavirus disease 2019 (COVID-19) is highly transmittable through contact with respiratory droplets. The virus is also shed in fecal matter. Some patients may present with effects in more than one system; however, there are no defined biomarkers that can accurately predict the course or progression of the disease. The present study aimed to estimate the severity of the disease, to correlate the severity of the disease with biochemical predictors, to identify valuable biomarkers indicative of gastrointestinal disease, and to determine the cutoff values. A cross-sectional study was conducted on COVID-19 patients admitted to the Kafrelsheikh University Hospital (isolation unit) between July 10, 2020, and October 30, 2020. The diagnosis of COVID- 19 was confirmed via reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), which was employed for the detection of the viral RNA. We conclude that lymphopenia, elevated C-reactive protein (CRP) level, and liver enzymes were among the most important laboratory findings in COVID-19 patients. Statistically significant differences in platelet count, neutrophil count, D-dimer level, and fecal calprotectin levels were observed among patients presenting with chest symptoms only and patients with both chest and gastrointestinal symptoms (p=0.004;<0.001; 0.010; 0.003; and<0.001, respectively). C-reactive protein, D-dimer, and fecal calprotectin levels positively correlated with disease severity. The cutoff value for fecal calprotectin that can predict gastrointestinal involvement in COVID-19 was 165.0, with a sensitivity of 88.1% and a specificity of 76.5%. (AU)

Leucemia mieloide aguda: influencia pronóstico de algunos biomarcadores y la respuesta terapéutica en los pacientes menores de 60 años / Acute myeloid leukemia: prognostic influence of some biomarkers and the therapeutic response in patients under 60 years of age

Introducción: La leucemia mieloide aguda es una enfermedad clonal, reconocida como una de las hemopatías malignas más heterogénea en la que determinados biomarcadores clínicos, inmunológicos, citogenéticos y moleculares influyen en la respuesta de los pacientes al tratamiento. Objetivo: Describir la influencia pronóstico de biomarcadores inmunológicos, citogenéticos y moleculares en la respuesta terapéutica en los pacientes adultos menores de 60 años con leucemia mieloide aguda. Métodos: Se realizó una revisión exhaustiva del tema en bases de datos como: Pubmed, Scielo, ScienceDirect, Medline y el motor de búsqueda Google académico; se utilizaron como referencia artículos actualizados publicados principalmente en los últimos cinco años. Análisis y síntesis de la información: La heterogeneidad inmunológica, citogenética y molecular de los pacientes adultos menores de 60 años con leucemia mieloide aguda se relaciona con la variabilidad en la respuesta al tratamiento que tienen los enfermos y repercute en la supervivencia global y libre de enfermedad. Conclusión: Sobre la base a características inmunológicas, citogenéticas y moleculares es posible establecer el pronóstico de los pacientes con leucemia mieloide aguda, lo cual permite seleccionar la terapéutica adecuada para disminuir en lo posible las complicaciones, las recaídas y aumentar la supervivencia global(AU)

Introduction: Acute myeloid leukemia is a clonal disease, recognized as one of the most heterogeneous malignant hemopathy in which certain clinical, immunological, cytogenetic and molecular biomarkers influence the response of patients to treatment. Objective: Describe the prognostic influence of immunological, cytogenetic and molecular biomarkers on the therapeutic response in adult patients under 60 years of age with acute myeloid leukemia. Methods: An exhaustive review was conducted about the topic in the databases as Pubmed, Scielo, ScienceDirect, Medline and Scholar Google, for which papers mainly published in the last five years were used as reference. Analysis and synthesis of the information: The immunological, cytogenetic and molecular heterogeneity of adult patients under 60 years of age with acute myeloid leukemia is related to the variability in the response to treatment that patients have and affects their overall and disease-free survival. Conclusions: Based on the immunological, cytogenetic and molecular characteristics, it is possible to establish the prognosis of patients with acute myeloid leukemia, which allows selecting the appropriate therapy to reduce complications, relapses as much as possible and increase overall survival(AU)

Biomarcadores en tuberculosis / Biomarkers in tuberculosis

Resumen Los métodos diagnósticos clásicos para la tuberculosis son de baja sensibilidad o son muy lentos en la obtención de resultados (baciloscopía, cultivo de Koch). De ahí nace la necesidad de nuevos métodos diagnósticos para esta enfermedad. Los biomarcadores surgen como una opción a esta problemática, con un buen rendimiento diagnóstico, costo y accesibilidad. Ellos permiten identificar la respuesta inflamatoria y/o metabólica del huésped, extrapolando la presencia de Mycobacterium tuberculosis; o identifican moléculas propias del patógeno. En la presente revisión se describen biomarcadores que presentan un buen rendimiento diagnóstico basados en metodologías de investigación de alto nivel (estudio de cohortes, prospectivos, muestreo consecutivo o aleatorizado, comparación de rendimiento diagnóstico frente a cultivo). Es necesario el desarrollo de estas nuevas técnicas con el fin de realizar el diagnóstico precoz de la enfermedad y lograr así su tan ansiada eliminación.

