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1.
Ciênc. rural (Online) ; 52(2): e20210209, 2022. tab, graf, ilus, mapas
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1339658

ABSTRACT

Porcine circovirus 2 (PCV2) has a considerable economic impact on the pork industry worldwide for more than two decades. In 2016, a new circovirus, porcine circovirus 3 (PCV3), was described; since then, it has been reported to be associated with diseased or even in clinically healthy swine in several countries. Considering the importance of wild boars as reservoirs of swine pathogens and the extensive distribution of these animals in Rio Grande do Sul and throughout the national territory, we searched for PCV2 and PCV3 in twenty-six wild boars coupled with necropsy and histologic examination of the sampled animals. Using PCR, 182 tissue samples were analyzed, including the heart, kidneys, liver, lung, lymph nodes, spleen, and tonsils. PCV2 and PCV3 were detected in 57.7% (15/26) and 15.4% (4/26) of wild boars, respectively. Furthermore, co-infection with PCV2 and PCV3 was detected in one of these animals, with PCV2 or PCV3 DNA detection in multiple organs. Histological examination showed mild to moderate and multifocal lymphoplasmacytic interstitial nephritis distributed randomly throughout the renal cortex, apparently unrelated to PCV2 or PCV3 detection. The wild boar population in Brazil is extensive, indicating the presence of a larger number of swine pathogen hosts. In the present study, more than half of the wild boars harbored PCV2; and although less frequently, PCV3 was also detected. Therefore, free-living wild boars can serve as reservoirs of swine circoviruses in southern Brazil.


O circovírus suíno 2 (PCV2) tem causado impacto econômico na indústria suína em todo o mundo por mais de duas décadas. Em 2016, um novo circovírus foi descrito - circovírus suíno 3 (PCV3) - e desde então tem sido relatado em vários países associado a doenças ou mesmo suínos saudáveis. Diante da importância dos javalis como reservatórios de patógenos suínos, e da ampla distribuição desses animais no Rio Grande do Sul e em todo o território nacional, foi realizada pesquisa de PCV2 e PCV3 em vinte e seis javalis (10 fêmeas e 16 machos). Necropsia e exame histológico foram realizados. Utilizando PCR, foram analisadas 182 amostras de tecidos incluindo: coração, rins, fígado, pulmão, linfonodos, baço e tonsila. PCV2 e PCV3 foram detectados por PCR em 57,7% (15/26) e 15,4% (4/26) dos javalis, respectivamente. Um destes animais estava co-infectado por PCV2 e PCV3. O DNA do PCV2 ou PCV3 foi detectado em multiplos órgãos. No exame histológico foi observada nefrite intersticial linfoplasmocitária multifocal leve a moderada, distribuída aleatoriamente pelo córtex renal, aparentemente sem relação com a detecção de DNA viral. A população de javalis no Brasil é extensa, resultando em maior número de hospedeiros para patógenos de suínos. No presente estudo, mais da metade dos javalis capturados abrigavam PCV2 e, embora menos frequente, PCV3 também foi detectado. Os javalis de vida livre podem servir como reservatórios de circovírus suínos no sul do Brasil.


Subject(s)
Animals , Disease Reservoirs/veterinary , Circovirus/isolation & purification , Circoviridae Infections/epidemiology , Sus scrofa/virology , Brazil , Polymerase Chain Reaction/veterinary
2.
Ciênc. rural (Online) ; 52(2): e20210081, 2022. tab, graf, ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1339657

ABSTRACT

Gilts represent a group risk for Mycoplasma hyopneumoniae vertical transmission in swine herds. Therefore, parity segregation can be an alternative to control M. hyopneumoniae infections. The study evaluated the effect of parity segregation on M. hyopneumoniae infection dynamics and occurrence and severity of lung lesions at slaughter. For that, three multiple site herds were included in the study. Herd A consisted of the farm where gilts would have their first farrowing (parity order (PO) 1). After the first farrowing PO 1 sows were transferred to herd B (PO2-6). Herd C was a conventional herd with gilt replacement (PO1-6). Piglets born in each herd were raised in separated nursery and finishing units. Sows (n = 33 (A), 37 (B), 34 (C)) in all herds were sampled prior to farrowing and piglets (n = 54 (A), 71 (B), 66 (C)) were sampled longitudinally at 21, 63, 100, 140 days of age and at slaughter for M. hyopneumoniae detection by PCR and lung lesions scoring. M. hyopneumoniae prevalence in sows did not differ among herds. Prevalence of positive piglets was higher at weaning in the PO1 herd (A) (P < 0.05). However, prevalence of positive pigs from 100 days of age to slaughter age was higher in the PO2-6 herd (B) (P < 0.05). Lung lesion occurrence and severity were higher in herd B. The authors suggested that the lack of a proper gilt acclimation might have influenced the results, leading to sows being detected positive at farrowing, regardless of the parity.


As leitoas consistem em um grupo de risco na transmissão vertical de Mycoplasma hyopneumoniae dentro do sistema de produção de suínos. Dessa forma, a segregação de partos poderia ser utilizada como alternativa para controlar as infecções por M. hyopneumoniae. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da segregação de partos sobre a dinâmica de infecção de M. hyopneumoniae e a ocorrência e severidade das lesões pulmonares ao abate. Para isso três sistemas de produção de suínos com três sítios cada foram incluídos no estudo. A granja A consistia da unidade onde as leitoas tem o primeiro parto, ou seja, alojava somente de fêmeas de ordem de parto 1 (Granja OP1). Após o primeiro parto as fêmeas OP1 foram transferidas para a granja B (Granja OP2-6), ou seja, consistia de fêmeas de ordem de parto 2 a 6, e a granja C consistiu em uma granja convencional com reposição de leitoas (Granja OP1-6), com fêmeas de ordem de parto 1 a 6. Os leitões nascidos de cada granja foram transferidos e criados em creches e terminações segregadas. As matrizes (n = 33 (A), 37 (B), 34 (C)) de todas as granjas do estudo foram amostradas previamente ao parto e os leitões (n = 54 (A), 71 (B), 66 (C)) foram amostrados longitudinalmente aos 21, 63, 100 e 140 dias de idade e ao abate. Em todos os momentos de coleta, as amostras foram avaliadas por PCR para detecção de M. hyopneumoniae. As lesões pulmonares foram avaliadas e escores de lesão foram atribuídos ao abate. A prevalência de matrizes positivas para M. hyopneumoniae não diferiu entre as granjas (P > 0,05). A prevalência ao desmame foi maior na granja A (OP1) (P < 0,05). No entanto, dos 100 dias de idade até o abate a prevalência de leitões positivos para M. hyopneumoniae foi maior na granja B (OP2-6) (P < 0,05). A ocorrência e severidade de lesões pulmonares foram maiores na granja B. Os autores sugerem que a falta de uma aclimatação adequada das leitoas pode ter influenciado nos resultados, levando à detecção de matrizes positivas ao parto, independente da ordem de parto.


