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1.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 73(2): 311-319, Mar.-Apr. 2021. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1248952

ABSTRACT

The objective of this study was to evaluate the rate of conception, metabolic, and structural conditions of cryopreserved bovine sperm cells, plus extender with IGF-1 and glutathione (GSH). 12 ejaculations of Nelore bulls were used, submitted to treatments: control, gSH (2mM/mL), IGF-1 (100ng/mL) and gSH (1mM/mL) + IGF-1 (50ng/mL). After cryopreservation and thawing the semen passed the fast thermo resistance test (TTR), plasma membrane and acrosomal integrity (PIAI), mitochondrial membrane potential (AP), oxidative stress, and conception rate. Tukey test was used for the statistical analysis of the parametric variables and the Friedman test for nonparametric. The gestation percentage was compared by the Chi-square test. There was no statistical difference (P<0.05) between treatments for the TTRr variable. Otherwise in the oxidative stress evaluated with the CellROX probe was noted that the IGF-1 showed the highest number of reactive cells (P<0.05). The PIAI, AP and gestation rate showed no difference among treatments (P>0.05), with an average of conceptions of 36.58%. It is concluded that IGF-1, gSH and their association did not cause changes in sperm motility, mitochondrial potential, plasma and acrosomal membrane integrity. IGF-1 increased oxidative stress, however, there was no difference in the gestation rate among the treatments.(AU)


Objetivou-se avaliar a taxa de concepção, as condições metabólicas e estrutural das células espermáticas bovinas criopreservadas, acrescidas de diluidores com fator de crescimento semelhante à insulina do tipo 1(IGF-1) e glutationa (GSH). Foram utilizados 12 ejaculados de touros da raça Nelore, submetidos aos tratamentos: controle, gSH (2mM/mL), IGF-1 (100ng/mL) e gSH (1mM/mL) + IGF-1 (50ng/mL). Após a criopreservação e descongelação, o sêmen passou pelos testes de termorresistência rápida (TTRr), integridade de membrana plasmática e acrossomal (PIAI), alto potencial mitocondrial (AP), estresse oxidativo e taxa de concepção. Utilizou-se o teste de Tukey para as análises estatísticas das variáveis paramétricas e o teste de Friedman para as não paramétricas, com significância de 5%. A percentagem de gestação foi comparada pelo teste do qui-quadrado. Não hove diferença estatística (P<0,05) entre os tratamentos para a variável TTRr. Já no estresse oxidativo avaliado com a sonda CellROX, observou-se que o IGF-1 apresentou maior quantidade de células reativas (P<0,05), 36,38± 24,10. A PIAI, o AP e a taxa de gestação não apresentaram diferença entre tratamentos (P>0,05), com média de concepções de 36,58%. Conclui-se que o IGF-1, a gSH e a sua associação não causaram mudanças na motilidade espermática, no potencial mitocondrial, na integridade da membrana plasmática e acrossomal. O IGF-1 aumentou o estresse oxidativo, porém sem diferença na taxa de gestação entre os tratamentos.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Cattle , Semen Preservation/methods , Semen Preservation/veterinary , Insulin-Like Growth Factor I , Cryopreservation/veterinary , Glutathione , Antioxidants/therapeutic use
2.
Acta sci. vet. (Impr.) ; 49: Pub. 1839, 2021. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1363603

ABSTRACT

Canine sperm is a very delicate cell that is quite susceptible to oxidative stress since the cytoplasm is restricted and features little antioxidant reserves. Furthermore, the sperm membrane has some polyunsaturated fatty acids sensitive to lipid peroxidation, which makes it important to addition antioxidant substances to the diluter aiming at decreasing such stress to the sperm cell, particularly during seminal cryopreservation. Several antioxidants have been used in this process in some domestic animal's species, however, the use of palmitic acid has been little reported in works on cryopreservation of semen of the canine species. Hence, this study aimed to assess the effect of addition antioxidants palmitic acid and vitamin E to the Tris-egg yolk diluter on the semen quality of dogs after thawing. Samples were collected from the ejaculates of 4 adult dogs, apparently healthy, of the American Pit Bull Terrier breed of kennels in the city of Teresina, PI, places where the pre-freezing procedures of the dog's semen were performed. The samples were diluted in Tris citric acid fructose (3.28 g Tris-hydroxymethyl-aminomethane, 1.78 g citric acid monohydrate and 1.25 g D-fructose), dissolved in 100 mL distilled water, and added 20% egg yolk and 6% glycerol, at the concentration of 100x106 sptz/mL. The semen samples were divided into 3 mL aliquots to form 3 experimental groups: G1 - Only Tris-egg yolk (Control group); G2 - Tris-egg yolk + 100 µM palmitic acid; and G3 - Tris-egg yolk + 116 µM vitamin E. Semen was collected weekly over a period of little over 2 months. After thawing, thermorresistance test (TTR) was carried out at 0, 30, 60, and 90 min to assess spermatics motility and vigor, in addition to analysis of integrity of plasma membrane, acrosomal membrane and mitochondrial activity of the sperm, using fluorescent probes. These assessments were performed out at the Animal Reproduction Biotechnology Laboratory (LBRA/UFPI). In the TTR, G2 and G3 didn't exhibit significant results for spermatics motility or vigor when compared with the control group. The palmitic acid and vitamin E also had no significant effects on the parameters of acrosomal membrane integrity or mitochondrial activity. However, sperm cryopreserved with the addition of palmitic acid exhibited significant differences for plasma membrane integrity, providing greater protection to the sperm cells in G2. The palmitic acid is one of the most saturated fatty acids in human semen, with reports of great proportions also in the seminal plasma of dogs. Its main role is to protect the plasma membrane from external damage, improving viability and fertility of the sperm after cryopreservation. Data is scarce in the literature on the composition of fatty acids in canine semen and regarding the use of palmitic acid as a seminal antioxidant in that species, which grants further studies aiming to investigate such valuable information for canine reproduction. It is concluded that addition palmitic acid at 100µM concentration to the Tris-egg yolk diluter was able to preserve the integrity of the plasma membrane during the process of cryopreservation of canine semen.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Dogs , Semen/drug effects , Vitamin E , Cryopreservation/veterinary , Oxidative Stress , Palmitic Acid/adverse effects , Semen Analysis/veterinary , Antioxidants/administration & dosage
3.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(6): 2119-2126, Nov.-Dec. 2020. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1142317

