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1.
Rev. chil. infectol ; 41(2): 239-247, abr. 2024. ilus, tab
Article in Spanish | LILACS | ID: biblio-1559679

ABSTRACT

INTRODUCCIÓN: La comprensión del comportamiento de la respuesta humoral en COVID-19 continúa siendo un desafío para la producción de vacunas que proporcionen inmunidad más duradera. OBJETIVO: Describir la respuesta humoral natural inducida por SARS- CoV-2 en personal de salud con base en el perfil epidemiológico y clínico. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio transversal en personal de salud de hospitales públicos de referencia del Departamento de Alto Paraná, Paraguay. Se incluyeron 962 participantes, mediante muestreo no probabilístico de tipo consecutivo, aplicación de cuestionario y toma de muestras sanguíneas. Se buscaron anticuerpos por ensayo inmunocromatográfico para detección de IgM e IgG contra SARS- CoV-2 y por el método ELISA de captura de IgG específicos contra la proteína spike (SARS-CoV-2) y se evaluaron factores asociados a la seropositividad. RESULTADOS: La seroprevalencia global fue 36,5% (IC 95%: 33,4 - 39,5); 59,3% (n: 571) de los encuestados refirió haber tenido síntomas compatibles al COVID-19 entre el inicio de la pandemia y la fecha de toma de muestra, de estos 44% (n: 251) resultó seropositivo; 10,4% (n: 100) manifestó no haber tenido síntomas en el periodo estudiado, pero tuvo un resultado positivo. Los factores asociados a la seropositividad fueron: presencia de síntomas (p 90 días). CONCLUSIONES: Las características clínicas fueron mayormente asociadas con la seropositividad y la seropreva- lencia en los sintomáticos varió de acuerdo con el tiempo transcurrido desde el inicio de los síntomas y la serología.


BACKGROUND: Understanding the behavior of humoral response in COVID-19 continues to be a challenge to produce vaccines that provide long-lasting immunity. AIM: To describe the natural humoral response induced by SARS-CoV-2 among healthcare workers based on epidemiological and clinical profiles. METHODS: Cross-sectional study in healthcare workers from public hospitals in the Department of Alto Paraná, Paraguay, 962 participants were recruited through consecutive sampling, using a questionnaire and blood sampling. Antibodies were determined by immunochromatography assay for detection of IgM and IgG and by SARS-CoV-2 IgG anti-spike capture ELISA method and factors associated with seropositivity were evaluated. RESULTS: The overall seropositivity was 36.5% (95% CI: 33.4 - 39.5); 59.3% (n: 571) of respondents reported symptoms compatible with COVID-19 since the start of the pandemic and the date of blood draw, 44% (n: 251) of them tested positive; 10.4% (n: 100) who reported no history of symptoms tested positive. The factors associated with seropositivity were the presence of symptoms (p 90 days). CONCLUSIONS: Clinical characteristics were mostly associated with seropositivity and sero prevalence in symptomatic participants varied according to the time elapsed from the onset of symptoms to serology.


Subject(s)
Humans , Male , Female , Adult , Middle Aged , Aged , Health Personnel , SARS-CoV-2/immunology , COVID-19/immunology , COVID-19/epidemiology , Paraguay , Immunoglobulin G/immunology , Immunoglobulin M/immunology , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Seroepidemiologic Studies , Cross-Sectional Studies , Multivariate Analysis , Surveys and Questionnaires , Chromatography, Affinity , Vaccination , Immunity, Humoral
2.
Chinese Journal of Biotechnology ; (12): 3757-3771, 2023.
Article in Chinese | WPRIM | ID: wpr-1007991

ABSTRACT

In response to the market demand for therapeutic antibodies, the upstream cell culture scale and expression titer of antibodies have been significantly improved, while the production efficiency of downstream purification process is relatively fall behind, and the downstream processing capacity has become a bottleneck limiting antibody production throughput. Using monoclonal antibody mab-X as experimental material, we optimized the caprylic acid (CA) precipitation process conditions of cell culture fluid and low pH virus inactivation pool, and studied two applications of using CA treatment to remove aggregates and to inactivate virus. Based on the lab scale study, we carried out a 500 L scale-up study, where CA was added to the low pH virus inactivation pool for precipitation, and the product quality and yield before and after precipitation were detected and compared. We found that CA precipitation significantly reduced HCP residuals and aggregates both before and after protein A affinity chromatography. In the aggregate spike study, CA precipitation removed about 15% of the aggregates. A virus reduction study showed complete clearance of a model retrovirus during CA precipitation of protein A purified antibody. In the scale-up study, the depth filtration harvesting, affinity chromatography, low pH virus inactivation, CA precipitation and depth filtration, and cation exchange chromatography successively carried out. The mixing time and stirring speed in the CA precipitation process significantly affected the CA precipitation effect. After CA precipitation, the HCP residue in the low pH virus inactivation solution decreased 895 times. After precipitation, the product purity and HCP residual meet the quality criteria of monoclonal antibodies. CA precipitation can reduce the chromatography step in the conventional purification process. In conclusion, CA precipitation in the downstream process can simplify the conventional purification process, fully meet the purification quality criterion of mab-X, and improve production efficiency and reduce production costs. The results of this study may promote the application of CA precipitation in the purification of monoclonal antibodies, and provide a reference for solving the bottleneck of the current purification process.


Subject(s)
Cricetinae , Animals , Antibodies, Monoclonal/metabolism , Caprylates/chemistry , Cell Culture Techniques , Chromatography, Affinity , CHO Cells , Cricetulus , Chemical Precipitation
3.
Braz. J. Pharm. Sci. (Online) ; 59: e20555, 2023. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1429956

ABSTRACT

Abstract Cannabis sativa L. is one of the most consumed drugs in the world and recent studies have associated its use with an increase in the number of traffic accidents in different countries. In many countries, like Brazil, simple and reliable methodologies are still needed for the detection of drugs on site, mainly cannabinoids, considering its prevalence of use and oral fluid (OF) has been proved as an appropriate biological matrix for this purpose. Considering that, this work aims to review previous studies on immunochromatographic devices for on-site detection of cannabinoids in OF, discussing their sensitivity, specificity, cut-offs values and confirmatory methods. This data shows the importance of choosing a screening device and it reinforces the need for its implementation in Brazil. The research was conducted on 5 databases and all original articles, published in the last 10 years, were selected. A total of 32 articles were found, providing data for 17 screening devices of distinct brands. Only 2 screening devices showed satisfactory sensitivity and specificity in the evaluated studies (≥80% and ≥90% respectively). However, it should be considered that the screening devices still have some limitations, such as a higher cut-off than those recommended by international guidelines (cut-off > 2 ng/mL), therefore demonstrating the need for more studies in the area and the importance of confirmatory analysis usually fulfilled by LC-MS/MS, GC-MS/MS or GC-MS. Thus, the screening analyzes should not be evaluated by itself, but in association with confirmatory results and observational traits (behavioral changes), for a better understanding of the traffic scenario


Subject(s)
Cannabinoids/analysis , Triage/classification , Chromatography, Affinity/instrumentation , Dronabinol/agonists , Cannabis/adverse effects , Accidents, Traffic/prevention & control , Substance Abuse Detection/instrumentation
4.
South Sudan med. j. (Online) ; 16(3): 87-92, 2023. figures, tables
Article in English | AIM | ID: biblio-1452131