Subject(s)
Animals , Female , Pregnancy , Swine/injuries , Swine/microbiology , Mycoplasma hyopneumoniae/isolation & purification , Pneumonia of Swine, Mycoplasmal/prevention & control , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Infectious Disease Transmission, Vertical/veterinary , Birth Setting
3.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 73(5): 1023-1028, Sept.-Oct. 2021. ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1345254

ABSTRACT

Bovine Trichomoniasis (BT) is an infectious disease caused by Tritrichomonas foetus that can be transmitted either sexually or by fomites. In males, the disease is asymptomatic and permanent. T. foetus has been detected in semen samples where it is able to remain viable even when frozen. The objective of this study was to investigate the presence of T. foetus in 27 samples of commercial frozen bovine semen by culture and Polymerase Chain Reaction (PCR). Samples were thawed in water at 37°C. Part of the samples was inoculated in a test tube containing Diamond's medium and incubated at 35°C. Growth was evaluated every 24 hours via direct examination under a microscope. The other part was placed in an Eppendorf tube and frozen for later molecular analysis. After 10 days of culture, all samples were negative for T. foetus. The Quick-DNA Miniprep Kit (Zymo Research) without proteinase K was used for DNA extraction. The primers used in PCR were TRF3 and TRF4. PCR results were negative for all samples. In conclusion, bovine semen samples were negative for T. foetus in both diagnostic methods, according to the adopted methodology.(AU)


A tricomonose genital bovina (TGB), uma doença infectocontagiosa causada pelo Tritrichomonas foetus, é transmitida por via venérea e fômites contaminados. Em machos a doença é assintomática e permanente. O agente já foi encontrado em amostras de sêmen e é capaz de permanecer viável quando congelado. Este trabalho teve por objetivo investigar a presença de T. foetus em 27 amostras de sêmen bovino comercial congelado, por meio de cultivo e reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras foram descongeladas em água a 37ºC; parte foi inoculada em tubo de ensaio contendo meio Diamond, incubada a 35ºC com consequente avaliação de crescimento e avaliada a cada 24 horas, via exame direto em microscópio, e a outra parte foi diluída em PBS para análise molecular. Após 10 dias de cultivo, todas as amostras foram negativas. Para a detecção molecular foi utilizado o kit Quick-DNA Miniprep (Zymo Research) sem proteinase K para extração do DNA. Os iniciadores utilizados na PCR foram TRF3 e TRF4. O resultado da PCR foi negativo para todas as amostras. Conclui-se que as amostras utilizadas foram realmente negativas para a presença do patógeno em ambos os métodos diagnósticos, o que comprovou a inocuidade do sêmen testado.(AU)


Subject(s)
Animals , Male , Cattle , Semen/parasitology , Trichomonas Infections/veterinary , Cattle Diseases/parasitology , Tritrichomonas foetus/isolation & purification , Polymerase Chain Reaction/veterinary
4.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 73(4): 989-994, Jul.-Aug. 2021. ilus, mapas
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1285275

ABSTRACT

Objetivou-se descrever a ocorrência do Bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) como causa de meningoencefalite não supurativa em bovinos do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, 32 amostras de sistema nervoso embebidas em parafina foram obtidas de animais acometidos por doenças neurológicas atendidos na Clínica de Bovinos de Garanhuns da Universidade Federal Rural de Pernambuco (CBG-UFRPE), entre 2012 e 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença do gene da glicoproteína C do BoHV5 por reação em cadeia da polimerase (PCR). Dois animais (6,25%) tiveram resultado positivo à PCR, e sua análise de sequenciamento indicou 100% de similaridade para o BoHV5. Os resultados histopatológicos desses dois animais revelaram lesões multifocais de meningoencefalite não supurativa associada à polioencefalomalácia, presença de corpúsculos de inclusão basofílicos, infiltração de células de Gitter e presença de manguitos perivasculares. A PCR se mostra uma importante ferramenta para diferenciação das infecções por BoHV5 de outras enfermidades neurológicas de bovinos, especialmente a raiva.(AU)


Subject(s)
Animals , Cattle , Herpesvirus 5, Bovine/isolation & purification , Meningoencephalitis/veterinary , Paraffin , Central Nervous System , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Central Nervous System Viral Diseases/epidemiology
5.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 73(3): 583-588, May-June 2021. ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1278349

ABSTRACT

The aim of this study was to investigate the occurrence of diseases in free-ranging wild canids that were roadkill on highways in the State of Espírito Santo, Brazil. PCR tests were performed for the detection of Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp., and Hepatozoon sp. in the spleen. Morphological evaluation and identification of parasites was performed in the liver and lung. Twenty specimens of C. thous were necropsied at the Animal Pathology Sector of the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Espírito Santo. Tissue samples were processed for histopathological examination and polymerase chain reaction (PCR) analysis. There was no PCR amplification of genomic DNA sequences of Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp., and Hepatozoon sp. using DNA extracted from the spleen as template. Histologically, lesions associated with parasitism by Platynosomum sp. and Angiostrongylus sp. were observed in the liver and lung, respectively. This is the first report of Platynosomum sp. and Angiostrongylus sp. parasitism in C. thous in the state of Espírito Santo, Brazil. Therefore, this study demonstrated parasitism of crab-eating foxes by Platynosomum sp. and Angiostrongylus sp. Importantly, no evidence of infection with Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp., and Hepatozoon sp. was obtained by PCR analysis.(AU)


