Assesment of viability of yeast by flow cytometry using light green as vital dye exclusion

Se compararon dos técnicas para valorar la viabilidad de levaduras por medio de citometría de flujo aplicada a microbiología. En una se usó el colorante yoduro de propidio (YP), el cual al haber un daño de membrana pasa al citoplasma para unirse al DNA o RNA, lo que permite excluir microorganismos dañados de los íntegros, y en la otra se usó el colorante verde claro (VC), ampliamente utilizado en tinciones histológicas, histoquímicas e inmunoquímicas. El modelo de levadura utilizado fue el de muerte por calor en Candida guilliermondii. El análisis de citometría de flujo por diagramas de puntos, en ambos colorantes mostró una separación muy clara de las poblaciónes muertas hacia verde-naranja (350-600 nm) para el VC y rojo (550-725 nm) para el YP, en los canales de fluorescencia correspondientes. Todos los experimentos mostraron entre las poblaciones de levadura vivas y muertas por calor, una prueba de Kolmogorov-Smirnov (K-S) mayor de 99 por ciento de probabilidad de diferencia entre los histogramas de los organismos vivos de los muertos, con una D= con valores de 0.50-0.64 para VC y de 0.91-0.98 para YP. Dado el costo y riesgo de carcinogénesis por el YP, el VC puede ser utilizado en el análisis de viabilidad en levaduras por citofluorometría

Detection of immunoglobulins on bacterial surface by laser flow cytometry: analysis between Haemoplhilus influenzae type b and Vibrio cholerae 01 of healthy mother-full term newborn sera

The identification of human IgG immunoglobulins on the surface of Vibrio cholerae O1, and Haemophilus influenzae type b microorganisms was assessed via a flow cytometric technique. A group of 31 healthy mother-full term nerwborn duo sera from a non-endemic cholera area was assayed. The sera of mothers and full-term newborns against both microorganisms were compared. The mean fluorescent intensity of the samples was not different at the 0.05 significance level by paired t-test. On the other hand, the immunoglobulins of newborn and mothers for V. cholerae O1 was notably lower when compared with H. influenzae type b microorganisms (p<0.05 by paried t-test, t=-5.570 for mother' sera, and t=-7.496 for the sera of the newborns). These data provide circumstantial evidence that LFC techique would be useful on bacteria-related serology

Flow cytometry evaluation of complement mediated bacterial membrane damage

The study of the complement-outer bacterial membrane interactions is gaining enthusiasm for applying a continous development of more specialized techniques. In this paper a novel flow cytometry technique shows that highly fluorescent lucifer yellow-stained Neisseriae gonorrhoeae when exposed to the redox reaction of p-nitro blue chloride tetrazolium (NBT), as formazan precipitation takes place, a shift to lesser fluorescent channels of the histogram population occurs. That effect is labeled NBT-laser beam quenching (NBT-LBQ). A significant difference by Kolmogorov-Smirnov summation curve analysis is found between complement heat-inactivated and its counterpart assessed with normal complement microorganisms. The operation of this NBT-LBQ effect by microbial flow cytometry casts an interesting potential for the evaluation of the outer membrane-complement-interaction of serum sensitive microorganisms

Fenotipificación inmunológica de linfocitos en pacientes VIH+ / Immunologic phenotyping of lymphocytes in HIV-positive patients

Se estudiaron los linfocitos CD3+ , CD4+ y CD8+ de 187 pacientes que viven con el VIH-1, con edades comprendidas entre 19 y 56 años, en estadios clínicos A 1, 2, 3 (67 asintomáticos) y con SIDA en estadios B 1, 2, 3 y C 1, 2, 3 (83 pacientes). Se usó un equipo compacto que utiliza sangre total y obvia la biometría hemática, ahorrando tiempo y costo. Al compararlos con 37 sujetos normales de las mismas edades, se encontró una marcada diferencia con los testigos de 1.78 ñ 0.65 y con el grupo asintomático A 1, 2, 3 de 0.37 ñ 0.23, al analizar las proporciones CD4+/CD8+ (ANOVA, F=<5 por ciento, >1 por ciento). Extendimos nuestra observación al análisis de los ángulos formados por la unión de los puntos de las proporciones CD4+/CD8+-CD4+/CD3+ y CD4+/CD3+-CD8+/CD3+ en papel milimétrico, a una distancia de 4 cm, graficando con el 0º a la izquierda y los 90º hacia arriba. El ángulo de las proporciones CD4+/CD3+-CD8+/CD3+ para los testigos fue de 199.59º ñ 10.87º, comparado con el grupo de asintomáticos que fue de 140.59º (ANOVA, F=<5 por ciento, >1 por ciento). El sobreponer en forma de diagrama los valores de los ángulos de las proporciones, tanto de los testigos como de los grupos problema en un círculo, facilita la interpretación al clínico