ABSTRACT

Introduction: Hepatitis B virus (HBV) is a major public health problem affecting 400 million people worldwide, and is a common cause of chronic liver failure (cirrhosis) and hepatocellular carcinoma. Sixty-eight percent of infected people are from the African and Pacific regions. Vertical transmission from mother to newborn baby is one of the mechanisms by which chronic hepatitis virus infection spreads, besides infections from contaminated needles and syringes and sexual contact. Hepatitis B chronic infection is endemic in many poor countries, especially in Africa. Method: A cross-sectional study was conducted between July and August 2021. Pregnant women attending the antenatal care (ANC) in Bor State referral hospital, South Sudan, were interviewed to collect information on their socio-demographic characteristics and risk factors for hepatitis B infection. The objective was to determine the seroprevalence of hepatitis B chronic infection through blood testing. Prevalence ratios for certain risk factors were calculated. Results: Two hundred pregnant women were enrolled. The Prevalence Rate for chronic infection with hepatitis B virus, diagnosed using the rapid immune-chromatographic assay for Hepatitis B surface antigen (HBsAg), was 8.5%. (95% CI; 4.7% - 12.3%). None of the suspected risk factors studied were found to be significantly associated with testing positive for HBV, except for a history of previous jaundice. Conclusion: The prevalence of HBV chronic infection among pregnant women in Bor, Jonglei State, is high hence there is a need for established public health interventions that can lead to a reduction of HBV vertical transmission. Treatment of pregnant women with HBV chronic infection using anti-viral medications during pregnancy might curb the vertical transmission rates.


Subject(s)
Hepatitis B virus , Risk Factors , Chromatography, Affinity , Pregnant Women , Hepatitis B Surface Antigens , Hepatitis B Vaccines , Hepatitis B, Chronic
5.
Rev. med. vet. zoot ; 69(2): 155-165, mayo-ago. 2022. tab, graf
Article in Spanish | LILACS, COLNAL | ID: biblio-1395018

ABSTRACT

Resumen Los virus de inmunodeficiencia y leucemia felina representan un problema de gran envergadura para los felinos domésticos debido a la multiplicidad de sintomatologías que manifiestan. El objetivo del presente estudio fue establecer, retrospectivamente, la prevalencia en la presentación de ViLeF y VIF en pacientes de seis clínicas de pequeños animales en Bogotá y Chía, en relación con factores como su edad, raza y género. Se realizó un estudio transversal y retrospectivo, mediante la recopilación de datos de 1.014 historias clínicas de pacientes felinos que ingresaron a seis clínicas de la ciudad de Bogotá y Chía, para determinar la prevalencia de VIF y ViLeF y la asociación de estas con factores como edad, género y raza, entre 2015 y 2019, a través de la prueba OR. La detección de los virus se realizó mediante una prueba rápida basada en inmunocromatografía. La mayor prevalencia para cada enfermedad por año fue: 12,3% para VIF en 2012 y 18% para ViLeF en 2019. Los machos presentaron mayores seroprevalencias para ambas enfermedades durante la mayoría los años evaluados. Factores como raza (criolla: VIF: 1,85; ViLeF: 2,01), género (macho: VIF: 1,53 OR; ViLeF: 1,64) y edad (> 7 años: VIF: 3,82; ViLeF: 3,21) se relacionaron positivamente con la presentación de ambas enfermedades en la población felina evaluada.


Abstract Immunodeficiency virus and feline leukemia virus represent major problems for domestic felines due to the multiplicity of symptoms they manifest. The objective of the present study was to establish, retrospectively, the prevalence in the presentation of FeLV and FIV in patients from six small animal clinics in Bogota and Chia, related to factors such as age, race, and gender. A cross-sectional and retrospective study was carried out, collecting data from 1.014 clinical records of feline patients who were admitted to six clinics in the city of Bogota and Chia, to determine the prevalence of FIV and FeLV and their association with factors such as age, gender, and race, between 2015 and 2019 through the OR test. The detection of the viruses was carried out through a rapid test based on immunochromatography. The highest prevalence for each disease per year was 12,3% for FIV in 2012 and 18% for FeLV in 2019. Males presented higher seroprevalences for both diseases during most of the years evaluated. Factors such as race (Creole: FIV: 1,85; FeLV: 2,01), gender (male: FIV: 1.53 OR, FeLV: 1,64), and age (> 7 years: FIV: 3.82; FeLV: 3.21) were positively related to the presentation of both diseases in the feline population evaluated.


Subject(s)
Animals , Cats , Viruses , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Leukemia , Chronic Disease , Disease , Chromatography, Affinity , Immunodeficiency Virus, Feline , Leukemia Virus, Feline , Diagnosis , Retroviridae , Hospitals, Animal
6.
Actual. SIDA. infectol ; 30(109): 38-47, 20220000. tab, fig
Article in Spanish | LILACS, BINACIS | ID: biblio-1392519

ABSTRACT

La criptococosis es una micosis grave que se manifiesta, en el 90% de los casos, como una meningoencefalitis, especialmente en las personas con VIH. El objetivo de este estudio es describir los casos de criptococosis extrameníngea en personas viviendo con VIH y conocer cuántas de estas padecen compromiso meníngeo concomitante. Además, determinar la relación con el título de antígeno polisacárido capsular de Cryptococcus en suero. Se realizó un estudio retrospectivo, observacional y analítico. Se incluyeron personas viviendo con VIH cuyo diagnóstico inicial de criptococosis se había realizado a partir de muestras extrameníngeas en el período comprendido entre 2012 y 2019. Los pacientes se dividieron en dos grupos. Grupo 1, pacientes sin compromiso meníngeo; Grupo 2, aquellos que finalmente tenían compromiso del SNC. De un total de 531 criptococosis registradas en ese período, se incluyeron 113 pacientes (21%), de los cuales en 58 se comprobó el compromiso meníngeo. No se observaron diferencias significativas en cuanto a la mortalidad entre ambos grupos.Ninguno de los pacientes con antigenemia por LFA (antígeno capsular en suero por inmunocromatografía) positiva, pero con antigenemia por aglutinación de partículas de látex (AL) negativa, tuvo compromiso meníngeo. Se observó que títulos de antígeno para Cryptococcus en suero por AL mayor o igual a 1/100 se correlacionaron con un aumento de 30 veces en la posibilidad de padecer meningitis. En todos los casos se debe descartar el compromiso del SNC. La AL sigue siendo una prueba útil y complementaria, debido a que en los casos con AL negativa no se observó compromiso meníngeo


Cryptococcosis is a serious mycosis that manifests itself, in 90% of cases, as meningoencephalitis, especially in AIDS patients. The objective of this study is to describe the extra-meningeal cases of cryptococcosis in people living with HIV and to know how many of them suffer from concomitant meningeal involvement. Also, to determine its relationship with the Cryptococcus capsular polysaccharide antigen titer in serum.A retrospective, observational and analytical study was carried out. HIV-positive patients whose initial diagnosis had been made from extrameningeal samples in the period between 2012 and 2019 were included. The patients were divided into 2 groups. Group 1: patients without meningeal involvement; group 2: those who finally had CNS involvement.Of a total of 531 cryptococcosis registered in this period, 113 patients (21%) were included, of whom meningeal involvement was confirmed in 58. No significant differences were observed in terms of mortality in both groups.None of the patients with positive LFA antigenemia (Capsular antigen detection by lateral Flow assay) but negative latex particle agglutination (LA) antigenemia had meningeal involvement. LFA was found to be highly sensitive and allows early diagnosis, but it does not replace other diagnostic procedures.Serum Cryptococcus antigen titers for by LA greater than or equal to 1/100 were found to correlate with a 30-fold increase in the likelihood of meningitis.In all cases, CNS involvement must be ruled out. LA continues to be a useful and complementary test, because in cases with negative LA, no meningeal involvement was observed