O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de doenças em canídeos silvestres de vida livre que foram atropelados em rodovias no estado do Espírito Santo, Brasil. Testes de PCR foram realizados para a detecção de Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp. e Hepatozoon sp. no baço. A avaliação morfológica e a identificação de parasitas foram realizadaa no fígado e no pulmão. Vinte espécimes de C. thous foram necropsiados no Setor de Patologia Animal do Hospital Veterinário da Universidade Federal do Espírito Santo. Amostras de tecido foram processadas para exame histopatológico e análise de reação em cadeia da polimerase (PCR). Não houve amplificação por PCR das sequências de DNA genômico de Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp. e Hepatozoon sp. usando-se DNA extraído do baço como modelo. Histologicamente, lesões associadas ao parasitismo por Platynosomum sp. e Angiostrongylus sp. foram observadas no fígado e no pulmão, respectivamente. Este é o primeiro relato de Platynosomum sp. e Angiostrongylus sp. parasitismo em C. thous no estado do Espírito Santo, Brasil. Portanto, este estudo demonstrou parasitismo de cachorro-do-mato por Platynosomum sp. e Angiostrongylus sp. É importante detacar que não há evidências de infecção por Brucella sp., Babesia sp., Rangelia sp. e Hepatozoon sp. por análise de PCR.(AU)


Subject(s)
Animals , Babesia/isolation & purification , Brucella/isolation & purification , Canidae/blood , Angiostrongylus/isolation & purification , Autopsy/veterinary , Spleen/virology , Accidents, Traffic , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Liver/parasitology , Lung/parasitology , Animals, Wild/blood
6.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 73(3): 742-746, May-June 2021. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1278357

ABSTRACT

Objetivou-se neste estudo relatar a frequência e a identidade de patógenos transmitidos por carrapatos em cães residentes de uma área caracterizada por brejo de alta altitude. Amostras sanguíneas (n=203) foram coletadas e molecularmente analisadas via PCR (Babesia spp., Hepatozoon spp., Anaplasma spp. e Ehrlichia spp.) e sequenciamento de DNA. De todas as amostras analisadas, 8,87% (18/203) foram positivas a algum patógeno transmitido por carrapato. Especificamente, 5,42% (11/203) e 3,45% (7/203) foram positivos a Anaplasma platys e Ehrlichia canis, respectivamente. Este estudo fornece, pela primeira vez, evidência científica de infecção de cães por esses patógenos nessa área de alta altitude e reforça o provável papel de R. sanguineus s.l. como vetor de A. platys, principalmente considerando.se que muitos animais positivos eram infestados por essa espécie de carrapato.(AU)


Subject(s)
Animals , Dogs , Ehrlichiosis/epidemiology , Ehrlichia canis/isolation & purification , Anaplasma/isolation & purification , Anaplasmosis/epidemiology , Brazil , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Sequence Analysis, DNA/veterinary , Wetlands , Altitude
7.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 73(2): 525-528, Mar.-Apr. 2021. tab, ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1248946

ABSTRACT

Existem poucos estudos sobre doenças infecciosas em animais silvestres. O objetivo deste estudo foi pesquisar DNA de Leptospira spp. em sangue de tartarugas mantidas em cativeiro, pertencentes ao Bosque Rodrigues Alves (Jardim Zoobotânico da Amazônia). O DNA foi isolado das amostras de sangue coletadas de 148 tartarugas pertencentes a seis espécies diferentes. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada utilizando-se iniciadores específicos para DNA de Leptospira spp. Nenhuma das amostras apresentou resultado positivo para Leptospira spp.(AU)


Subject(s)
Animals , Turtles/microbiology , Leptospira/isolation & purification , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Animals, Wild
8.
Rev. bras. ciênc. vet ; 28(1): 48-52, jan./mar. 2021. il.
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1368961

ABSTRACT

The objective of this study was to verify the occurrence of ovine brucellosis using Agar Gel Immunodiffusion (AGID) and Polymerase Chain Reaction (PCR) techniques, as well as to identify the main risk factors associated with infection in sheep flocks belonging to municipalities in the microregion from Teresina, PI, Brazil. A total of 100 urine and blood samples were collected from sheep aged 6 months or older. The urine samples were submitted to conventional PCR and the blood samples were examined by the AGID technique. Of the 100 blood samples, 17 (17%) were reactive to the AGID test. In conventional PCR of 100 urine samples, six (6%) were positive. Risk factors associated to infection by B. ovis included the rearing system (OR=0.19), feed management (OR=0.05), presence of dystotic births (OR=4.50), miscarriages (OR=3.75) and source of water offered to the animals (OR=0.19). Thus, it was concluded that it is possible to detect the occurrence of animals with ovine brucellosis since PCR is a reliable method to confirm infection. Furthermore, there are risk factors associated to infection by B. ovis in the municipalities studied.


Objetivou-se verificar a ocorrência da brucelose ovina através das técnicas de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA) e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), bem como identificar os principais fatores de risco associados à infecção nos rebanhos ovinos pertencentes a municípios da microrregião de Teresina, PI, Brasil. Foram colhidas 100 amostras de urina e de sangue de ovinos com idade superior ou igual a seis meses. As amostras de urina foram submetidas a PCR convencional e as amostras de sangue à técnica de IDGA. Das 100 amostras de sangue 17 (17%) foram reagentes ao teste de IDGA. Já na PCR convencional das 100 amostras de urina, seis (6%) foram positivas. Ressalta-se que três animais foram positivos em ambos os testes. Como fatores associados à infecção por B. ovis, observou-se o tipo de sistema de criação (OR=0,19), o manejo alimentar (OR=0,05), presença de partos distócicos (OR=4,50), abortamentos (OR=3,75) e a fonte de água fornecida aos animais (OR=0,19). Assim, conclui-se que foi possível detectar a ocorrência de animais com brucelose ovina, uma vez que a PCR é um método confirmatório. Além disso, há fatores de risco associados à infecção por B. ovis nos municípios estudados.