The classical laboratory diagnostic methods for tuberculosis have a low sensitivity or take a long time to know their results. New methods are underway. Biomarkers are a good option to improve our diagnostic approach to this disease. They have good performance, low cost and accessibility. They identify a patient's inflammatory or metabolic response to Mycobacterium Tuberculosis or identifies molecules that are typical of the pathogen. In this paper we sum up the biomarkers with a good diag-nostic performance described in well design investigations. Early diagnosis with these new techniques should contribute to the elimination of the disease.

Feedback of biochemical indexes of blood sugar control by swimming exercise / Feedback dos índices bioquímicos de controle de açúcar no sangue por exercícios de natação / Feedback de los índices bioquímicos del control del azúcar en sangre mediante el ejercicio de natación

ABSTRACT Introduction: According to the metabolic characteristics of ultra-long-distance swimming and the characteristics of energy utilization and absorption during exercise, we have formulated a nutritional supplement plan for crossing to study the influence of swimming sports on blood sugar and give biochemical feedback indicators. Objective: To lay a foundation for studying the nutrition supplement rules during long-term exercise by taking the athletes' blood after training to determine the changes in blood sugar, adjusting and determining the nutritional supplement plan during training. Methods: We monitor athletes' physical function changes and biochemical indicators during training and study the changes of these biochemical indicators and athletes' physical functions after long-term swimming exercises to scientifically arrange the exercise intensity and load during the training period. Results: The urine indexes after exercise did not change much, reflecting the exercise load's low intensity. The changes in blood lactic acid and blood urea indexes after exercise also confirmed this. During the training period, the athletes' hemoglobin and red blood cell parameters are in the ideal range, indicating that the athlete's physical function is in good condition. During the training period, the training load intensity and load are reasonable according to ultra-long-distance swimming's energy supply characteristics. After training, the changes in blood glucose indicators reflect that the nutritional supplement program we formulated for athletes is reasonable and feasible. Conclusions: By monitoring the blood sugar and biochemical indicators of swimmers, it can help athletes to arrange exercise intensity scientifically and load during the training period, to better carry out open water competitions in China, and to arrange training and scientific nutrition during the training period scientifically. Lay the foundation for the establishment of nutrition supplement theory and training theory for super long-time sports. Level of evidence II; Therapeutic studies - investigation of treatment results.

RESUMEN Introducción: De acuerdo con las características metabólicas de la natación de ultra larga distancia y las características de utilización y absorción de energía durante el ejercicio, hemos formulado un plan de complementos nutricionales para estudiar la influencia de los deportes de natación en el azúcar en sangre y dar indicadores de retroalimentación bioquímica. Objetivo: Sentar las bases para el estudio de las reglas de los suplementos nutricionales durante el ejercicio a largo plazo mediante la extracción de sangre de los atletas después del entrenamiento para determinar los cambios en el azúcar en sangre, ajustando y determinando el plan de suplementos nutricionales durante el entrenamiento. Métodos: monitoreamos los cambios en la función física de los atletas y los indicadores bioquímicos durante el entrenamiento y estudiamos los cambios de estos indicadores bioquímicos y las funciones físicas de los atletas después de ejercicios de natación de larga distancia para organizar científicamente la intensidad y la carga del ejercicio durante el período de entrenamiento. Resultados: Los índices de orina después del ejercicio no cambiaron mucho, lo que refleja la baja intensidad de la carga de ejercicio. Los cambios en los índices de ácido láctico y urea en sangre después del ejercicio también lo confirmaron. Durante el período de entrenamiento, los parámetros de hemoglobina y glóbulos rojos de los atletas están en el rango ideal, lo que indica que la función física del atleta está en buenas condiciones. Durante el período de entrenamiento, la intensidad de la carga de entrenamiento y la carga son razonables de acuerdo con las características de suministro de energía de la natación de ultra larga distancia. Después del entrenamiento, los cambios en los indicadores de glucosa en sangre reflejan que el programa de suplementos nutricionales que formulamos para los atletas es razonable y factible. Conclusiones: monitorear los indicadores bioquímicos y de azúcar en sangre de los nadadores, puede ayudar a los atletas a organizar científicamente la intensidad del ejercicio y la carga durante el período de entrenamiento, a realizar mejor las competiciones en aguas abiertas en China y a organizar el entrenamiento y la nutrición científica durante el período de entrenamiento. Sentar las bases para el establecimiento de la teoría de los suplementos nutricionales y la teoría del entrenamiento para deportes de larga duración. Nivel de evidencia II; Estudios terapéuticos: investigación de los resultados del tratamiento.