Subject(s)
Humans , Spinal Puncture , Concurrent Symptoms , Retrospective Studies , Chromatography, Affinity/statistics & numerical data , HIV/immunology , Cryptococcosis/diagnosis , Cryptococcosis/therapy , Point-of-Care Testing
7.
Rev. med. vet. zoot ; 69(1): 11-18, ene.-abr. 2022. tab, graf
Article in Spanish | LILACS, COLNAL | ID: biblio-1389163

ABSTRACT

RESUMEN La leucemia viral felina (ViLeF) es una enfermedad retroviral letal, de una elevada prevalência en Colombia, que afecta a felinos de diferentes edades y sexos. El objetivo de esta investigación fue determinar la frecuencia por serodiagnóstico de ViLeF en felinos del centro integral de bienestar animal Ceiba, ubicado en Rionegro, Antioquia (Colombia), en 2020. Para ello, se realizó un estudio descriptivo longitudinal de serofrecuencia de ViLeF desde enero hasta diciembre de 2020. Fueron muestreados 92 gatos, a los cuales se les efectuó una prueba p27 por inmunoensayo comercial Elisa (Idexx©, Snap Combo Plus®, Maine, EE. UU.). La frecuencia de felinos positivos fue 30/92 (32,60%) y el mes de mayo fue el de mayor frecuencia (9,78%). Los machos positivos fueron 17/92 (18,47%) y las hembras 13/92 (14,13%). La edad promedio de seropositividad fue 2,14 años. La frecuencia de ViLeF en 2020 para Ceiba, Rionegro (Colombia) es de 32,60%, un valor elevado con respecto a descripciones en otros albergues para felinos. ViLeF es una enfermedad que está siendo reportada con mayor frecuencia en Colombia, debido a que las medidas de prevención no se están adoptando rutinariamente.


ABSTRACT Feline viral leukemia (ViLeF) is a lethal retroviral disease with a high prevalence in Colombia that affects felines of different ages and sexes. The purpose of this investigation was to determine the frequency by serodiagnosis of ViLeF in felines of the integral center of animal welfare Ceiba, located in Rionegro, Antioquia (Colombia), during 2020. For that, a longitudinal descriptive study of ViLeF serofrequency from were made January to December 2020. 92 cats were sampled, which were tested for p27 by commercial Elisa immunoassay (Idexx©, Snap Combo Plus®, Maine, USA). The frequency of positive felines was 30/92 (32,60%). May was the month with the highest frequency (9,78%). The positivity frequency for males was 17/92 (18,47%) and the frequency for females 13/92 (14,13%). The main age of seropositivity was 2,14 years. The frequency of ViLeF in 2020 for Ceiba, Rionegro (Colombia) is 32,60%. This is a high value in comparison to descriptions in other shelters for felines. ViLeF, in Colombia, is a disease that has been reported with more frequency because prevention measures are not being adopted routinely.


Subject(s)
Animals , Cats , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Morbidity , Chromatography, Affinity , Leukemia, Feline , Leukemia Virus, Feline , Felidae , Immunoassay , Serologic Tests , Disease , Prevalence
8.
Braz. j. biol ; 82: 1-10, 2022. map, tab, ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1468568

ABSTRACT

Hepatitis B virus infection is perilous among the five types of Hepatitis, as it remains clinically asymptomatic. The present study draws up-to-date prevalence of Hepatitis B virus (HBV) in the general population of Mardan, Khyber Pakhtunkhwa Pakistan. The blood samples from 4803 individuals including 2399 male and 2404 females were investigated. All the suspected samples were analyzed for hepatitis B surface antigen using Immuno-chromatographic test (ICT), Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and followed by Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Results showed that 312 (13.00%) out of 2399 individuals contained antibodies in their blood against HBV, while among the different age groups, the highest incidences of HBV antibodies were found in the age of 21-30 groups (10.73%). Furthermore, the ICT positive samples were screened by nested polymerase chain reaction to detect the existence of active HBV-DNA. It was observed that 169 (7.04%) out of (2399) male of the total population (4803) tested was positive. On the other hand, the female 463 (19.25%) possessed antibodies in their blood against HBV. Accumulatively, our results showed a higher percentage of HBV prevalence in males than females in the age group 21-30 years. The total HCV infected in Mardan general population was recorded at 5.7% comprising both male and female.


A infecção pelo vírus da hepatite B é perigosa entre os cinco tipos de hepatite, pois permanece clinicamente assintomática. O presente estudo traça a prevalência atualizada do vírus da hepatite B (HBV) na população geral de Mardan, Khyber Pakhtunkhwa, no Paquistão. Amostras de sangue de 4.803 indivíduos, incluindo 2.399 homens e 2.404 mulheres, foram investigadas. Todas as amostras suspeitas foram analisadas para o antígeno de superfície da hepatite B usando teste imunocromatográfico (ICT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), seguido por transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Os resultados mostraram que 312 (13,00%) de 2.399 indivíduos continham anticorpos no sangue contra o VHB, enquanto, entre as diferentes faixas etárias, as maiores incidências de anticorpos VHB foram encontradas nos grupos de 21 a 30 anos (10,73%). Além disso, amostras positivas para ICT foram rastreadas por reação em cadeia da polimerase aninhada para detectar a existência de HBV-DNA ativo. Observou-se que 169 (7,04%) de 2.399 homens do total da população (4803) testados foram positivos. Por outro lado, 463 mulheres (19,25%) possuíam anticorpos no sangue contra VHB. Acumulativamente, nossos resultados mostraram uma porcentagem maior de prevalência de HBV em homens do que em mulheres na faixa etária de 21 a 30 anos. O total de HCV infectados na população geral de Mardan foi registrado em 5,7%, incluindo homens e mulheres.


Subject(s)
Humans , Hepatitis B/diagnosis , Hepatitis B/blood , Hepatitis B/virology , Chromatography, Affinity , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Polymerase Chain Reaction
9.
São Paulo; s.n; s.n; 2022. 188 p. tab, graf.
Thesis in Portuguese | LILACS | ID: biblio-1396966