Subject(s)
Animals , Brucellosis/diagnosis , Sheep , Risk Factors , Brucella ovis/pathogenicity , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Immunodiffusion/veterinary , Diagnosis
9.
Rev. bras. parasitol. vet ; 30(2): e027920, 2021. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1251376

ABSTRACT

Abstract The present study aimed to evaluate a methodology for active surveillance of visceral leishmaniasis by detecting Leishmania DNA in organs of wild road-killed animals from November 2016 to October 2018 in the North of Paraná, Brazil. The collection points of road-killed wild animals were georeferenced. The animals were autopsied and samples of bone marrow, lymph node, liver, spleen, and ear skin were collected. Genomic DNA was extracted and subjected to PCR for amplification of Leishmania spp. 18S, kinetoplastic DNA (kDNA), HSP70, and ITS1 genes, and DNA sequencing was performed. The primers used for the amplification of kDNA, ITS1, and HSP70 genes presented non-specific results. Of the 66 mammals collected from 24 different municipalities, one Southern Tamandua (Tamandua tetradactyla) presented DNA of Leishmania spp. in lymph nodes by 18S PCR. DNA sequencing confirmed the results of the subgenus, Viannia, identification. We suggest using the methodology showed in the present study in the active and early surveillance of visceral leishmaniasis in a non-endemic area.


Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar uma metodologia de vigilância ativa da leishmaniose visceral por meio da detecção de DNA de Leishmania em órgãos de animais silvestres atropelados, de novembro de 2016 a outubro de 2018, no Norte do Paraná, Brasil. Os pontos de coleta dos animais silvestres atropelados foram georreferenciados. Os animais foram autopsiados e amostras de medula óssea, linfonodo, fígado, baço, e pele de orelha foram coletados. DNA genômico foi extraído e submetido à PCR para amplificação de quatro diferentes regiões de Leishmania spp.: 18S, kDNA, HSP70 e ITS1, sequenciamento de DNA foi realizado. Os iniciadores utilizados para a amplificação dos genes kDNA, ITS1 e HSP70 apresentaram resultados inespecíficos. Dos 66 mamíferos coletados em 24 diferentes municípios, um tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) apresentou DNA de Leishmania spp. em linfonodo na PCR, que amplificou o gene 18S. O sequenciamento de DNA confirmou o resultado e demonstrou a presença do subgênero Viannia. Sugere-se o uso da metodologia apresentada no presente estudo na vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral em área não endêmica.


Subject(s)
Animals , Leishmaniasis/diagnosis , Leishmaniasis/veterinary , Leishmaniasis/epidemiology , Leishmania/genetics , Leishmaniasis, Visceral/diagnosis , Leishmaniasis, Visceral/epidemiology , Brazil , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Leishmaniasis, Visceral/veterinary , Mammals
10.
Rev. bras. parasitol. vet ; 30(2): e000621, 2021. tab
Article in English | LILACS | ID: biblio-1251368

ABSTRACT

Abstract Molecular methods such as Copro-PCR stand out in the diagnosis of T. gondii, because they are highly sensitive and specific, and can distinguish T. gondii from other morphologically similar coccids. The purpose was the detection of Toxoplasma gondii copro-prevalence by polymerase chain reaction in 149 fecal samples from stray and domiciled cats, using three distinct markers (B5-B6, 18S and 529bp RE). Oocysts of T. gondii/H. hammondi were detected in 15.4% by parasitology fecal tests (PFT), and 4% of these oocysts were positively identified as T. gondii by Copro-PCR. The presence of T. gondii genetic material was detected in 16.1%, but 12% of the samples that tested positive by Copro-PCR were negative in PFT. Samples with discordant results were subjected to a new Copro-PCR with 18S marker and a 529, and of the 17 samples, 9 contained T. gondii genetic material. A comparison of the PFT and the molecular methods showed the latter was more sensitive, since it detected 22.1% while the PFT detected 15.4%. Demonstrating the high sensitivity and specificity of the Copro-PCR, particularly with the association of primers (k=0.809), but also confirms the importance of using molecular techniques in laboratories, since Copro-PCR was able to detect samples considered negative by PFT.


Resumo Métodos moleculares como a Copro-PCR se destacam no diagnóstico de T. gondii por serem altamente sensíveis e específicos, podendo distinguir T. gondii de outros coccídeos morfologicamente semelhantes. O objetivo foi a detecção da coproprevalência de Toxoplasma gondii por reação em cadeia da polimerase, em 149 amostras fecais de gatos errantes e domiciliados, utilizando-se três marcadores distintos (B5-B6, 18S e 529pb RE). Oocistos de T. gondii/H. hammondi foram detectados em 15,4% pelos exames parasitológicos de fezes (EPF), e 4% desses oocistos foram identificados positivamente como T. gondii pela Copro-PCR. A presença de material genético de T. gondii foi detectada em 16,1%, mas 12% das amostras positivas pelo Copro-PCR foram negativas no EPF. As amostras com resultados discordantes foram submetidas a uma nova Copro-PCR com os marcadores 18S e 529 e, das 17 amostras, 9 continham material genético de T. gondii. A comparação do EPF com os métodos moleculares mostrou que esse último foi mais sensível, pois detectou 22,1%, enquanto o EPF detectou 15,4%. Isso demonstra a alta sensibilidade e especificidade da Copro-PCR, principalmente com a associação de marcadores (k = 0,809); mas também confirma a importância do uso de técnicas moleculares em laboratórios, uma vez que a Copro-PCR foi capaz de detectar amostras consideradas negativas pelo EPF.