ABSTRACT

We evaluated the effect of reducing free calcium in the cryopreservation medium, using the calcium chelator ethylene diamine tetracetic acid (EDTA) at 0.3% and 0.5% concentrations. Three male mixed breed dogs were subjected to semen collection by digital manipulation (n=16). Each ejaculate was divided in three aliquots, and each one was diluted in TRIS-glucose-egg yolk extender with 6% glycerol and 0.5% Equex STM Paste® (TGE, control); and added with 0.3% EDTA (EDTA 0.3) or 0.5% EDTA (EDTA 0.5). Calcium concentration reduced in EDTA 0.3 and all the calcium ions were chelated in EDTA 0.5. The EDTA addition did not affect sperm morphology or plasma membrane integrity; however, by removing all free calcium (EDTA 0.5), the sperm motility reduced (64.7% in TGE and 45% in EDTA 0.5; p<0.05). Acrosome integrity and sperm binding ability were not improved by calcium chelation. The failure to prevent the premature AR may explain why sperm longevity was not affected by calcium removal. Thus, the partial or complete calcium removal, through EDTA addition, is not able to prevent acrosomal damage or premature acrosomal reaction, and therefore does not improve the dog sperm binding ability.(AU)


Avaliou-se o efeito da redução do cálcio livre no meio de congelamento, usando-se o quelante de cálcio etilenodiaminotetracético (EDTA) a 0,3% e 0,5%. Três cães machos sem raça definida foram submetidos à coleta de sêmen por manipulação digital (n=16). Cada ejaculado foi diluído em diluidor controle com TRIS-glicose - gema de ovo (TGE, controle), ou em diluidor TGE enriquecido com 0,3% (EDTA 0,3) ou 0,5% de EDTA (EDTA 0,5). A concentração de cálcio reduziu no meio EDTA 0,3, e todos os íons de cálcio foram quelados no meio EDTA 0,5. A adição do EDTA e a consequente quelação do cálcio não afetaram a morfologia espermática ou a integridade da membrana plasmática, no entanto, ao remover todo o cálcio do meio (EDTA 0,5), a motilidade espermática se reduziu (64,7% no TGE e 45% no EDTA 0,5; P<0,05). A integridade do acrossoma e a capacidade de ligação do espermatozoide não melhoraram com a quelação do cálcio. Apesar da influência da concentração de cálcio sobre a motilidade espermática após o descongelamento, a falha em prever a reação acrossomal prematura pode explicar por que a longevidade espermática não foi afetada pela remoção do cálcio no meio. Dessa forma, a remoção parcial ou total do cálcio, por meio da adição de EDTA, não é capaz de prevenir o dano no acrossoma ou a reação acrossomal prematura e, portanto, não aumenta a capacidade do espermatozoide de se ligar ao oócito.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Dogs , Semen Preservation/veterinary , Sperm Agglutination , Edetic Acid/analysis , Acrosome Reaction , Calcium Chelating Agents/analysis , Cryopreservation/veterinary
4.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(5): 1758-1766, Sept.-Oct. 2020. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1131566

ABSTRACT

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)


The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Dogs , Epididymis/physiology , Sperm Retrieval/veterinary , Semen Analysis/veterinary , Orchiectomy/veterinary , Cryopreservation/veterinary
5.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(4): 1163-1171, July-Aug. 2020. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1131502

ABSTRACT

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)


The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Sperm Motility , Spermatozoa/physiology , Image Processing, Computer-Assisted/methods , Semen Analysis/veterinary , Horses/physiology , Cryopreservation/veterinary
6.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(3): 664-672, May-June, 2020. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1128613

ABSTRACT

Objetivou-se avaliar a condição metabólica e estrutural das células espermáticas bovinas após congelação, com adição prévia de IGF-I e insulina no meio diluidor seminal. Os ejaculados de seis touros Nelore foram submetidos a quatro tratamentos: controle; insulina (100µUI/mL); IGF-I (150ng/mL) e insulina + IGF-I (50µUI/mL e 75ng/mL, respectivamente). Após a congelação, realizaram-se os testes de termorresistência rápida, coloração pelo corante azul de tripan e Giemsa, além da análise computadorizada da motilidade espermática, da integridade das membranas plasmática e acrossomal, e da peça intermediária por meio de sondas fluorescentes. O teste de termorresistência rápida apresentou efeito dentro do tempo de cada tratamento, mas não entre os tratamentos. Na análise computadorizada da motilidade espermática, foram observados movimento, motilidade e velocidade espermáticos; não houve efeitos dos tratamentos sobre qualquer uma dessas variáveis. Respostas iguais foram obtidas com as sondas fluorescentes e o corante azul de tripan/Giemsa. A adição de insulina e IGF-I, de forma isolada ou combinada, ao meio diluidor para congelação de sêmen não produziu efeitos sobre as condições metabólica e estrutural das células espermáticas.(AU)


This study aimed to evaluate the metabolic and structural condition of the spermatic bovine cells after the freezing, with addition, previously, of IGF-I and Insulin in the seminal thinner medium. The semen of 6 Nellore bulls were submitted to four treatments: Control, Insulin (100µUI/mL); IGF-I (150ng/mL) and Insulin + IGF-I (50µUI/mL and 75ng/mL, respectively). After freezing, rapid resistance tests, Tripan and Giemsa Blue staining, and computerized analysis of sperm motility and integrity of the plasma and acrosomal membranes and the intermediate part were performed by fluorescent probes. The term rapid resistance test had effect within the time of each treatment, but not between treatments. In the computer analysis of sperm motility, sperm movement, motility and velocity no effects of treatments were observed on any of these variables. The same results were obtained with the fluorescent probes and the Blue dye Trypan / Giemsa. The addition of Insulin and IGF-I, alone or in combination, to the semen freezing dilution medium had no effect on the metabolic and structural condition of sperm cells.(AU)