ABSTRACT

A variabilidade estrutural é uma característica das proteínas de venenos de serpentes, e a glicosilação é uma das principais modificações pós-traducionais que contribui para a diversificação de seus proteomas. Recentes estudos de nosso grupo demonstraram que venenos do gênero Bothrops são marcadamente definidos pelo seu conteúdo de glicoproteínas, e que a maioria das estruturas de N-glicanos dos tipos híbrido e complexo identificados em oito venenos deste gênero contêm unidades de ácido siálico. Em paralelo, em glicoproteínas do veneno de B. cotiara foi identificada a presença de uma estrutura de N-acetilglicosamina bissecada. Assim, com o objetivo de investigar a variação do conteúdo de glicoproteínas, assim como os mecanismos envolvidos na geração dos diferentes venenos de Bothrops, neste estudo foram analisados comparativamente os glicoproteomas de nove venenos do gênero Bothrops (B. atrox, B. cotiara, B. erythromelas, B. fonsecai, B. insularis, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni e B. neuwiedi). As abordagens glicoproteômicas envolveram cromatografia de afinidade e ensaio de pull-down utilizando, respectivamente, as lectinas SNA (aglutinina de Sambucus nigra) e MAL I (lectina de Maackia amurensis), que mostram afinidade por unidades de ácido siálico nas posições, respectivamente, α2,6 e α2,3; e cromatografia de afinidade com a lectina PHA-E (eritroaglutinina de Phaseolus vulgaris), que reconhece N-acetilglicosamina bissecada. Ainda, eletroforese de proteínas, blot de lectina, e identificação de proteínas por espectrometria de massas foram empregadas para caracterizar os glicoproteomas. As lectinas geraram frações dos venenos enriquecidas de diferentes componentes, onde as principais classes de glicoproteínas identificadas foram metaloprotease, serinoprotease, e L-amino ácido oxidase, além de outras enzimas pouco abundantes nos venenos. Os diferentes conteúdos de proteínas reconhecidas por essas lectinas, com especificidades distintas, ressaltaram novos aspectos da variabilidade dos subproteomas de glicoproteínas desses venenos, dependendo da espécie. Ainda, considerando que metaloproteases e serinoproteases são componentes abundantes nesses venenos e fundamentais no quadro de envenenamento botrópico, e que estas enzimas contêm diversos sítios de glicosilação, o papel das unidades de ácido siálico na atividade proteolítica das mesmas foi avaliado. Assim, a remoção enzimática de ácido siálico (i) alterou o padrão de gelatinólise em zimografia da maioria dos venenos, (ii) diminuiu a atividade proteolítica de alguns venenos sobre o fibrinogênio e a atividade coagulante do plasma humano de todos os venenos, e (iii) alterou o perfil de hidrólise de proteínas plasmáticas pelo veneno de B. jararaca, indicando que este carboidrato pode desempenhar um papel na interação das proteases com seus substratos proteicos. Em contraste, o perfil da atividade amidolítica dos venenos não se alterou após a remoção de ácido siálico e incubação com o substrato Bz-Arg-pNA, indicando que ácido siálico não é essencial em N-glicanos de serinoproteases atuando sobre substratos não proteicos. Em conjunto, esses resultados expandem o conhecimento sobre a variabilidade de proteomas de venenos do gênero Bothrops e apontam a importância das cadeias de carboidratos contendo ácido siálico nas atividades enzimáticas das proteases desses venenos


Structural variability is a feature of snake venom proteins, and glycosylation is one of the main post-translational modifications that contributes to the diversification of venom proteomes. Recent studies by our group have shown that Bothrops venoms are markedly defined by their glycoprotein content, and that most hybrid and complex N-glycan structures identified in eight venoms of this genus contain sialic acid units. In parallel, the presence of a bisected N-acetylglucosamine structure was identified in B. cotiara venom glycoproteins. Thus, with the aim of investigating the variation in the content of glycoproteins, as well as the mechanisms involved in the generation of different Bothrops venoms, in this study the glycoproteomes of nine Bothrops venoms (B. atrox, B. cotiara, B. erythromelas, B. fonsecai, B. insularis, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni e B. neuwiedi) were comparatively analyzed. The glycoproteomic approaches involved affinity chromatography and pulldown using, respectively, the lectins SNA (Sambucus nigra agglutinin) and MAL I (Maackia amurensis lectin), which show affinity for sialic acid units at positions, respectively, α2,6 and α2,3, and affinity chromatography with PHA-E (Phaseolus vulgaris erythroagglutinin), which recognizes bisected N-acetylglucosamine. In addition, protein electrophoresis, lectin blot, and protein identification by mass spectrometry were employed for glycoproteome characterization. The lectins generated venom fractions enriched with different components, where the main classes of glycoproteins identified were metalloprotease, serine protease, and L-amino acid oxidase, in addition to other low abundant enzymes. The different contents of proteins recognized by these lectins of distinct specificities highlighted new aspects of the variability of the glycoprotein subproteomes of these venoms, depending on the species. Furthermore, considering that metalloproteases and serine proteases are abundant components of these venoms and essential in Bothrops envenomation, and that these enzymes contain several glycosylation sites, the role of sialic acid units in their proteolytic activities was evaluated. Thus, enzymatic removal of sialic acid (i) altered the pattern of gelatinolysis in zymography of most venoms, (ii) decreased the proteolytic activity of some venoms on fibrinogen and the clotting activity of human plasma of all venoms, and (iii) altered the hydrolysis profile of plasma proteins by B. jararaca venom, indicating that this carbohydrate may play a role in the interaction of proteases with their protein substrates. In contrast, the profile of amidolytic activity of the venoms did not change after removal of sialic acid and incubation with the substrate Bz-Arg-pNA, indicating that sialic acid is not essential in N-glycans of serine proteases acting on small substrates. Together, these results expand the knowledge about the variability of proteomes of Bothrops venoms and point to the importance of carbohydrate chains containing sialic acid in the enzymatic activities of venom proteases


Subject(s)
Poisons , Snake Venoms/adverse effects , Glycosylation , Bothrops/classification , Proteome/administration & dosage , Mass Spectrometry/methods , Venoms/adverse effects , Coagulants/adverse effects , Chromatography, Affinity , Sambucus nigra/classification , Proteolysis
10.
Acta bioquím. clín. latinoam ; 55(4): 475-483, dic. 2021. graf
Article in Spanish | LILACS, BINACIS | ID: biblio-1393751

ABSTRACT

Resumen Un diagnóstico rápido y seguro de la infección por Trypanosoma cruzi permite la administración inmediata de un tratamiento etiológico específico, en los casos clínicamente manifiestos. En el presente trabajo, en 100 sueros de pacientes con diagnóstico presuntivo de infección por T. cruzi, se evaluó el desempeño de la prueba rápida Chagas Ab Rapid SD Bioline (PDR) para el diagnóstico serológico, se la comparó con el estándar diagnóstico (par serológico) y se la valoró para su empleo en la rutina del laboratorio. La PDR reveló un índice de concordancia muy bueno respecto del estándar diagnóstico (Kappa=0,989 [IC95% 0,965-1,000]) y los parámetros de sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos revelaron un buen desempeño. El índice de Youden informó un buen rendimiento de la prueba (J=0,98 [IC95% 0,93-1,02]); y en el mismo sentido, tanto la razón de verosimilitud positiva (RV (+)= infinito), como la negativa (RV (-)= 0,02 [IC95% 0,00-0,16]), mostraron aumentada la probabilidad que la enfermedad blanco esté presente o ausente, cuando la técnica así lo determinaba. El empleo de una PDR, por su simpleza y buen desempeño (con resultados disponibles el mismo día) produciría una optimización de recursos, podría realizarse en lugares donde el acceso al diagnóstico es limitado y donde su incorporación no requeriría de una infraestructura importante. Por otro lado, en nuestro caso, podría ser utilizada como segunda prueba, para incrementar la especificidad del diagnóstico serológico de la infección por T. cruzi.