Subject(s)
Animals , Cats , Toxoplasma/genetics , Cat Diseases/diagnosis , Cat Diseases/epidemiology , Toxoplasmosis, Animal/diagnosis , Toxoplasmosis, Animal/epidemiology , Polymerase Chain Reaction/veterinary , DNA, Protozoan , Oocysts , Feces
11.
Rev. bras. parasitol. vet ; 30(1): e023320, 2021. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1156231

ABSTRACT

Abstract The aim of this study was to detect Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea spp.) sold on seven beaches in the State of Pará, Brazil. According to the National Program for Hygiene and Sanitary Control of Bivalve Mollusks, 100 g of the edible part of mollusks is required to analyze contaminating microorganisms. In this study, 12 oysters were assumed to be equivalent to 100 g of edible parts when preparing each pooled sample. In total, 360 oysters were purchased from 30 vendors. From groups of 12 oysters purchased per vendor, 60 pooled samples were obtained, comprising 30 gill tissues and 30 gastrointestinal tracts. For molecular analysis, nested-PCR was conducted to amplify a 155-base-pair product of the B1 gene from T. gondii. All analyzed samples were negative for T. gondii. Our findings indicate that the oyster samples sold on the beaches in the State of Pará were not contaminated by T. gondii.


Resumo O objetivo deste estudo foi detectar DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea spp.) comercializadas em sete praias do Estado do Pará, Brasil. De acordo com o Programa Nacional de Controle Higiênico Sanitário de Moluscos Bivalves, 100 g da parte comestível dos moluscos são necessários para a análise de microrganismos contaminantes. Neste estudo, 12 ostras foram consideradas equivalentes a 100 g de partes comestíveis na preparação de cada amostra agrupada. No total, 360 ostras foram compradas de 30 vendedores. De grupos de 12 ostras adquiridas por vendedor, foram obtidas 60 amostras agrupadas, compreendendo 30 tecidos branquiais e 30 tratos gastrointestinais. Para a análise molecular, a nested PCR foi realizada para amplificar um produto de 155 pares de bases do gene B1 de T. gondii. Todas as amostras analisadas foram negativas para T. gondii. Os resultados indicam que as amostras de ostras comercializadas em praias do Estado do Pará não foram contaminadas por T. gondii.


Subject(s)
Animals , Toxoplasma/genetics , Crassostrea , Brazil , Polymerase Chain Reaction/veterinary
12.
Rev. bras. parasitol. vet ; 30(1): e025020, 2021. tab, graf
Article in English | LILACS | ID: biblio-1156216

ABSTRACT

Abstract Gurltia paralysans is the causal agent of gurltiosis in domestic cats in South America. Although the life cycle of G. paralysans is unknown, it is thought that gastropods could act as intermediate hosts (IHs), as is the case for several nematodes in the Angiostrongylidae family. The aim of this study was to search for G. paralysans larvae in terrestrial gastropods and determine their role in the life cycle of this nematode species. Terrestrial gastropod samples (n=835) were collected in Punucapa, Valdivia, southern Chile, where cases of gurltiosis had been reported before. The samples included species from the families Arionidae, Limacidae, Helicidae and Milacidae. All gastropods were subjected to enzymatic digestion to isolate G. paralysans larvae. Ten percent of the gastropod samples were analyzed using seminested PCR targeting the 28S rRNA gene, while 2.6% were analyzed by histopathological examination. The results indicated the absence of G. paralysans when using any of the three methods. In conclusion, further studies are needed to evaluate specific species of aquatic or native gastropods acting as possible IHs (in this geographic location).


Resumo Gurltia paralysans é o agente etiológico da gurltiose em gatos domésticos na América do Sul. Embora o ciclo biologico de G. paralysans seja desconhecido, provavelmente é indireto com gastrópodes atuando como hospedeiros intermediários (HIs), como no caso de vários nematoides da família Angiostrongylidae. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de larvas de G. paralysans em gastrópodes terrestres para avaliar seu papel no ciclo de vida do parasito. Amostras de gastrópodes terrestres (n = 835) foram coletadas em Punucapa, Valdivia, sul do Chile, onde casos de gurltiose foram relatados anteriormente. As amostras incluíram espécies das famílias Arionidae, Limacidae, Helicidae e Milacidae. Todos os gastrópodes foram submetidos à digestão enzimática para isolar as larvas de G. paralysans. 10% das amostras foram analisadas, utilizando-se seminested PCR para o gen 28S RNAr de G. paralysans, enquanto 2,6% foram analisados ​​por exame histopatológico. Os resultados indicaram ausência de G. paralysans em todos os três métodos. Os dados permitem concluir que são necessários mais estudos para avaliar espécies específicas de gastrópodes aquáticos ou nativos, que atuam como possíveis hospedeiros intermediários nessa localização geográfica.


Subject(s)
Animals , Cats , Cat Diseases/parasitology , Cat Diseases/transmission , Strongylida Infections/transmission , Strongylida Infections/veterinary , Gastropoda/parasitology , Metastrongyloidea/physiology , Chile , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Host Specificity , Life Cycle Stages
13.
Braz. j. biol ; 81(2): 392-397, 2021. tab, ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1153365

ABSTRACT

Autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) is the most common genetic disease in cats. However, scarce data on its prevalence are available in Brazil. Persian cats and Persian-related breeds were assessed by molecular genotyping for a C to A transversion in exon 29 of PKD1 gene to determine ADPKD prevalence in a Brazilian population. Genomic DNA extracted from peripheral whole blood or oral swabs samples was used to amplify exon 29 of PKD1 gene employing a PCR-RFLP methodology. From a total of 616 animals, 27/537 Persian and 1/17 Himalayan cats showed the single-nucleotide variant (C to A) at position 3284 in exon 29 of feline PKD1. This pathogenic variation has been identified only in heterozygous state. The prevalence of ADPKD in Persian cats and Persian-related breeds was 5.03% and 1.6%, respectively. There was no significant association between feline breed, gender or age with ADPKD prevalence. Of note, the observed ADPKD prevalence in Persian cats and Persian-related breeds in Brazil was lower than the ones reported in other parts of the world. This finding may be related to genetic counseling and consequent selection of ADPKD-free cats for reproduction.