Subject(s)
Semen/metabolism , Insulin-Like Growth Factor I/administration & dosage , Cryopreservation/veterinary , Insulin/administration & dosage , Cattle , Indicators and Reagents
7.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(2): 295-304, Mar./Apr. 2020. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1128154

ABSTRACT

The objectives of this study were to evaluate goat sperm sorting in continuous Percoll® density gradients and gamete freezability, in the presence or absence of phenolic antioxidants. For this, semen pools were sorted, frozen, and evaluated. The non-selected group (NSg) presented lower progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), and wobble (WOB) than the selected groups, and straight line velocity (VSL) compared to those with catechin or resveratrol. The amplitude of lateral head displacement (ALH) was higher in NSg, and quercetin reduced the mitochondrial membrane potential (MMP). After thawing, the NSg presented lower PM than the selected groups, VSL and VAP (average path velocity) than the selected group with or without catechin, LIN and WOB than the selected with or without catechin or resveratrol, and STR than the selected with catechin. Moreover, NSg presented higher ALH and BCF than the samples selected with or without catechin. Plasma membrane integrity and intact and living cells were higher in the selected groups, and MMP was lower in the NSg and the selected group with quercetin. Thus, centrifugation in Percoll® continuous density gradients is a viable methodology to select goat sperm compatible with the freezing, especially in the presence of catechin or resveratrol.(AU)


Objetivou-se avaliar a separação de espermatozoides caprinos em gradientes de densidade contínuos de Percoll® e a congelabilidade espermática, com ou sem antioxidantes fenólicos. Para tal, pools seminais foram selecionados, congelados e avaliados. O grupo não selecionado (gNS) apresentou menor motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR) e oscilação (WOB) do que os selecionados, bem como menor velocidade linear progressiva (VSL) do que os com catequina ou resveratrol. A amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) foi maior no gNS e a quercetina reduziu o potencial de membrana mitocondrial (PMM). Após a descongelação, o gNS manifestou menor MP do que os selecionados, menor VSL e VAP (velocidade média da trajetória) do que os com ou sem catequina, menor LIN e WOB do que os com ou sem catequina ou resveratrol, e menor STR do que os com catequina, além de maior ALH e BCF do que os com ou sem catequina. A integridade da membrana plasmática e as células intactas e vivas foram maiores nas amostras selecionadas e o PMM foi inferior no gNS e no selecionado com quercetina. Portanto, a centrifugação em gradientes contínuos de densidade de Percoll® é uma metodologia viável para selecionar espermatozoides caprinos compatíveis com a congelação, especialmente na presença de catequina ou resveratrol.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen , Spermatozoa , Stilbenes/administration & dosage , Ruminants/physiology , Cryopreservation/veterinary , Phenolic Compounds/analysis , Oxidative Stress , Antioxidants
8.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(1): 71-78, Jan.-Feb. 2020. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1088920

ABSTRACT

Objetivou-se avaliar o efeito do ácido docosa-hexaenoico (DHA), associado ou não ao Trolox®, na refrigeração de sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador. Foram refrigerados 10 ejaculados nos diluidores: D1) BotuSêmen® (BS; controle); D2) BS + 30ngmL-1 de DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40µM de Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50ngmL-1 de DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40µM de Trolox® (BS50DHA40T). Após 48 horas de refrigeração, foram avaliados os parâmetros de movimento espermático, a integridade estrutural e funcional da membrana plasmática e a longevidade espermática. Todos os diluidores testados preservaram, de forma semelhante, a motilidade, a linearidade, a retilinearidade, a amplitude do deslocamento lateral da cabeça, a frequência do batimento flagelar cruzado, o percentual de hiperativos e a integridade estrutural e funcional da membrana espermática (P>0,05). O diluidor BS50DHA foi superior ao BS30DHA40T em preservar a VCL e a VSL e foi superior ao BS30DHA40T e ao BS50DHA40T em preservar a VAP e o índice de oscilação (P<0,05). Conclui-se que o uso do Trolox® em diluidores utilizados para refrigeração de sêmen de garanhões contendo ácido docosa-hexaenoico, nas concentrações propostas, não é indicado por alterar parâmetros de movimento espermático considerados importantes para a fertilidade.(AU)


The objective of this study was to evaluate the effect of docosahexaenoic acid (DHA), associated or not with Trolox®, in extenders for cooling semen from Mangalarga Marchador stallions. Ten ejaculates were cooled in the following diluents: D1) BotuSemen® (BS; control); D2) BS + 30ngmL-1 DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40µM Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50ngmL-1 DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40µM Trolox® (BS50DHA40T). After 48 hours of refrigeration, the sperm movement, structural and functional integrity of the plasma membrane and sperm longevity were evaluated. All extenders tested similarly preserved motility, linearity, straightness of trajectory, amplitude of lateral head displacement, beat cross frequency, hyperactive, the structural and functional integrity of the sperm membrane (P> 0.05). The BS50DHA extender was superior to BS30DHA40T in preserving VCL and VSL and was superior to BS30DHA40T and BS50DHA40T in preserving VAP and oscillation index (P< 0.05). It is concluded that the use of Trolox® in extenders for cooling stallion sperm containing docosahexaenoic acid at the proposed concentrations is not indicated because it alters sperm movement parameters considered important for fertility.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen Preservation/methods , Semen Preservation/veterinary , Cryopreservation/veterinary , Docosahexaenoic Acids/administration & dosage , Horses , Fatty Acids , Antioxidants
9.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(6): 1889-1895, Nov.-Dec. 2019. tab, graf
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1055129

ABSTRACT

A utilização da gema de ovo dificulta a padronização de meios diluidores e apresenta riscos biológicos. Assim, este estudo avaliou diferentes concentrações da lipoproteína de baixa densidade (LDL), em substituição à gema de ovo, para a confecção de diluentes para criopreservação espermática em ovinos. Foram utilizados um diluidor controle (CTR= 20% de gema de ovo) e cinco tratamentos, substituindo-se a gema pelas diferentes proporções de LDL (T1=6%; T2=8%; T3=12%; T4=16%; T5=20%), todos à base de TRIS-glicerol. Para o estudo, utilizaram-se dois ejaculados, de seis reprodutores da raça Santa Inês. Sessenta dias após a criopreservação, as amostras foram descongeladas e avaliadas subjetivamente quanto à motilidade total (MT, %) e progressiva (MP, %), ao vigor (1-5) e à integridade funcional (choque hisposmótico com água destilada, %) e estrutural (corante supravital eosina, %) das membranas espermáticas. As avaliações de vigor e funcionalidade de membrana não diferiram (P>0,05) entre os grupos. Entretanto, os grupos T4 (P<0,01) e T5 (P<0,05) foram superiores ao CTR para os parâmetros MT, MP e integridade estrutural de membrana, o que confirma que as LDLs podem ser alternativas eficientes para substituição da gema de ovo em diluidores para criopreservação de sêmen ovino.(AU)