Abstract A quick and safe diagnosis of Trypanosoma cruzi infection allows the immediate etiological treatment in clinically manifested cases. In the present work, the performance of the rapid Chagas Ab Rapid SD Bioline (PDR) test for serological diagnosis was evaluated in 100 sera from patients with a presumptive diagnosis of T. cruzi infection, it was compared with the diagnostic standard (serological pair) and this technique was valued to be used within the laboratory routine. The PDR revealed a very good concordance index with respect to the diagnostic standard (Kappa=0.989 [95% CI 0.965-1.000]) and the parameters of sensitivity, specificity, positive and negative predictive values revealed good performance. The Youden index reported good performance of the diagnostic test (J = 0.98 [95% CI 0.93-1.02]); and in the same sense, both the positive likelihood ratio (RV (+) = infinity), and the negative (RV (-) = 0.02 [95% CI 0.00-0.16]) showed an increased probability whether the target disease was present or absent, when the technique so determined. The use of a PDR, due to its simplicity and good performance (with results available on the same day) would produce an optimization of resources, could be carried out in places where access to the diagnosis is limited and where its incorporation would not require an important infrastructure. On the other hand, in our case, it could be used as a second test, to increase the specificity of the serological diagnosis of T. cruzi infection.


Resumo Um diagnóstico rápido e seguro da infecção pelo Trypanosoma cruzi permite a administração imediata de um tratamento etiológico específico nos casos clinicamente manifestos. No presente trabalho, o desempenho do teste rápido Chagas Ab Rapid SD Bioline (PDR) para o diagnóstico sorológico foi avaliado em 100 soros de pacientes com diagnóstico provável de infecção por T. cruzi, foi comparado com o padrão diagnóstico (par sorológico) e essa técnica foi avaliada para ser utilizada na rotina do laboratório. O PDR revelou um índice de concordância muito bom em relação ao padrão diagnóstico (Kappa=0,989 [IC 95% 0,965-1.000]) e os parâmetros de sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos revelaram bom desempenho. O índice de Youden informou um bom desempenho do teste diagnóstico (J = 0,98 [IC 95% 0,93-1,02]); e, no mesmo sentido, tanto a razão de verossimilhança positiva (RV (+) = infinito), quanto a negativa (RV (-) = 0,02 [IC 95% 0,00-0,16]), mostraram uma probabilidade aumentada de a doença-alvo estar presente ou ausente, quando a técnica assim o determinar. A utilização de um PDR, pela sua simplicidade e por um bom desempenho (com resultados disponíveis no mesmo dia) produziria uma otimização de recursos, podendo ser realizado em locais onde o acesso ao diagnóstico é limitado, e onde a sua incorporação não exigiria um infraestrutura importante. Por outro lado, no nosso caso, poderia ser utilizado como segundo teste, para aumentar a especificidade do diagnóstico sorológico da infecção pelo T. cruzi.


Subject(s)
Humans , Trypanosoma cruzi/growth & development , Chromatography, Affinity , HIV , Parasitology , Rutin , Disease , Predictive Value of Tests , Sensitivity and Specificity , Chagas Disease , Clinical Laboratory Techniques , Diagnostic Techniques and Procedures , Diagnostic Tests, Routine , Efficiency , Health Resources , Infections , Laboratories , Methods
12.
Biomédica (Bogotá) ; 41(2): 260-270, abr.-jun. 2021. tab, graf
Article in Spanish | LILACS | ID: biblio-1339265

ABSTRACT

Resumen | Introducción. El riesgo de infección con Brucella canis en humanos y perros aumenta con la exposición constante a perros portadores asintomáticos. En Colombia hay evidencia de infección con B. canis en personas que conviven con perros. Una preocupación adicional en Bogotá es la falta de información actualizada sobre la prevalencia de la infección en perros destinados a programas de adopción. Objetivo. Establecer la seroprevalencia de la infección por B. canis en perros de un refugio para animales de compañía destinados a la adopción en Bogotá. Materiales y métodos. Se hizo un estudio descriptivo de corte transversal en un refugio para animales de Bogotá. Se detectaron anticuerpos contra B. canis en el suero de 51 perros (28 hembras y 23 machos) mediante una prueba inmunocromatográfica de flujo lateral. Asimismo, los individuos positivos se analizaron con PCR para la detección del ADN de Brucella spp. Resultados. La seroprevalencia de B. canis fue del 1,96 % (1/51). El perro seropositivo correspondió a una hembra asintomática de tres años de edad en la cual no se detectó ADN bacteriano en sangre mediante la PCR. Conclusiones. La seroprevalencia representada por un solo perro con IgG anti-B. canis puede considerarse un riesgo potencial para las poblaciones de perros y humanos, ya que podría tratarse de un animal con infección persistente capaz de diseminar la bacteria.


Abstract | Introduction: The risk of Brucella canis infection in humans and dogs has increased due to the permanent exposure to asymptomatic carrier dogs. In Colombia, there is evidence of B. canis infection in humans living with dogs. In the case of Bogotá, an additional concern is the lack of updated information related to the prevalence of the infection in dogs. Objective: To determine the seroprevalence of infection by B. canis in dogs intended for adoption programs in Bogotá. Materials and methods: By means of a descriptive cross-sectional study carried out in a dog shelter in Bogotá, anti-B. canis IgG antibodies were detected in the serum from 51 dogs (28 females and 23 males) using a lateral-flow immunochromatographic test. Additionally, seropositive animals were analyzed with PCR to detect Brucella spp DNA. Results: Brucella canis seroprevalence was 1.96% (1/51). The seropositive dog was an asymptomatic three-year-old she-dog in which no bacteria DNA was detected in the blood through PCR. Conclusions: The seroprevalence determined in this study represented by a single dog with anti-B. canis IgG can be considered a potential risk both for canine and human populations since this single dog could have a persistent infection capable of spreading the bacteria.


Subject(s)
Brucellosis , Dogs , Zoonoses , Public Health , Chromatography, Affinity
13.
Rev. Bras. Saúde Mater. Infant. (Online) ; 21(2): 531-537, Apr.-June 2021. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1340655

ABSTRACT

Abstract Objectives: the aim of this study is to evaluate the impact of co-detection of Flu A and RSV using rapid immunochromatographic tests at the point of care, in pediatric patients under 2 years of age in a general hospital. Methods: a retrospective cohort study was conducted to analyze clinical outcomes in hospitalized infants with viral respiratory disease with positive results of rapid immunochromatographic test for RSV and/or Flu-A, from 2013 to 2018. A logistic regression model was adjusted to analyze predictors of orotracheal intubation during hospitalization. Results: we analyzed 220 cases: RSV (192), Flu-A (9), co-detection (19). Lethality rate was 1.8% (2 cases), and 88% (194) were under 1 year of age. Mean time of hospitalizations was higher in patients with co-detection. Variables significantly associated with orotracheal intubation were: younger age in months, comorbidities, RSV and Flu-A co-detection, and bacterial pneumonia during hospitalization. Conclusions: RSV and Flu-Aco-detection was associated with the least favorable clinical prognoses in this study. Rapid test diagnosis may provide important information at the point of care, because molecular panels are not widely accessible in general hospitals. Rapid diagnosis allows timely evaluation and treatment.


Resumo Objetivos: avaliar o impacto da codetecção de Influenza A (FluA) e Vírus Sincicial Respiratório (VSR) por meio de testes imunocromatográficos rápidos em tempo real, em pacientes menores de 2 anos em hospital público e universitário. Métodos: estudo de coorte retrospectivo foi conduzido para analisar os desfechos clínicos de crianças hospitalizadas com doença respiratória viral com resultados positivos do teste rápido imunocromatográfico para VSR e/ou FluA, de 2013 a 2018. Um modelo de regressão logística foi ajustado para analisar preditores de intubação orotraqueal durante a internação. Resultados: foram analisados 220 casos: RSV (192), FluA (9) eco-detecção (19). A letalidade foi de 1,8% (2 casos) e 88% (194) casos em menores de 1 ano. O tempo médio de internação foi maior nos pacientes com codetecção. As variáveis significativamente associadas à intubação orotraqueal foram: menor idade em meses, comorbidades, codetecção de VSR e Flu-A e pneumonia bacteriana durante a internação. Conclusões: codetecção VSR e FluA foi associada a prognósticos clínicos desfavoráveis. O teste rápido fornece informações importantes a beira-leito, pois os painéis moleculares não são amplamente acessíveis em hospitais públicos. O diagnóstico rápido permite a avaliação e tratamento oportunos.