RESUMO Introdução: De acordo com as características metabólicas da natação de ultra longa distância e as características de utilização e absorção de energia durante o exercício, formulamos um plano de suplemento nutricional para estudar a influência dos esportes de natação no açúcar no sangue e fornecer indicadores de feedback bioquímico. Objetivo: Estabelecer as bases para o estudo das regras de suplementos nutricionais durante exercícios de longa duração, retirando sangue de atletas após o treinamento para determinar as mudanças na glicemia, ajustando e determinando o plano de suplementação nutricional durante o treinamento. Métodos: monitoramos as mudanças na função física e nos indicadores bioquímicos dos atletas durante o treinamento e estudamos as mudanças nesses indicadores bioquímicos e nas funções físicas dos atletas após exercícios de natação de longa distância para organizar cientificamente a intensidade e a carga do exercício durante o período de treinamento. Resultados: As taxas de urina após o exercício não mudaram muito, refletindo a baixa intensidade da carga de exercício. Alterações nos índices de uréia e ácido láctico no sangue após o exercício também confirmaram isso. Durante o período de treinamento, os parâmetros de hemoglobina e hemácias dos atletas estão na faixa ideal, indicando que a função física do atleta está em boas condições. Durante o período de treinamento, a intensidade da carga de treinamento e a carga são razoáveis de acordo com as características da fonte de alimentação da natação de ultra longa distância. Após o treinamento, as mudanças nos indicadores de glicose no sangue refletem que o programa de suplementos nutricionais que formulamos para atletas é razoável e viável. Conclusões: monitorar os indicadores bioquímicos e de açúcar no sangue de nadadores pode ajudar os atletas a organizar cientificamente a intensidade e carga do exercício durante o período de treinamento, conduzir melhor competições em águas abertas na China e organizar treinamento e nutrição científica durante o período de treinamento. Estabelecendo as bases para o estabelecimento da teoria dos suplementos nutricionais e da teoria do treinamento para esportes de longa duração. Nível de evidência II; Estudos terapêuticos: investigação dos resultados do tratamento.

Haptoglobin and its association with naturally occurring diseases in Holstein heifer calves / [Haptoglobina e sua associação com doenças ocorridas naturalmente em bezerras da raça Holandesa]

The present study evaluated the use of haptoglobin (Hp) as an indicator of health and performance in 166 Holstein heifer calves reared in an intensive production system. Calves were evaluated at D6-9; D10-13; D20-23; D35-38 and D65-68, corresponding to the days of life. The absence or presence of diseases was evaluated by physical examination and classification of scores. The performance parameters evaluated were body weight, height at withers and hind width. Hp was measured by spectrophotometric technique. The highest prevalence of diarrhea (59.4%; 98/165) was observed in D10-13, bovine respiratory disease (BRD) was on D35-38 (25.8%; 42/163), and umbilical inflammations in D6-D9 (7.8%; 13/166). Highest values of Hp were observed in animals with diarrhea (P=0.02), and umbilical inflammation (P=0.057), in comparison with the group of healthy calves. A significant negative correlation was observed between Hp and performance index. This protein presented an important relation with diarrhea and performance of the calves, opening perspectives on its utilization as a biomarker of diseases.(AU)