The use of egg yolk makes it difficult to standardize extenders and presents biological hazards. Thus, this study evaluated different concentrations of low-density lipoprotein (LDL) to replace yolk extenders for production of sperm for cryopreservation in ovine. A control extender was used (CTR= 20% yolk) and five treatments, replacing the yolk by different ratios of LDL (T1= 6%; T2= 8%, T3= 12%; T4= 16%; T5= 20%) all based on TRIS-glycerol. For the study, two ejaculates from six Santa Ines breeding were used. Sixty days after cryopreservation, the samples were thawed and evaluated for total motility (MT, %) and progressive motility (MP, %), vigor (1-5) and the functional integrity (hyposmotic shock with distilled water, %) and structural (supravital dye eosin, %) of the sperm membranes. The evaluations of strength and membrane functionality didn't differ (P> 0.05) between groups. However, T4 (P< 0.01) and T5 (P< 0.05) groups were superior to the CTR for the MT, MP, and membrane structural integrity parameters, which confirms that LDLs can be efficient alternatives for yolk replacement in extenders for cryopreservation of ovine semen.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen Preservation/methods , Sheep , Cryopreservation/veterinary , Lipoproteins, LDL/administration & dosage
10.
Braz. j. biol ; 79(3): 438-445, July-Sept. 2019. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1001465

ABSTRACT

Abstract In this work, the seminal parameters of P. mesopotamicus were evaluated fresh and after cryopreservation, focusing on the sperm variables that affect the rates of fertilization, hatching and post-hatching parameters such as larval survival and morphology. The semen and oocytes from the animals were collected after extrusion, and seminal quality and oocyte fertilization were analyzed. Subsequently, a portion of each semen sample was cryopreserved and, after two days, the oocytes from three new females were fertilized with cryopreserved semen from the males. The analyzes showed that progressive motility, spermatic vigor, motility duration, number of normal sperm and secondary abnormalities were higher in fresh semen than in semen after thawing (P <0.0001). Similarly, fertilization and hatching rates and the percentage of normal and abnormal larvae in fertilized oocytes were higher when fresh semen was used (P <0.0001). The cryopreservation process affected the qualitative parameters of the semen of Piaractus mesopotamicus. The primary abnormality of spermatozoa was the main variable that influenced both fertilization and hatching rates, both in fresh and thawed semen. The second most important variable that influenced, particularly, thawed semen, was the spermatic vigor.


Resumo Neste trabalho, os parâmetros seminais de P. mesopotamicus foram avaliados fresco e após criopreservação, com foco nas variáveis espermáticas ​​que afetam as taxas de fertilização, eclosão e os parâmetros pós-eclosão como a sobrevivência e a morfologia das larvas. Os espermatozoides e os ovócitos dos animais foram coletados após a extrusão, e a qualidade seminal e a fertilização dos ovócitos foram analisados. Posteriormente, uma porção de cada amostra de semen foi criopreservada e, após dois dias, os ovócitos de três novas fêmeas foram fertilizados com semen criopreservado dos machos. As análises mostraram que a motilidade progressiva, o vigor espermático, a duração da motilidade, o número de espermatozoides normais e anormalidades secundárias foram maiores no semen fresco do que no semen após descongelamento (P <0,0001). Da mesma forma, as taxas de fertilização e eclosão e a porcentagem de larvas normais e anormais em ovócitos fertilizados foram maiores quando o semen fresco foi utilizado (P <0,0001). O processo de criopreservação afetou os parâmetros qualitativos do sêmen de Piaractus mesopotamicus . A anormalidade primária dos espermatozoides foi a principal variável que influenciou tanto a taxa de fertilização como a de eclosão, tanto no semen fresco como no semen descongelado. A segunda variável mais importante que influenciou, particularmente, o semen descongelado, foi o vigor espermático.


Subject(s)
Animals , Male , Female , Reproduction , Spermatozoa/physiology , Characiformes/physiology , Cryopreservation/veterinary , Fertilization
11.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(4): 1260-1268, jul.-ago. 2019. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1038602

ABSTRACT

O estudo objetivou avaliar a qualidade seminal de caprinos das raças Canindé (autóctone) e Alpina Britânica (exótica) no Nordeste brasileiro. O experimento foi realizado nos períodos de julho a setembro dos anos de 2015 e 2016. As coletas seminais foram realizadas com auxílio de vagina artificial, de machos das raças Canindé (n = 4) e Alpina Britânica (n = 7). Após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto a: volume (ml), concentração (sptz/ml), motilidade (%) e vigor (1-5). Em seguida, diluído em ACP-101c e criopreservado em máquina TK3000TM. Posteriormente, foram analisados os parâmetros cinéticos, através do software SCA®, e a atividade mitocondrial. No sêmen fresco, as duas raças apresentaram valores de motilidade e concentração dentro do preconizado para a espécie. Entretanto, os valores de volume e circunferência escrotal foram superiores na raça Alpina Britânica (0,73 ml ± 0,32; 27,35 cm ± 2,09) do que na raça Canindé (0,36 ml ± 0,07; 23,25 cm ± 0,95) (p < 0,05). Já no sêmen descongelado, os parâmetros motilidade total - MT (36,96% ± 11,16 vs. 20,50% ± 14,15), motilidade progressiva - MP (26,67% ± 11,13 vs. 11,29% ± 9,42), vigor (2,91 ± 0,90 vs. 1,88 ± 0,67), velocidade curvilinear - VCL (78,12 µm/s ± 12,41 vs. 59,28 µm/s ± 15,57), velocidade linear - VSL (49,23 µm/s ± 9,87 vs. 29,9 µm/s ± 9,48), velocidade média da trajetória - VAP (66,08 µm/s ± 12,77 vs. 45,70 µm/s ± 12,20), linearidade - LIN (62,97% ± 6,96 vs. 49,54%±9,50), retilinearidade - STR (74,63% ± 6,44 vs. 65,77% ± 8,92), e oscilação - WOB (84,32% ± 5,94 vs. 74,42% ± 7,31) foram superiores para a raça Canindé em detrimento à Alpina Britânica (p < 0,05). Portanto, o sêmen fresco das duas raças podem ser utilizados em biotécnicas reprodutivas. Já o sêmen pós-descongelação da raça Canindé apresentou melhor qualidade, provavelmente pelos animais estarem mais adaptados às condições adversas da região Nordeste, sendo recomendado para programas de inseminação artificial.(AU)