Subject(s)
Humans , Child , Prognosis , Respiratory Syncytial Viruses/isolation & purification , Influenza, Human/diagnosis , Point-of-Care Testing/statistics & numerical data , Cohort Studies , Chromatography, Affinity/methods
14.
Rev. bras. ciênc. vet ; 28(1): 30-36, jan./mar. 2021. tab, graf
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1491697

ABSTRACT

Objetivou-se através deste trabalho, determinar a prevalência de cinomose canina no semiárido da Paraíba, através de testes rápidos imunocromatográficos, correlacionando-a com os principais achados clínicos e hematológicos. Foram analisadas 67 fichas de animais em que foram realizados testes rápidos para pesquisa de antígeno em amostras nasais e oculares no período de janeiro a dezembro de 2019. Observou-se que 47% (32/67) dos cães analisados foram positivos para cinomose canina. As variáveis que apresentaram diferença estatística significativa (p<0,05) para a infecção foram animais sem raça definida 60% (21/35), animais não vacinados 70% (29/42), e período seco do ano, sendo o mês de agosto (40%; 13/32), com maior ocorrência. Os principais sistemas afetados foram o respiratório 61% (17/28), oftalmológico 70% (22/31), nervoso 69% (13/19), dermatológico 45% (9/20), e gastrintestinal 42% (6/14). As principais alterações hematológicas foram anemia 66% (23/32), leucopenia 76% (19/25) e linfopenia 48% (15/31). Concluiu-se que foi elevada a ocorrência de cinomose canina em animais com suspeita clínica no Semiárido Paraibano, e animais sem raça definida, não vacinados, no período seco do ano foram mais diagnosticados com a enfermidade.


The objective of this study was to determine the prevalence of distemper canine distemper vírus (CDV) infection in the semi-arid region of Paraíba, using rapid immunochromatographic tests, correlating it with the main clinical and hematological findings. 67 records of animals were analyzed in which rapid tests were performed for antigen research in nasal and ocular from January to December 2019. It was observed that 47% (32/67) of compulsory dogs were positive for canine distemper. The variables that defined difference difference (p <0.05) for infection were mixed breed animals 60% (21/35), unvaccinated animals 70% (29/42), and dry period of the year, being the August (40%; 13/32), with greater occurrence. The main affected systems were the respiratory 61% (17/28), ophthalmological 70% (22/31), nervous 69% (13/19), dermatological 45% (9/20), and gastrointestinal 42% (6/14 )) The main changes were hematological, anemia 66% (23/32), leukopenia 76% (19/25) and lymphopenia 48% (15/31). It was concluded that the occurrence of canine distemper in animals with clinical suspicion in the Semiarid Paraibano was high, and non-vaccinated mixed-breed animals in the dry period of the year were more diagnosed with the disease.


Subject(s)
Animals , Dogs , Distemper/diagnosis , Distemper/immunology , Chromatography, Affinity/methods , Chromatography, Affinity/veterinary , Dogs/blood , Dogs/virology , Hematologic Tests
15.
Rev. bras. ciênc. vet ; 28(1): 30-36, jan./mar. 2021. il.
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1368538

ABSTRACT

Objetivou-se através deste trabalho, determinar a prevalência de cinomose canina no semiárido da Paraíba, através de testes rápidos imunocromatográficos, correlacionando-a com os principais achados clínicos e hematológicos. Foram analisadas 67 fichas de animais em que foram realizados testes rápidos para pesquisa de antígeno em amostras nasais e oculares no período de janeiro a dezembro de 2019. Observou-se que 47% (32/67) dos cães analisados foram positivos para cinomose canina. As variáveis que apresentaram diferença estatística significativa (p<0,05) para a infecção foram animais sem raça definida 60% (21/35), animais não vacinados 70% (29/42), e período seco do ano, sendo o mês de agosto (40%; 13/32), com maior ocorrência. Os principais sistemas afetados foram o respiratório 61% (17/28), oftalmológico 70% (22/31), nervoso 69% (13/19), dermatológico 45% (9/20), e gastrintestinal 42% (6/14). As principais alterações hematológicas foram anemia 66% (23/32), leucopenia 76% (19/25) e linfopenia 48% (15/31). Concluiu-se que foi elevada a ocorrência de cinomose canina em animais com suspeita clínica no Semiárido Paraibano, e animais sem raça definida, não vacinados, no período seco do ano foram mais diagnosticados com a enfermidade.


The objective of this study was to determine the prevalence of distemper canine distemper vírus (CDV) infection in the semi-arid region of Paraíba, using rapid immunochromatographic tests, correlating it with the main clinical and hematological findings. 67 records of animals were analyzed in which rapid tests were performed for antigen research in nasal and ocular from January to December 2019. It was observed that 47% (32/67) of compulsory dogs were positive for canine distemper. The variables that defined difference difference (p <0.05) for infection were mixed breed animals 60% (21/35), unvaccinated animals 70% (29/42), and dry period of the year, being the August (40%; 13/32), with greater occurrence. The main affected systems were the respiratory 61% (17/28), ophthalmological 70% (22/31), nervous 69% (13/19), dermatological 45% (9/20), and gastrointestinal 42% (6/14 )) The main changes were hematological, anemia 66% (23/32), leukopenia 76% (19/25) and lymphopenia 48% (15/31). It was concluded that the occurrence of canine distemper in animals with clinical suspicion in the Semiarid Paraibano was high, and non-vaccinated mixed-breed animals in the dry period of the year were more diagnosed with the disease.


Subject(s)
Animals , Dogs , Chromatography, Affinity/veterinary , Distemper/diagnosis , Distemper Virus, Canine , Dogs/virology , Clinical Laboratory Techniques/veterinary , Semi-Arid Zone , Diagnosis
16.
Chinese Journal of Biotechnology ; (12): 4066-4074, 2021.
Article in Chinese | WPRIM | ID: wpr-921487

ABSTRACT

Different fragments of SARS-CoV-2 nucleocapsid (N) protein were expressed and purified, and a fluorescence immunochromatography method for detection of SARS-CoV-2 total antibody was established. The effect of different protein fragments on the performance of the method was evaluated. The N protein sequence was analyzed by bioinformatics technology, expressed in prokaryotic cell and purified by metal ion affinity chromatography column. Different N protein fragments were prepared for comparison. EDC reaction was used to label fluorescence microsphere on the synthesized antigen to construct sandwich fluorescence chromatography antibody detection assay, and the performance was systemically evaluated. Among the 4 prepared N protein fragments, the full-length N protein (N419) was selected as the optimized coating antigen, N412 with 0.5 mol/L NaCl was used as the optimal combination; deleting 91-120 amino acids from the N-terminal of N412 reduced non-specific signal by 87.5%. the linear range of detection was 0.312-80 U/L, the limit of detection was 0.165 U/L, and the accuracy was more than 95%. A fluorescence immunochromatographic detection method for analysis of SARS-CoV-2 total antibody was established by pairing N protein fragments. The detection result achieved 98% concordance with the commercially available Guangzhou Wanfu test strip, which is expected to be used as a supplementary approach for detection of SARS-CoV-2. The assay could also provide experimental reference for improving the performance of COVID-19 antibody detection reagents.