O presente estudo avaliou o uso da haptoglobina (Hp) como indicadora de sanidade e desempenho em 166 bezerras Holandesas criadas em um sistema de produção intensivo. As bezerras foram avaliadas nos momentos D6-9; D10-13; D20-23; D35-38 e D65-68, sendo estes correspondentes aos dias de vida. A ausência ou a presença de doenças foi avaliada por meio do exame físico e da classificação por escores. Os parâmetros de desempenho avaliados foram peso corporal, altura de cernelha e largura de garupa. A Hp foi mensurada por técnica espectrofotométrica. A maior prevalência de diarreia (59,4%; 98/165) foi observada em D10-13, doença respiratória bovina (DRB) ocorreu em D35-38 (25,8%; 42/163) e inflamações umbilicais em D6-D9 (7,8%; 13/166). O valor de Hp foi maior nos animais que apresentaram diarreia (P=0,02) e inflamações umbilicais (P=0,057), em comparação ao grupo de bezerras saudáveis. Houve correlação negativa significativa entre a Hp e os índices de desempenho. Essa proteína apresentou uma importante relação com a diarreia e com o desempenho das bezerras, abrindo perspectivas sobre a sua utilização como biomarcadora de doenças.(AU)

The Prognostic Importance of Immunohistochemical Biomarkers in Diffuse Large B-Cell Lymphoma

ABSTRACT Objective: Molecular methods have practical difficulties in identifying sub-groups of diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) in routine clinical practice. The goal of this study was to sub-classify DLBCL patients into sub-groups by immunohistochemical method and to evaluate the effects of sub-groups on prognosis. Methods: For this purpose, the lymph node biopsy specimens of 40 patients with DLBCL have stained with monoclonal antibody immunostains of cluster of differentiation 10, B-cell lymphoma 6 and multiple myeloma oncogene 1 (MUM1). Results: As a result, 6 (15%) patients have germinal centre B-cell like (GCB) phenotype and 34 (85%) patients have non-GCB phenotype. The overall survival (OS) and event-free survival (EFS) was 31.00 ± 15.49 months and 27.66 ± 17.95 months in GCB phenotype, respectively. The OS and EFS were 23.79 ± 17.82 months and 20.97 ± 17.12 months in non-GCB phenotype, respectively. Conclusion: Multiple myeloma oncogene 1 has reached statistical significance among immunostains, and was found negatively correlated with OS and EFS. If these markers are standardized in the future, more accurate treatment schedules will be determined.

¿La detección de toxinas de Clostridioides difficile es necesaria cuando se detecta la enzima glutamato deshidrogenasa? / Is Clostridioides difficile toxins detection necessary when the glutamate dehydrogenase enzyme is detected?

Resumen Introducción: Clostridioides difficile causa diarrea y colitis pseudomembranosa. Su diagnóstico se realiza con la detección de glutamato-deshidrogenasa (GDH) o las toxinas A y B y se confirma con pruebas de amplificación de ácidos nucleicos. Objetivo: Definir si la determinación de GDH es redundante a la de las toxinas. Métodos: Estudio observacional retrospectivo de muestras fecales de pacientes con sospecha de infección por Clostridioides difficile. Las toxinas y GDH se determinaron mediante inmunocromatografía. Se realizó una simulación bayesiana con los cocientes de probabilidad; se consideró significativo un valor de p < 0.05. Resultados: Se analizaron 329 resultados de GDH y toxinas A y B. Se encontró una prevalencia de infección de Clostridioides difficile de 18.2 %. La sensibilidad y especificidad de la prueba de GDH fue de 0.90 y 0.89, respectivamente. El cociente de probabilidad positivo fue de 8.9 y el negativo, de 0.11. Conclusiones: Un resultado negativo de GDH disminuye considerablemente la probabilidad de infección, pero no la descarta. La detección de toxinas de Clostridioides difficile puede ser necesaria en instituciones donde la amplificación de ácidos nucleicos no es económica o accesible.

Abstract Introduction: Clostridioides difficile causes diarrhea and pseudomembranous colitis. Its diagnosis is made with glutamate dehydrogenase (GDH) or toxins A and B detection and is confirmed with nucleic acid amplification tests. Objective: To define if GDH determination is redundant to that of toxins. Methods: Retrospective, observational study in diarrheal stools of patients with suspected Clostridioides difficile infection. Toxins and GDH were determined by immunochromatography. Bayesian simulation was performed with likelihood ratios; a p-value < 0.05 was regarded as significant. Results: 329 GDH and toxin A and B results were analyzed. Clostridioides difficile infection prevalence was 18.2 %. Sensitivity and specificity of the GDH test were 0.90 and 0.89, respectively. Positive likelihood ratio was 8.9, and negative was 0.11. Conclusions: A negative GDH result considerably reduces the probability of infection but does not rule it out. Clostridioides difficile toxins detection may be necessary in institutions where nucleic acid amplification is not affordable or accessible.