The objective of this study was to evaluate the sperm quality of Canindé (native) and British Alpine (exotic) goats in the Northeast of Brazil. The experiment was carried out from July to September of the years 2015 and 2016. Sperm collections of Canindé (n = 4) and British Alpine (n = 7) males were performed using artificial vagina. After collection, the sperm was evaluated for volume (ml), concentration (sptz/ml), motility (%), and vigor (1-5). Then diluted in ACP-101c and cryopreserved in TK3000TM machine. Subsequently, kinetic parameters were analyzed through SCA TM software and mitochondrial activity. In fresh sperm, the two races presented values of motility and concentration within the recommended for the specie. However, volume and scrotal circumference values were higher in the British Alpine breed (0.73 mL ± 0.32; 27.35 cm ± 2.09) than in the Canindé breed (0.36 mL ± 0.07; 23 , 25 cm ± 0.95) (p <0.05). In the thawed sperm, the parameters total motility - TM (36.96% ± 11.16 vs. 20.50% ± 14.15), progressive motility - PM (26.67% ± 11.13 vs. 11.29 % ± 9.42), vigor (2.91 ± 0.90 vs. 1.88 ± 0.67), curvilinear velocity - VCL (78.12 µm/s ± 12.41 vs. 59.28 µm/s ± 15.57), linear velocity - VSL (49.23 µm/s ± 9.87 vs. 29.9 µm/s ± 9.48), mean velocity of the trajectory - VAP (66.08 µm/s ± 12.77 vs. 45.70 µm/s ± 12.20), linearity - LIN (62.97% ± 6.96 vs. 49.54% ± 9.50), rectilinearity - STR (74.63% ± 6.44 vs. 65.77% ± 8.92), and oscillation -WOB (84.32% ± 5.94 vs. 74.42% ± 7.31) were higher for Canindé breed than for British Alpine ( p < 0.05). Therefore, fresh sperm from both breeds can be used in reproductive biotechniques. On the other hand, the post-thawed sperm of the Canindé breed showed better quality, probably because the animals were more adapted to the adverse conditions of the Northeast region and are recommended for artificial insemination programs.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Ruminants , Semen Analysis/veterinary , Species Specificity , Cryopreservation/veterinary , Mitochondria/ultrastructure
12.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(3): 837-847, May-June 2019. tab, graf, ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1011326

ABSTRACT

Piau porcine blastocysts were submitted to MALDI-TOF to identify the main phospholipids (PL). After that, in vivo blastocysts (D6) were vitrified (n=52), non-vitrified were used as control (n=42). After warming, blastocysts were in vitro cultured to assess re-expansion and hatching at 24 and 48 hours. Finally, at 48 hours, hatched blastocysts were submitted to RT-qPCR searching for BCL2A1, BAK, BAX and CASP3 genes. For MALDI-TOF, the ion intensity was expressed in arbitrary units. Blastocyst development was compared by Qui-square (P< 0.05). Among the most representative PL was the phosphatidylcholine [PC (32:0) + H]+; [PC (34:1) + H]+ and [PC (36:4) + H]+. Beyond the PL, MALDI revealed some triglycerides (TG), including PPL (50:2) + Na+, PPO (50:1) + Na+, PLO (52:3) + Na+ and POO (52:2) + Na. Re-expansion did not differ (P> 0.05) between fresh or vitrified blastocysts at 24 (33.3%; 32.7%) or 48 hours (2.4%; 13.5%). Hatching rates were higher (P< 0.05) for fresh compared to vitrified at 24 (66.7%; 15.4%) and 48 hours (97.6%; 36.0%). BAX was overexpressed (P< 0.05) after vitrification. In conclusion, Piau blastocysts can be cryopreserved by Cryotop. This study also demonstrated that the apoptotic pathway may be responsible for the low efficiency of porcine embryo cryopreservation.(AU)


Blastocistos de suínos foram submetidos ao MALDI-TOF para se identificarem os principais fosfolipídios (PL). Depois, parte destes embriões (D6) foram vitrificados (n=52), ou permaneceram frescos (grupo controle, n=42). Após o aquecimento, os blastocistos foram cultivados in vitro para se avaliar a reexpansão e a eclosão (BE) às 24 e 48 horas. Finalmente, às 48 horas, os BE foram submetidos ao RT-qPCR em busca dos genes BCL2A1, BAK, BAX e CASP3. No MALDI-TOF, a intensidade do íon foi expressa em unidades arbitrárias. O desenvolvimento embrionário foi comparado por qui-quadrado (P<0,05). Entre os PL mais representativos estavam as fosfatidilcolinas [PC (32: 0) + H] +; [PC (34: 1) + H] + e [PC (36: 4) + H] +. Além do PL, o MALDI revelou alguns triglicerídeos (TG), incluindo PPL (50: 2) + Na +, PPO (50: 1) + Na +, PLO (52: 3) + Na + e POO (52: 2) + Na. A reexpansão não diferiu (P>0,05) entre blastocistos frescos ou vitrificados às 24 (33,3%, 32,7%) e 48 horas (2,4%, 13,5%). As taxas de eclosão foram maiores (P<0,05) para o grupo fresco comparado ao vitrificado às 24 (66,7% x 15,4%) e 48 horas (97,6% x 36,0%). O BAX estava mais expresso (P<0,05) após a vitrificação. Concluindo, os blastocistos Piau podem ser criopreservados por Cryotop. Este estudo também demonstrou que a via apoptótica pode ser responsável pela baixa eficiência da criopreservação de embriões suínos.(AU)