A doença renal policística autossômica dominante (DRPAD) é a doença genética mais comum em gatos. No entanto, poucos dados sobre sua prevalência estão disponíveis no Brasil. Gatos Persas e de raças relacionadas foram avaliados por genotipagem molecular para a transversão C→A no exon 29 do gene PKD1 felino para determinar a prevalência de DRPAD. DNA genômico extraído de sangue total periférico ou amostras de swabs orais foram utilizados para amplificar o exon 29 do gene PKD1 pela técnica de PCR-RFLP. De um total de 616 gatos, 27/537 Persas e 1/17 Himalaia mostraram a variante de nucleotídeo único (C→A) na posição 3284 no exon 29 do gene PKD1. Esta variante patogênica foi identificada apenas em heterozigose. A prevalência de DRPAD em gatos Persas e raças relacionadas foram de 5,03% e 1,6%, respectivamente. Não houve associações significativas entre raça, gênero ou idade dos felinos e incidência de DRPAD. A prevalência de DRPAD em gatos Persas e raças relacionadas no Brasil foi menor do que em outras partes do mundo, o que pode estar relacionado ao aconselhamento genético e consequente seleção de gatos sem ADPKD para reprodução.


Subject(s)
Animals , Cats , Polycystic Kidney, Autosomal Dominant/genetics , Polycystic Kidney, Autosomal Dominant/veterinary , Polycystic Kidney, Autosomal Dominant/epidemiology , Polymorphism, Restriction Fragment Length , Brazil/epidemiology , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Prevalence , Genotyping Techniques/veterinary , Mutation
14.
Rev. bras. parasitol. vet ; 30(3): e009121, 2021.
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1288705

ABSTRACT

Abstract The dog is the main domestic reservoir of Leishmania and font of infection for the vector, constituting an important host for the transmission of the parasite to humans. Non-invasive collection of swab samples for leishmaniasis diagnosis has been a promising alternative. This study analyzed the positivity of polymerase chain reaction (PCR) for the diagnosis of canine leishmaniasis in conjunctiva samples. DNA extraction was performed using SDS 20% and PCR was performed using 13A/13B primers that amplify 120-bp of Leishmania kDNA. Of the 77 dogs analyzed, 50 (64.93%) had ocular changes: 25 (32.47%) dogs had periocular lesion, 41 (53.25%) dogs had purulent eye discharge, and 17 (22.08%) dogs had both signals. PCR was positive in 35 dogs (45.45%), and there was no significant difference between dogs with and without ocular signals (p=0.4074). PCR positivity was significant higher in dogs without periocular injury (p=0.0018). Conjunctive PCR, a less invasive, fast, and painless collection technique, is indicated to complement the diagnosis, especially in dogs without periocular injury, independent of the presence of purulent eye discharge.


Resumo O cão é o principal reservatório doméstico de Leishmania e também fonte de infecção para o vetor, constituindo um importante hospedeiro para a transmissão do parasita ao homem. A coleta não invasiva de amostras em swab para diagnóstico das leishmanioses tem sido uma alternativa promissora. Este estudo analisou a positividade da reação em cadeia da polimerase (PCR) para o diagnóstico de leishmaniose canina em amostras de conjuntiva. A extração do DNA foi realizada com SDS 20%. A PCR foi realizada com primers 13A/13B que amplificam 120-pb do kDNA de Leishmania. Dos 77 cães analisados, 50 (64,93%) tiveram alterações oculares; 25 (32,47%) cães tiveram uma lesão periocular; 41 (53,25%) tiveram secreção ocular purulenta e 17 (22,08%) cães tiveram ambos os sinais. A PCR foi positiva em 35 cães (45,45%) e não houve diferença significativa em cães com e sem sinais oculares (p = 0,4074). A positividade da PCR foi significativamente maior em cães sem lesão periocular (p = 0,0018). PCR em conjuntiva, uma técnica de coleta menos invasiva, rápida e indolor, é indicada para complementar o diagnóstico, principalmente em cães sem lesão periocular, independentemente da presença de secreção ocular purulenta.


Subject(s)
Animals , Dogs , Leishmania infantum/genetics , Dog Diseases/diagnosis , Leishmania/genetics , Leishmaniasis, Visceral/veterinary , DNA , Polymerase Chain Reaction/veterinary , DNA, Protozoan/genetics , Conjunctiva
15.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(6): 2053-2058, Nov.-Dec. 2020. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1142284

ABSTRACT

Objetivou-se avaliar um programa de controle da artrite encefalite caprina (AEC), por meio de testes diagnósticos sensíveis, separação de mãe e cria após o parto e medidas de manejo, com o intuito de formar rebanho livre do vírus. Utilizou-se um total de 47 cabritos da raça Saanen, mantidos isoladamente até o resultado dos primeiros testes de reação em cadeia de polimerase nested (PCR nested) e Western Blotting (WB), com base na coleta de sangue no momento do nascimento (M0). No PCR nested, quatro animais foram positivos, no M0, e foram eutanasiados. Posteriormente, os demais 43 cabritos foram submetidos à coleta de sangue aos 60 (M60) e 270 (M270) dias de vida para realização de novos testes de WB e PCR nested, que não detectaram animais positivos. Pode-se afirmar que a metodologia adotada neste estudo foi efetiva no controle da doença, nas fases de aleitamento e pós-aleitamento, e que a combinação do sistema de manejo, a fim de propiciar diminuição de risco de transmissão horizontal, com técnicas de diagnóstico mais apuradas, como o WB e a PCR nested, é relevante para elaboração de plano estratégico de controle da enfermidade.(AU)