Subject(s)
Humans , Antibodies, Viral , COVID-19 , Chromatography, Affinity , Fluorescent Antibody Technique , Microspheres , SARS-CoV-2 , Sensitivity and Specificity
17.
Rio de Janeiro; s.n; 2021. 104 p. ilus, graf, tab.
Thesis in Portuguese | LILACS | ID: biblio-1552871

ABSTRACT

A doença por coronavírus 2019 (COVID-19), causada por síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2), foi declarada uma pandemia pela Organização Mundial da Saúde (OMS) em 11 de março de 2020 (1). O conhecimento da resposta imune inata e adaptativa do hospedeiro e eficiência de infecção do vírus são cruciais para controle da infecção. Estudos recentes sugerem que os anticorpos contra SARS-CoV-2 diminuem após algumas semanas do início dos sintomas. O objetivo deste estudo foi descrever as características clínicas e laboratoriais dos trabalhadores de saúde que mantiveram o resultado positivo na avaliação sorológica de anticorpos Imunoglobulina (Ig) G anti- nucleocapsídeo (anti-N) para SARS-Cov-2. Este estudo foi realizado de forma transversal, descritivo e analítico. A coleta de dados foi efetuada através de questionário autoaplicável e teste de imunocromatografia de fluxo lateral para avaliação de anticorpo IgM e IgG específico para proteína N do SARS-COV 2. A análise dos resultados ocorreu utilizando os dados de três avaliações distintas dos trabalhadores de saúde no IFF-Fiocruz, entre junho e novembro de 2020. A maior produção de IgG foi relacionada a trabalhadores não brancos, com Reação quantitativa de transcrição reversa acoplada à reação em cadeia da polimerase (RT - PCR) confirmados e que relataram sintomas como dor no peito, dispneia, fadiga e ageusia. A chance de soro persistência foi 56,9% maior dentre os sintomáticos, porém não foi significativa do ponto de vista estatístico (OR=1,569, IC 95%: 0,908-2,711). O tempo mediano de manutenção da soro persistência foi de 211 dias. Este estudo demonstrou que cerca de metade dos trabalhadores que tiveram seus exames reagentes em uma primeira coleta não mantiveram estes níveis.


Coronavirus disease 2019 (COVID-19), caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2), was declared a pandemic by World Health Organization (WHO) on March 11, 2020(1). Knowledge of the host's innate and adaptive immune response and virus infection efficiency are crucial for infection control. Recent studies suggest that antibodies to SARS-CoV-2 decline weeks after symptom onset. This study describes the clinical and laboratory characteristics of health workers who maintained a positive result in the serological evaluation of IgG anti-N antibodies to SARS-Cov-2. This study was carried out in a transversal, descriptive and analytical way. Data collection was performed using a self-administered questionnaire and lateral flow immunochromatography test to assess IgM and IgG antibodies specific for SARS-COV 2 N protein. The analysis of the results was made from three distinct assessments of health workers at the IFF-Fiocruz, between June and November 2020. The highest production of IgG was related to non-white workers, with confirmed RT- PCR and who reported symptoms such as chest pain, dyspnea, fatigue and ageusia. The chance of sero persistence was 56.9% higher among the symptomatic ones, but it was not statistically significant (OR=1.569, 95% CI: 0.908-2.711). The symptom most related to sero persistence was dyspnea, followed by cough, arthralgia and anosmia.The median time of maintenance of serum persistence was 211 days. This study showed that about half of the professionals who had their exams reactive in a first collection, did not maintain their reactive levels.


Subject(s)
Humans , Chromatography, Affinity/methods , Health Personnel , COVID-19 Serological Testing , SARS-CoV-2/immunology , COVID-19/diagnosis , Brazil/epidemiology
18.
Braz. arch. biol. technol ; 64(spe): e21200147, 2021. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1285565

ABSTRACT

Abstract With the COVID-19 pandemic, many diagnostic tests (molecular or immunological) were rapidly standardised, given the urgency of the situation, many are still in the process of being validated. The main objective of this study was to review the aspects of the diagnostic kits approved in Brazil and their application in the different federative units to gather epidemiological information. In order to achieve these objectives, a survey was carried out on the data available at the regulatory agency (ANVISA) and in the literature. The main countries that have registered products in Brazil are China (51.4%), Brazil (16.6%), South Korea (9.2%), USA (8.8%) and Germany (3.6%). The methodologies of these products are based on the detection of nucleic-acid (15.8%), antigen (13%) and antibody (71.2%). In the immunological tests, it was verified that the sensitivity ranged from 55 to 100% and the specificity from 80 to 100%. The percentage of cases in the samples tested in Brazil is elevated in almost all federative units since eight states showed 40% of positive cases in tested samples, while 18 states displayed between 20 and 40%. In conclusion, this review showed that Brazil is dependent on external technology to respond to pandemics, epidemics and endemics disease and needs to improve its biotechnological scheme to solve further diseases outbreaks.


Subject(s)
Humans , Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus/isolation & purification , COVID-19/diagnosis , Immunologic Tests/instrumentation , Brazil/epidemiology , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay/instrumentation , Chromatography, Affinity/instrumentation , COVID-19 Testing/instrumentation , COVID-19 Nucleic Acid Testing/methods
19.
Rev. argent. microbiol ; 52(4): 11-20, dic. 2020. graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1340916

ABSTRACT

Abstract Invasive Streptococcus pyogenes diseases represent the most severe form of infection produced by this microorganism. Early diagnosis and treatment are important, due to its potential severity. Etiological confirmation of invasive infection is performed by culture, which takes between 18 and 48 h. We tested a rapid immunochromatographic assay directly from clinical samples from normally sterile sites and positive blood culture bottles when pos-itive cocci chains were observed by Gram staining. Eighty samples were analyzed. The rapid test was positive in 35 samples: in 34 of them S. pyogenes was confirmed by culture. The immunochromatographic method showed 97.1% sensitivity and 97.8% specificity. The strept A® immunochromatographic rapid test allows to obtain reliable results in less than 10min and is accessible to any microbiology laboratory. This study demonstrates the potential use of a rapid immunochromatographic method directly from clinical samples and positive blood cultures.


Resumen La enfermedad invasiva por Streptococcus pyogenes representa la forma más grave de infección producida por este microorganismo y requiere un rápido diagnóstico, a fin de instaurar un tratamiento adecuado. La confirmación etiológica de esta infección se realiza por cultivo, lo que puede llevar entre 18 y 48 h. En este estudio ensayamos una prueba inmunocromatográfica rápida directamente de muestras clínicas de sitios normalmente estériles y de botellas de hemocultivos positivos cuando la coloración de Gram evidenció cocos gram positivos en cadena. Se analizaron 80 muestras. La prueba rápida fue positiva en 35 muestras: en 34 de ellas se confirmó la presencia de S. pyogenes por cultivo. La sensibilidad y la especificidad de la prueba fueron del 97,1 y el 97,8%, respectivamente. La prueba inmunocromatográfica rápida monteBIO Strep A® permite obtener resultados confiables en menos de 10 min y es accesible para cualquier laboratorio de microbiología. Este estudio demuestra la utilidad de dicha prueba para ser practicada directamente en muestras clínicas y botellas de hemocultivos positivos.