Subject(s)
Animals , Phospholipids/analysis , Cryopreservation/veterinary , Sus scrofa/embryology , Embryonic Development
13.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(3): 770-776, May-June 2019. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1011320

ABSTRACT

Avaliou-se o efeito de curvas de congelação nos parâmetros espermáticos e na fertilidade, usando sêmen de alta e baixa congelabilidade. Experimento 1 - utilizou-se sêmen de quatro garanhões resistentes à congelação: grupo 1, palhetas refrigeradas até 5°C e congeladas com curva de -8°C/min; grupos 2 e 3, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min.) e congeladas com curvas de -20°C/min e -10°C/min, respectivamente. Experimentos 2 e 3 - utilizaram-se cinco garanhões (Mangalarga Marchador), respectivamente, de alta e baixa congelabilidade: grupo 4, a mesma metodologia descrita no grupo 1; grupos 5 e 6, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min) e congeladas com curva de -20°C/min, entre 5°C e -60°C, e -10°C/min, entre -60°C e -100ºC (grupo 5), e -25°C/min, de 5°C até -100°C (grupo 6). O sêmen foi avaliado após descongelamento pelo método computadorizado. No experimento 1, não houve diferença nos parâmetros avaliados. No experimento 2, os parâmetros motilidade total (MT) e motilidade progressiva foram superiores aos do grupo 6 em relação ao grupo 4. No experimento 3, a MT foi superior no grupo 6 em relação ao grupo 4. As curvas de congelação mais rápidas apresentaram melhores parâmetros de cinética espermática, após a descongelação, para o sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador.(AU)


The effect of freezing curves on sperm parameters and fertility, using resistant and sensitive semen to cryopreservation, was evaluated. In experiment 1, Semen from 4 stallions resistant to freezing was used: Group 1, straws were cooled to 5°C and frozen with a curve of - 8°C/min; Groups 2 and 3, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with curves of - 20°C / min and - 10°C/min, respectively. In experiments 2 and 3, 5 stallions (Mangalarga Marchador) presenting respectively resistant and sensitive sperm to cryopreservation were used: Group 4, same methodology described for Group 1 was performed; Groups 5 and 6, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with a curve of - 20°C/min. between 5°C and - 60°C and -10°C/min. between - 60°C and - 100°C (Group 5) and - 25°C/min. 5°C to - 100°C (Group 6). Thawed-semen was evaluated by the computerized method CASA. In Experiment 1, there was no difference in the evaluated parameters. In Experiment 2, total motility (MT) and progressive motility (PM) were higher in Group 6 compared to Group 4. In Experiment 3, TM was higher in Group 6 than Group 4. The faster freezing curves showed better parameters of sperm kinetics after thawing, for the Mangalarga Marchador stallion semen.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen , Sperm Motility , Cryopreservation/methods , Cryopreservation/veterinary , Semen Analysis/veterinary , Horses
14.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(3): 752-760, May-June 2019. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1011321

ABSTRACT

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado (EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.(AU)


The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen , Cryopreservation/veterinary , Epididymis , Semen Analysis/veterinary , Horses , Infertility, Male/veterinary
15.
Pesqui. vet. bras ; 39(5): 332-341, May 2019. tab, graf
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1012753

ABSTRACT

Knowledge about reproduction of white-lipped peccary is of great importance to assist with the conservation of this species and enable its rational use in captivity. This study aimed to evaluate the effect of ACP-103®, ACP-116® and BTS semen extenders on sperm viability during cooling of Tayassu pecari semen. Five ejaculates from four adult males were chilled. The animals were submitted to the protocols of sedation and anesthesia for semen collection by the electroejaculation method. After collection, the semen was macro- and microscopically assessed and diluted to reach 35x106 spermatozoa/mL in each of the three different extenders tested. The fresh-extended semen was packed in a BotuFLEX® thermal box to keep samples at 15°C for 24 hours. After cooling, the following semen parameters were analyzed: sperm motility, functional and structural integrity of sperm membranes, mitochondrial activity, chromatin condensation, and the thermoresistance test was performed. The parameters sperm motility, structural and functional integrity of sperm membranes, mitochondrial activity, and chromatin condensation were preserved after use of the extenders tested, and were similar to those of in natura semen (p>0.05). Curvilinear velocity (VCL) (p<0.05) was the only parameter with reduced values after cooling regardless of the extender used. The percentage of sperm with normal morphology was greater in samples cooled using the BTS extender (p<0.05). The ACP-103®, ACP-116® and BTS extenders can be used for the cooling and preservation of white-lipped peccary semen at 15°C for 24 hours.(AU)


Para auxiliar na conservação da espécie e permitir o uso racional do queixada em cativeiro é de grande importância o conhecimento sobre a reprodução da espécie. Objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores de sêmen ACP-103®, ACP-116® e BTS na viabilidade espermática durante a refrigeração do sêmen do Tayassu pecari. Foram refrigerados cinco ejaculados provenientes de quatro machos adultos. Os animais foram contidos com auxílio de puçá e submetidos ao protocolo de sedação e anestesia para realização da coleta de sêmen pelo método da eletroejaculação. Depois da coleta, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente e diluído para atingir 35x106 espermatozoides/mL em cada um dos três diferentes diluidores testados. O sêmen diluído foi acondicionado em caixa térmica BotuFLEX® para manter as amostras a 15°C por um período de 24 horas. Depois da refrigeração, os espermatozoides foram avaliados quanto aos parâmetros de movimento espermático, integridade funcional e estrutural das membranas espermáticas, atividade mitocondrial, condensação da cromatina e teste de termorresistência. Os diluidores testados preservaram as características cinéticas, a integridade estrutural e funcional das membranas espermáticas, a atividade mitocondrial e a condensação da cromatina semelhante ao sêmen in natura (P>0,05). O único parâmetro que reduziu com o processo de refrigeração independente do diluidor utilizado foi a Velocidade Curvilinear (VCL) (P<0,05). Foi observado aumento do percentual de espermatozoides morfologicamente normais nas amostras refrigeradas em BTS (P<0,05). Os diluidores ACP-103®, ACP-116® e BTS podem refrigerar e conservar o sêmen de queixada a 15°C por 24 horas.(AU)