We propose that the ratios of lymphocyte subsets: CD4+/CD8+, CD4+/CD3+, and CD8+/CD3+, graphically displayed in this order, could be an easy way of immunophenotyping and a simple form of interpretation both for clinicians and patients. A total of 187 asymptomatic HIV-positive patients, -including 83 symptomatic patients with AIDS- and a normal comparative age group of 36 patients, were studied by flow cytometry. Ratios were graphically displayed on millimetric-grid paper, and a specific point was given to each obtained ratio. The points were connected by a line. The angles formed by the lines were measured and graphically displayed over a circle. The point of reference 0 was located on the left side of the circle, giving the corresponding 90 , 180 , and 240 angles. The graph of the control group shows a "beach chair" image. As soon as the CD4+ lymphocytes diminish and the CD8+ lymphocytes increase in HIV+ patients, "the chair's headrest" descends and the "chair's footpiece " swivels back. Given the ranks and fluctuations of the lymphocyte subsets, their graphic display provides a better representation of the immunological status.

Fenómeno de Weisser-Wechsberg (inhibición de la bacteriólisis): II. Inmunoglobulinas (IgG) de recién nacidos compiten con anticuerpos bactericidas del suero humano inmune a nivel del núcleo del lipopolisacárido (LPS-f5) de Brucella melitensis / Weisser-Wachsberg phenomenon (bactericidal inhibition): II. Newborn's immunoglobulins (IgG) compete with human immune serum's bactericide antibodies to level of lipopolysaccharide nucleus (LPS-f5) of Brucella melitensis

Introducción. El modelo de Brucellas melitensis lisa patólogena muestra que las inmunoglobulinas (IgG) de recién nacidos producen una inhibición de la bacteriólisis. No se sabe cual es la molécula implicada. Material y métodos. Por medio de liposomas se insertó lipopolisacárido (LPS) purificado de B. melitensis lisa patógena fracción 5 (LPS-f5). Se utilizó inmunotrasferencia en papel de nitrocelulosa para identificación del LPS-f5 por anticuerpos naturales e inmunes. Una prueba de bacteriólisis en cepas de B. melitensis M15 rugosa exenta de cadena lateral sirvió como modelo de inhibición al incubarse con IgG de recién nacidos y suero inmune. Resultados. Las IgG de recién nacidos remedan la bacteriólisis en un modelo liposomal. En la inmunotransferencia en papel de nitrocelulosa reconocen el núcleo de la molécula del LPS-f5 y producen inhibición de la bacteriólisis en la bacteria exenta de cadena lateral del PLS. Conclusiones. El núcleo del LPS en B. melitensis está implicado en el fenómeno de inhibición de la bacteriólisis por anticuerpos naturales

Microcultivo de dermatofitos en laminillas siliconadas / Silicone coated slide culture method for dermatophytes

Los dermatofitos son muy comunes en la edad pediátrica en una variedad de manifestaciones clínicas denominadas tiñas o empeines. Las especies causantes más frecuentes en México son: Trychophyton rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, Microsporum canis y Epidemophyton floccosum. Estos hongos fueron valorados por un método en cultivo líquido con una laminilla siliconada dentro y comparado con la clásica técnica de Ridell. La principal ventaja del método presentado en este trabajo es que el hongo se adhiere a la superficie hidrofóbica de la laminilla con silicona, permitiendo que los microcultivos así obtenidos se manejen con una mayor seguridad. Consideramos que esta técnica sería de gran utilidad en la identificación de hongos de alto riesgo

Fenómeno de Weisser Wechsberg: anticuerpos naturales de recién nacidos bloquean la actividad bactericida del suero humano inmune que se produce ante la infección por Brucella melitensis / Weisser-Wechsberg phenomenon: natural antibodies of newborn blocking the serum's lytic activity against Brucella melitensis