Subject(s)
Humans , Streptococcal Infections , Streptococcus pyogenes , Streptococcal Infections/diagnosis , Immunoassay , Chromatography, Affinity , Sensitivity and Specificity , Diagnostic Tests, Routine
20.
Brasília; s.n; maio 2020. 35 p.
Non-conventional in Portuguese | BRISA, LILACS | ID: biblio-1099659

ABSTRACT

INTRODUÇÃO: O coronavírus da Síndrome Respiratória Aguda Grave 2 (abreviado para SARSCoV-2, do inglês Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2), anteriormente conhecido como novo coronavírus (2019-nCoV), é um agente zoonótico recémemergente que surgiu em dezembro de 2019, em Wuhan, China, causando manifestações respiratórias, digestivas e sistêmicas, que se articulam no quadro clínico da doença denominada COVID-19 (do inglês Coronavirus Disease 2019). Ainda não há informações robustas sobre a história natural da doença, tampouco sobre as medidas de efetividade para o manejo clínico dos casos de infecção pelo COVID19, restando ainda muitos detalhes a serem esclarecidos. No entanto, sabe-se que o vírus tem alta transmissibilidade e provoca uma síndrome respiratória aguda que varia de casos leves ­ cerca de 80% ­ a casos muito graves com insuficiência respiratória - entre 5% e 10% dos casos ­, os quais requerem tratamento especializado em unidades de terapia intensiva (UTI). Sua letalidade varia, principalmente, conforme a faixa etária. TECNOLOGIA: Os testes de diagnóstico para a COVID-19 se destacaram na pandemia de coronavírus em andamento como uma ferramenta essencial para rastrear a propagação da doença. Uma ampla gama de testes diagnósticos para o SARS-CoV-2 está disponível comercialmente, alguns dos quais receberam autorizações para uso por várias agências reguladoras nacionais. Com as informações da sequência genética devidamente identificadas, os testes de diagnóstico baseados na detecção da sequência viral por reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa (RT-PCR) ou plataformas de sequenciamento logo se tornaram disponíveis. Isso permitiu a confirmação do diagnóstico e melhores estimativas da atividade da infecção, que vêm aumentando em velocidades alarmantes. Para a detecção mais sensível de SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2, recomendavam-se a coleta e o teste de amostras respiratórias superiores e inferiores. O diagnóstico de casos suspeitos era confirmado por testes de RNA com RT-PCR em tempo real ou sequenciamento de próxima geração. Foi demonstrado que o RNA viral poderia ser detectado a partir do swab nasal e faríngeo, lavagem broncoalveolar e plasma sanguíneo usando RT-PCR direcionado ao gene do vírus (5). O padrão-ouro para diagnóstico laboratorial da COVID-19 é a reação da transcriptase reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para amostras coletadas no trato respiratório superior ou inferior. OBJETIVO: O objetivo deste relatório é analisar a acurácia dos testes diagnósticos registrados na Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) até a presente data. METODOLOGIA: foi realizada uma busca por diagnósticos para COVID-19 com registros vigentes na ANVISA. Para tal, foram utilizados os termos "COVID 19", SARS e coronavírus no campo de consulta de registro de produtos para saúde no site da Agência (https://consultas.anvisa.gov.br/#/saude/). Os passos para acesso ao banco de dados de produtos diagnósticos na ANVISA são: 1) consulta produtos; 2) consulta a banco de dados; 3) produtos para a saúde e 4) pesquisa de produtos para a saúde registrados. CONCLUSÕES: A ANVISA já avaliou mais de 120 pedidos de registro de produtos para testagens relacionadas à COVID-19 desde o dia 18 de março. A maior parte das petições aguarda complementação de informações por parte das empresas e outras estão sendo analisadas com prioridade. O tempo médio para avaliação dos registros na ANVISA gira em torno de 15 dias. Atualmente, mais da metade dos registros concedidos diz respeito a testes rápidos para anticorpos. Até a presente data, foram registrados 64 testes para diagnóstico da COVID-19, sendo 15 deles moleculares. O teste de polymerase chain reaction em tempo real (RT-PCR) para identificação de SARS-CoV-2 é um teste de elevada sensibilidade e especificidade, ainda que os doentes com maior carga viral possam ter maior probabilidade de um teste positivo. Os testes moleculares baseados em RNA exigem instalações laboratoriais específicas com níveis restritos de biossegurança e técnica. A sensibilidade e especificidade dos testes sorológicos variaram entre os fabricantes. É importante destacar que uma baixa sensibilidade do teste diagnóstico pode resultar em uma maior probabilidade de detectar falsos-negativos, o que poderia interferir principalmente em casos de indivíduos assintomáticos. Em geral, a sensibilidade dos testes foi superior a 85% e a especificidade, superior a 94%. Os testes sorológicos medem a quantidade de dois anticorpos (IgG e IgM) que o organismo produz quando entra em contato com um invasor. Contudo, o desenvolvimento da resposta de um anticorpo à infecção pode ser dependente do hospedeiro e levar tempo. No caso de SARS-CoV-2, estudos iniciais sugerem que a maioria dos pacientes se converte entre 7 e 11 dias após a exposição ao vírus, embora alguns pacientes possam desenvolver anticorpos mais cedo. Devido a esse atraso natural, o teste de anticorpos pode não ser útil no cenário de uma doença aguda (11). Os testes de anticorpos para SARS-CoV-2 podem facilitar (i) o rastreamento de contatos (os testes baseados em RNA também podem ajudar); (ii) a vigilância sorológica nos níveis local, regional, estadual e nacional; e (iii) a identificação de quem já teve contato com o vírus e, portanto, pode (se houver imunidade protetora) ser imune (11,12). Alguns conjuntos de reagentes para testes sorológicos foram autorizados pela ANVISA em caráter emergencial devido à gravidade da situação e à necessidade de ampliar a testagem da população, mas a validação desses reagentes pelos laboratórios é fundamental, uma vez que poucos trabalhos conseguiram ser publicados até o momento. As aprovações estão de acordo com a Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) 348/2020, que define os critérios e os procedimentos extraordinários e temporários para tratamento de petições de registro de medicamentos, produtos biológicos e produtos para diagnóstico in vitro, e mudança pós-registro de medicamentos e produtos biológicos em virtude da emergência de saúde pública internacional decorrente do novo coronavírus. Na RDC, para registro de testes diagnósticos, a ausência de qualquer estudo de desempenho ou restrição de dados deve ser justificada por motivações técnicas que permitam a avalição da confiabilidade dos resultados e da efetividade diagnóstica do produto. Os registros concedidos nas condições dessa Resolução terão a validade de um ano, exceto para situações em que a avaliação da estabilidade seja apresentada por comparação com produtos similares e os demais critérios descritos no Regulamento sejam atendidos. Nesse caso, poderão ter a concessão regular de validade de registro de produtos para saúde por um período de 10 anos. Em resumo, as duas categorias de testes para SARS-CoV-2 podem ser úteis nesse surto, pois, eventualmente, a coleta de múltiplas amostras, regiões e em tempos diferentes durante a evolução da doença pode ser necessária para o diagnóstico da COVID-19.


Subject(s)
Humans , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay/instrumentation , Chromatography, Affinity/instrumentation , Fluorescent Antibody Technique/instrumentation , Coronavirus Infections/diagnosis , Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction/instrumentation , Technology Assessment, Biomedical , Health Evaluation
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