Subject(s)
Animals , Artiodactyla , Semen Preservation/methods , Passive Cutaneous Anaphylaxis , Cryopreservation/veterinary
16.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(2): 521-528, mar.-abr. 2019. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1011267

ABSTRACT

The aim of this study was to evaluate the effects of different concentrations of (+)-catechin or (-)-epigallocatechin gallate (EGCG) on goat semen freezability. Poolsof semen were processed (Experiment 1: 0, 15, 25, 50, 75, or 100µM (+)-catechin; Experiment 2: 0, 15, 25, 50, 75, or 100µM EGCG) and frozen. After thawing, the samples were evaluated for kinematics, plasma membrane (PMi) and acrosome integrity, morphology, and oxidative stress, at 0 and 1h. In Experiment 1, at 0h, VSL and VAP were greater (P<0.05) with 15µM than with 50 and 100; WOB was lower (P<0.05) with 100µM than with 0, 15, and 25; and BCF was higher (P<0.05) with 75 and 100µM than with 0. In turn, in Experiment 2, progressive motility was higher (P<0.05) with0 and 15µM than with50 and 75; LIN was lower (P<0.05) with75 and100µM than with0 and 15; WOB was higher (P<0.05) with0 and 15µM; and PMi was greater (P<0.05) with100µM than 0. Thus, (+)-catechin or EGCG at higher concentrations inhibits the kinematics of frozen goat sperm, in a transitory way, and 100µM of EGCG preserves the PMi.(AU)


Objetivou-se avaliar o efeito de diferentes concentrações de (+)-catequina ou (-)-epigalocatequina galato (EGCG) sobre a congelabilidade do sêmen caprino. Poolsseminais foram processados (experimento 1: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100µM de (+)-catequina; experimento 2: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100µM de EGCG) e congelados. Após a descongelação, foram avaliadas a cinética, a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal, a morfologia e o estresse oxidativo, a zero e a uma hora. No experimento 1, a zero hora, VSL e VAP foram maiores (P<0,05) com 15µM do que com 50 e100; WOB foi menor (P<0,05) com 100µM do que com 0, 15 e 25; e BCF foi maior (P<0,05) com 75 e 100µM do que com 0. No experimento 2, a motilidade progressiva foi maior (P<0,05) com 0 e 15µM do que com 50 e 75; LIN foi menor (P<0,05) com 75 e 100µM do que com 0 e 15; WOB foi maior (P<0,05) com 0 e 15µM; e iMP foi maior (P<0,05) com 100µM do que com 0. Assim, (+)-catequina ou EGCG em altas concentrações inibem, transitoriamente, a cinética de espermatozoides congelados caprinos, e 100µM de EGCG preserva a iMP.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen Preservation/methods , Semen Preservation/veterinary , Flavonoids/pharmacology , Goats , Catechin/pharmacology , Cryopreservation/veterinary , Oxidative Stress
17.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(2): 489-499, mar.-abr. 2019. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1011262

ABSTRACT

A study was conducted to evaluate the effect of chlorogenic acid (ChA) added pre-cooling and its combination with caffeine added during warming on cooled-stored boar semen parameters. Ten ejaculates were diluted in commercial extender with or without 4.5mg/ml ChA and stored at 15°C. After 0, 24 and 72 hours of storage, aliquots of these doses were taken and incubated at 37°C in the presence or absence of 8.0mM caffeine. Semen quality was evaluated after 10 and 120 minutes of incubation. The ChA increased (P <0.01) the sperm motility, viability, acrosomal integrity and the percentage of spermatozoa with high mitochondrial activity (PMHA), however, decreased (P <0.01) the malondialdehyde (MDA) concentration. Caffeine increased (P<0.05) the sperm motility, viability, PMHA and the MDA concentration and reduced (P <0.05) the acrosome integrity. When associated (ChA+caffeine), there was an increase (P <0.05) in sperm motility and viability, PMHA and acrosome integrity. The addition of ChA to the dilution medium improves the quality of the swine inseminating doses. The addition of caffeine during re-warming is only recommended when the semen is stored for prolonged periods (72h), and the inseminating dose should be used immediately after its addition.(AU)


O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da adição de ácido clorogênico (ChA) antes do resfriamento e sua combinação com cafeína adicionada durante o reaquecimento sobre a qualidade do sêmen suíno resfriado. Dez ejaculados foram diluídos em diluidor comercial com adição ou não de 4,5mg/mL de ChA e armazenados a 15°C. Após zero, 24 e 72 horas de armazenamento, 10mL foram retirados e incubados a 37°C na presença ou ausência de 8,0mM de cafeína. A qualidade seminal foi avaliada após 10 e 120 minutos de incubação. O ChA aumentou (P<0,01) a motilidade, a viabilidade, a integridade acrosomal e a porcentagem de espermatozoides com alta atividade mitocondrial (PMHA), entretanto diminuiu (P<0,01) a concentração de malondialdeído (MDA). A cafeína aumentou (P<0,05) a motilidade, a viabilidade, a PMHA e a concentração de MDA e reduziu a integridade acrossomal. Quando associados (ChA+cafeína), houve aumento (P<0,05) na motilidade, na PMHA, na viabilidade e na integridade acrossomal. Conclui-se que a adição de ChA ao meio de diluição melhora a qualidade das doses inseminantes de suínos. A adição de cafeína durante o reaquecimento só é recomendada ao sêmen adicionado de ChA quando esse for armazenado por períodos prolongados (72h), devendo a dose inseminante ser utilizada imediatamente após sua adição.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen Preservation/veterinary , Caffeine , Cryopreservation/veterinary , Chlorogenic Acid , Sus scrofa , Sperm Motility , Antioxidants
18.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(2): 455-463, mar.-abr. 2019. tab, graf
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1011264