We aimed to evaluate a program to control Caprine Arthritis Encephalitis (CAE), using diagnostic tests, separation of the mother and postpartum and other management measures, in order to form a free flock of the virus. We used a total of 47 Saanengoats in isolation until the results of the first nested Polymerase Chain Reaction (nested PCR) and Western Blotting (WB) tests, based on blood collection at the time of birth (M0). In the nested PCR, 4 animals were positive, at M0, and were eliminated. Later, the other 43goats were submitted to blood collection at 60 (M60) and 270 (M270) days of life to perform new tests of WB and nested PCR, which did not detect positive animals. We can affirm that the methodology adopted in this study was effective in the control of the disease, in the phase of breastfeeding and post-breastfeeding, and that the combination of the management system, which allows a reduction of risk of horizontal transmission, with more accurate diagnostic techniques, such as WB and nested PCR, is relevant for the elaboration of a strategic plan for the disease control.(AU)


Subject(s)
Animals , Goats/virology , Lentivirus Infections/prevention & control , Arthritis-Encephalitis Virus, Caprine/isolation & purification , Polymerase Chain Reaction/veterinary
16.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(5): 1719-1726, Sept.-Oct. 2020. tab, ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1131563

ABSTRACT

Neospora caninum is the main etiologic agent of neosporosis in domestic animals and its pathogenesis comprises two characteristic phases: acute and chronic. Rodents are used as experimental models to mimic acute and chronic bovine neosporosis. In this study, we inoculated a total of 27 female gerbils, with different doses of N. caninum tachyzoites aiming to induce chronic disease. DNA was extracted from different organs of each animal after spontaneous death or euthanasia. Encephalic tissues were submitted to a highly sensitive real time PCR aiming to detect chronically infected animals. All the other samples were submitted to standard PCR. A total of 11 gerbils died due to acute neosporosis, as confirmed by N. caninum DNA detection in organs. 5x103 tachyzoites/mL of N. caninum was the dosage of antigen that can induce chronic infection in gerbils. In the encephalon sections of some animals that showed clinical signs of persistent infection, we found 70% positive for the anterior encephalon section, suggesting this area as preferential for cyst formation. Therefore, we determined the doses of tachyzoites that cause acute or chronic infection and detection of positive tissues, preferably, systemic organs during acute and encephalon in chronic phases.(AU)


Neospora caninum é o principal agente etiológico da neosporose em animais domésticos, e sua patogênese compreende duas fases características: aguda e crônica. Roedores são usados como modelos experimentais para simular neosporose bovina aguda e crônica. Neste estudo, foi inoculado um total de 27 gerbilos, fêmeas, com diferentes doses de taquizoítos de N. caninum, visando induzir doença crônica. O DNA foi extraído de diferentes órgãos de cada animal após a morte espontânea ou a eutanásia. Os tecidos encefálicos foram submetidos à PCR em tempo real de alta sensibilidade para detecção de animais com infecção crônica. Todas as outras amostras foram submetidas à PCR padrão. Um total de 11 gerbilos morreu devido à neosporose aguda, como confirmado pela detecção de DNA de N. caninum nos órgãos. A dosagem de antígeno que pode induzir infecção crônica foi de 5x103 taquizoítos/mL de N. caninum. Em seções do encéfalo de alguns animais, que apresentaram sinais clínicos de infecção persistente, encontraram-se 70% de positividade para a seção do encéfalo anterior, sugerindo essa área como preferencial para a formação de cisto. Assim, foram determinadas,, em gerbilos, as dosagens de taquizoítos capazes de induzir infecção crônica ou aguda, bem como foram detectados tecidos positivos, preferencialmente, em órgãos sistêmicos, na fase aguda, e no encéfalo, na crônica.(AU)


Subject(s)
Animals , Female , Brain/diagnostic imaging , Gerbillinae/parasitology , Coccidiosis/veterinary , Neospora/isolation & purification , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Trophozoites
17.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(5): 1731-1736, Sept.-Oct. 2020. tab
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1131535

ABSTRACT

Porcine circovirus 3 (PCV-3) DNA has been detected in serum samples from apparently healthy pigs as well as pigs with different clinical conditions. Molecular detection of PCV-3 was observed in swine serum samples from Southeastern - Brazil using a nested PCR designed specifically for this study. The epidemiology and clinical aspects of PCV-3 infection were evaluated. The samples originated from 154 pigs of both genders from different production phases and with different clinical presentations, sampled from 31 pig farms visited between 2013 and 2018. In this study, PCV-3 was detected in 26.7% of samples from all populations across varying ages. Statistical association (P=0.0285) was observed only between animals with respiratory signs and PCV-3; no PCV-3-positive animal had diarrhea. No statistical association was observed between PCV-3 and age, or gender of the pigs. Because PCV-3 is a newly discovered virus, there is very little information about its epidemiology. We hope that these data can help in future studies investigating PCV-3 epidemiology.(AU)


O DNA do circovírus suíno 3 (PCV-3) foi detectado em amostras de soro de suínos aparentemente saudáveis, bem como em suínos com diferentes condições clínicas. A detecção molecular do PCV-3 foi observada em amostras de soro de suínos da região Sudeste do Brasil, com uma nested PCR desenhada especificamente para este estudo. A epidemiologia e os aspectos clínicos da infecção por PCV-3 foram avaliados. As amostras foram coletadas de 154 suínos de ambos os sexos, de diferentes fases de produção e com diferentes sinais clínicos. Os animais pertenciam a 31 granjas visitadas entre 2013 e 2018. Neste estudo, o PCV-3 foi detectado em 26,7% das amostras de animais saudáveis e de animais com variados sinais clínicos, de ambos os sexos e de idades variadas. Associação estatística (P=0,0285) foi observada apenas entre animais com sinais respiratórios e PCV-3; nenhum animal positivo para PCV-3 apresentava diarreia. Não foi observada associação estatística entre o PCV-3 e a idade ou o sexo dos suínos. Por se tratar de um vírus recém-descoberto, existem poucas informações sobre sua epidemiologia. Espera-se que os dados deste trabalho possam contribuir para futuros estudos sobre a epidemiologia do PCV-3.(AU)