ABSTRACT

This study evaluated the effect of increasing centrifugal force and reducing centrifugation time and volume in Percoll protocols on ram sperm parameters. Commercial semen of Santa Inês rams were used and five treatments were performed: traditional Percoll and mini-Percoll (MP) techniques (I- 5000 x g, 5min; II- 2500 x g, 5min; III- 1250 x g, 5min; IV- 700 x g, 10min). At post-thawing (PT) and post-selection protocols (0h), samples were assessed for spermatozoa recovery rate, motility, plasma membrane (PM) integrity, sperm capacitation and morphology and incubated at 37 C for 1, 2 and 3h. The sperm recovery rate averaged 9.1±1.4%, and most motility parameters were similar (P> 0.05) among protocols. VCL (µm/s) was higher (P< 0.05) after MP-II, III and IV (66.1±4.5) than traditional Percoll (46.3±4.9). Capacitation status and PM integrity were similar (P> 0.05) among treatments. For the first time, we have demonstrated the reduction of the gradient volume and centrifugation time associated with an increase on centrifugation force at Percoll can be successfully used for frozen-thawed ram sperm selection. MP may be used instead of traditional Percoll, decreasing costs and semen handling time.(AU)


O presente estudo avaliou o efeito do aumento da força de centrifugação, bem como da redução do tempo de centrifugação e do volume do gradiente de Percoll em diferentes protocolos nos parâmetros espermáticos de ovinos. Foi utilizado sêmen comercial de carneiros da raça Santa Inês, e cinco tratamentos foram realizados: Percoll tradicional e quatro técnicas de mini-Percoll (I- 5000 x g, 5min; II- 2500 x g, 5min; III- 1250 x g, 5min; IV- 700 x g, 10min). Após o descongelamento e a seleção espermática em cada técnica utilizada (0h), amostras foram avaliadas quanto à taxa de recuperação espermática, motilidade, integridade de membrana plasmática, capacitação e morfologia. Ao final, foram incubadas a 37 ºC por uma, duas e três horas. A taxa de recuperação média (9,1±1,4%) e a maioria dos parâmetros de motilidade foram similares (P>0,05) entre os tratamentos. VCL foi maior (P<0,05) após MP-II, III e IV (66,1±4,5) quando comparados ao Percoll tradicional (46,3±4,9). O status da capacitação e a integridade de membrana foram similares (P>0,05) entre os tratamentos. Pela primeira vez, foi demonstrado que a redução do volume do gradiente utilizado e do tempo de centrifugação, associada com o aumento da força de centrifugação nos protocolos de Percoll, pode ser usada com sucesso na seleção espermática de sêmen congelado de ovinos. O mini-Percoll pode ser utilizado em alternativa à técnica de Percoll tradicional, diminuindo custos e tempo de manipulação do sêmen durante a técnica.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Semen Preservation/veterinary , Sperm Capacitation , Sheep , Cryopreservation/veterinary
19.
Pesqui. vet. bras ; 38(9): 1726-1730, set. 2018. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-976505

ABSTRACT

To date, no studies have been performed evaluating the effect of boar spermatozoa concentration in 0.5mL freezing straws, leading us to examine this question. Each sperm-rich fraction of the ejaculate (n=25) was diluted at five different sperm concentrations (100, 200, 300, 600 and 800 x 106 spermatozoa/mL), packaged in 0.5mL straws, and subsequently frozen. After thawing, the sperm from all of treatment groups were analyzed to determine motility characteristics using a sperm class analyzer (SCA-CASA), and their plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, sperm membrane lipid peroxidation and fluidity were analyzed by flow cytometry. An increase in spermatozoa concentration above 300x106 spermatozoa/mL in a 0.5mL straw impaired (p<0.05) the total and progressive motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, linearity and beat cross frequency. However, the plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, membrane lipid peroxidation and fluidity were not influenced (p>0.05) by high spermatozoa concentrations at freezing. Therefore, to increase spermatozoa survival and total and progressive motility after thawing, boar spermatozoa should be frozen at concentrations up to 300x106 spermatozoa/mL.(AU)


Até o momento, não foram realizados estudos que avaliassem o efeito da concentração de espermatozoides/mL em palhetas (0,5mL) para a criopreservação, levando-nos a analisar esta questão. Cada fração-rica do ejaculado (n=25) foi diluída em cinco diferentes concentrações de espermatozoides (100, 200, 300, 600 e 800x106 espermatozoides/mL), envasadas em palhetas de 0,5mL e posteriormente congeladas. Após a descongelação, os espermatozoides de todos os tratamentos foram avaliados a fim de determinar as características de motilidade usando um sistema de análise computadorizada dos espermatozoides (SCA-CASA). A integridade das membranas plasmática e acrosomal, o potencial de membrana mitocondrial, a peroxidação lipídica e a fluidez da membrana foram analisadas por citometria de fluxo. O aumento na concentração de espermatozoides acima de 300x106 espermatozoides/mL diminuiu (p<0,05) a motilidade total e progressiva, velocidade curvilínea, velocidade linear, linearidade e frequência de batimento. No entanto, a integridade da membrana plasmática e acrosomal, potencial de membrana mitocondrial, peroxidação lipídica e fluidez de membrana não foram influenciados (p>0,05) por altas concentrações de espermatozoides durante a criopreservação. Portanto, a fim de melhorar a sobrevivência dos espermatozoides suínos e a motilidade total e progressiva após a descongelação, os espermatozoides suínos devem ser congelados a concentrações não superiores a 300x106 espermatozoides/mL.(AU)


Subject(s)
Animals , Swine/embryology , Cryopreservation/veterinary , Semen Analysis/statistics & numerical data
20.
Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci. (Online) ; 55(1): 1-10, 2 abr. 2018. tab, graf
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-912712

ABSTRACT

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p < 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p < 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP + G: 81.4 ± 14.2). To conclude, the results suggest that the BTS is still the best option to cryopreserve and fructose could be used in boar semen cryopreservation in new cooling curve.(AU)


O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p < 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p < 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados obtidos indicaram que o BTS, ainda é a melhor opção de criopreservação e que a frutose pode ser utilizada para criopreservação de sêmen de varrão na nova curva de resfriamento.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Cryopreservation/methods , Cryopreservation/veterinary , Dried Skimmed Milk , Fructose/administration & dosage , Semen Preservation/methods , Swine , Dilution
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