Subject(s)
Animals , Swine/virology , Circovirus/genetics , Circoviridae Infections/pathology , Circoviridae Infections/veterinary , Polymerase Chain Reaction/veterinary
18.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(5): 2002-2006, Sept.-Oct. 2020. tab, ilus
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1131562

ABSTRACT

A esporotricose é uma doença emergente e a incidência de esporotricose zoonótica tem aumentado, principalmente no Brasil; a maioria dos casos está relacionada à transmissão de gatos infectados. O diagnóstico definitivo da esporotricose felina é feito por cultura fúngica; no entanto, aguardar o longo período de cultura pode atrasar o início do tratamento. O objetivo deste estudo foi detectar e determinar as espécies de Sporothrix por PCR realizado diretamente das lesões de gatos, provenientes de área endêmica, nos quais a esporotricose fazia parte do diagnóstico diferencial. Um total de 87,1% dos casos foi positivo por PCR ou cultura fúngica para Sporothrix; 81,4% foram confirmados como S. brasiliensis por PCR, 71,4% por isolamento e 65,7% pelos dois métodos. Em conclusão, a análise direta por PCR de lesões sugestivas de esporotricose em gatos é um bom método para confirmar a infecção e determinar as espécies de Sporothrix, garantindo um diagnóstico rápido; esse método tem uma boa concordância com o isolamento fúngico.(AU)


Subject(s)
Animals , Cats , Skin/injuries , Sporotrichosis/veterinary , Sporothrix/isolation & purification , Polymerase Chain Reaction/veterinary
19.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(4): 1258-1262, July-Aug. 2020. tab
Article in Portuguese | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1131512

ABSTRACT

Este estudo objetivou descrever o aspecto hematológico de seis onças-pardas (Puma concolor) infectadas pelo Cytauxzoon felis. Os seis casos de infecção foram identificados durante o manejo sanitário de 11 animais de um centro de reabilitação de animais silvestres. Estruturas compatíveis com piroplasmídeos foram observadas durante a avaliação do esfregaço sanguíneo e confirmadas como Cytauxzoon felis pela técnica de PCR. A análise estatística demonstrou diferença significativa (P<0,05) no número absoluto dos linfócitos entre os grupos dos animais infectados e não infectados. Assim, expressivas alterações hematológicas e bioquímicas entre os grupos investigados alertam para a dificuldade de identificação de onças-pardas infectadas por C. felis, apoiada apenas em exames de rotina, bem como para o risco, sobretudo, da reintrodução desses animais na natureza.(AU)


This Cytauxzoon felis by the PCR technique. Statistical analysis showed a significant difference is study aimed to describe the hematological appearance of six puma (puma concolor) infected with cytauxzoon felis. The six cases of infection were identified during the sanitary management of 11 animals from a wild animal rehabilitation center. Piroplasmid compatible structures were observed during the blood smear evaluation and confirmed as (P<0.05) in the absolute number of lymphocytes between the groups of infected and uninfected animals. Thus expressive hematological and biochemical alterations between the groups investigated alert to the difficulty of identifying infected brown jaguars by C. felis, supported only by routine examinations, and the risk especially when aiming at the reintroduction of these animals in the wild.(AU)


Subject(s)
Animals , Plasmids , Lymphocytes/chemistry , Puma/blood , Hematologic Tests/veterinary , Brazil , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Animals, Wild/blood
20.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(4): 1339-1345, July-Aug. 2020. tab, graf
Article in English | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1131509

ABSTRACT

Free-range chickens may ingest oocysts of T. gondii present in the environment and consequently harbor virulent strains of this parasite in different tissues, without any clinical signs. Isolation of T. gondii through bioassays on mice and cats from naturally infected chicken tissues has been described in several countries, demonstrating the importance of free-range chickens in the transmission of this parasite. The aim of this study was the genotypic characterization of T. gondii isolates obtained from naturally infected free-range chickens in a rural area of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Brain and heart tissue from 12 chickens seropositive for T. gondii were processed using peptic digestion technique for parasite isolation. From 12 samples subjected to mouse bioassay, nine isolates were obtained. RFLP-PCR genotypic characterization was performed using 11 genetic markers: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 and Apico. Genetic characterization of the isolates revealed the presence of five atypical genotypes according to ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 and # 163). Our results showed a wide genetic diversity of T. gondii in free-range chickens in this region.(AU)


Galinhas criadas ao ar livre podem ingerir oocistos de T. gondii presentes no ambiente e, com isso, albergar cepas virulentas desse parasita em diferentes tecidos, sem sinais clínicos. O isolamento de T. gondii por meio de bioensaios em camundongos e gatos, a partir de tecidos de galinhas naturalmente infectadas, tem sido descrito em vários países. Isso demonstra a importância das galinhas caipiras na epidemiologia desse parasita. O objetivo deste trabalho foi caracterizar genotipicamente isolados de T. gondii obtidos de galinhas caipiras naturalmente infectadas em uma área rural do município de Santa Maria, estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Fragmentos de cérebro e de coração, de 12 galinhas soropositivas para T. gondii, foram processados pela técnica de digestão péptica para isolamento do parasita. Das 12 amostras submetidas a bioensaio com camundongos, nove isolados foram obtidos. A caracterização genotípica por RFLP-PCR foi realizada utilizando-se 11 marcadores genéticos: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 e Apico e revelou a presença de cinco genótipos atípicos de acordo com o ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 e # 163). Os resultados mostraram uma ampla diversidade genética de T. gondii em galinhas caipiras nessa região.(AU)


Subject(s)
Animals , Mice , Toxoplasma , Biological Assay/veterinary , Chickens/virology , Toxoplasmosis, Animal , Genotyping Techniques/veterinary , Rural Areas , Polymerase Chain Reaction/veterinary
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