En las sepsis del recién nacido los gérmenes gramnegativos que contienen cadenas poli u oligosacarídicas (colonias lisas) son frecuentemente aisladas de la sangre. Por las características de ser altamente resistente al suero, se tomó como modelo a Brucella melitensis lisa patágena, para estudiar la interacción anticuerpos naturales (IgGs)-antígenos de superficie de bacterias gramnegativas. Para la valoración de la actividad bactericida del suero fue necesario estandarizar una técnica en diversos medios. El manejo medio fue el de Zöbell, denominado de requerimientos nutricionales mínimos para Brucella con una viabilidad bacteriana a los 45 minutos de 102 ñ 14 por ciento. La actividad bactericida del suero humano inmune contra la cepa de B. melitensis lisa patógena en la fase de crecimiento exponencial fue de 86 ñ 10 por ciento y en fase estacionaria de 21 ñ 7.7 por ciento. En la prueba de bacteriolisis por competencia las inmunoglobulinas de recién nacidos sanos cuantificadas por nefelometría (1 272 ñ 215 mg/dL de IgGs), al reconocer en la superficie bacteriana antígenos en común con el suero inmune humano, produjeron una inhibición de la bacteriolisis en 71.16 ñ 4 por ciento

Serología comparativa en la fiebre tifoidea en niños: II. Comparación de una técnica de microhemoaglutinación en placa con fijación en superficie de Ruiz-Castañeda / Typhoid fever comparative serology in children II. Comparison between a plate microhemmaglutination and Ruiz-Castañeda surfaceal fixation techniques

Dos antígenos lipopolisacarídicos (LPS) que diferieren por la técnica en su preparación fueron extraídos de Salmonella typhi y adsorbidos con papaína y cisteína a la superficie de glóbulos rojos de carnero y fijados con glutaraldehido para ser utilizados en una técnica de microhemoglutinación en placa (MHAP). Una valoración retrospectiva con 30 sueros de niños con S. typhi aislada en sangre respectivos controles fue hecha por medio de la MHAP utilizando amvos antígenos LPS para comparación. Apesar de un índice de correlación alto (r = 0.88), el antígeno de fácil extracción llamdo "crudo" mostró una mejor sensibilidad de 73% versus 53% del LPS purificado. La prueba de MHAP con el antígeno crudo fue valorada en un estudio prospectivo efectuado en un periodo de seis meses en un servicio de urgencias con 36 sueros de niños en quienes se aisló S. typhi en sangre. La MHAP fue comparada con la fijación en superficie. Ambas pruebas mostraron la misma sensibilidad y especificidad de 91 y 100% respectivamente. Serología; fiebre tifoide; niños

Serología de la fiebre tifoidea en niños: I. La floculación-aglutinación en capilar; su especificidad en una población asintomática y su utilidad en un servicio de urgencias pediátricas / Typhoid fever serology in clildren: I. Capillary floculation; its specificity in an asymptomatic population and its utility in a pediatric emergency room

La prueba serológica de floculación-aglutinación en capilar se efectuó en 600 sueros. Se valoró a la aparición del fenómeno de floculacioón en un tiempo de variación, de los primeros segundos a los 10 minutos. De los 600 sueros, 31 (5.16%) dieron positiva la prueba en ese lapso (especificidad de 95%). Estos sueros considerados como falsos positivos dieron una fijación de superficie de 50% o mayor en 23% de ellos y por técnica de microhemoaglutinación en placa 61.29% mostró títulos de 1:400 o mayores. Para valorar la alta sensibilidad de la prueba se selecionaron los sueros de pacientes con S typhi aislada en sangre cuyas muestras fueron tomadas en la segunda y tercera semana de la enfermedad. La sensibilidad fue de 100%. La prueba de capilar se efectuó en el Servicio de Urgencias Pediátricas como prueba de escrutinio en pacientes sospechosos. Un grupo de 36 niños con S. typhi aislada en sangre con sus respectivos controles fue estudiado. La prueba de fijación en superficie de Ruiz-Castañeda se efectuó para comparación. La sensibilidad mostradas por amvas pruebas fueron similares. Serologia; fiebre tifoidea

Prueba de floculación-aglutinación en capilar el diagnóstico serológico de fiebre tifoidea en niños / Capillary flocculation-agglutination test in the serodiagnosis of typhoid fever in children

Un antígeno bacteriano coloreado, liofilizado y empacado en un tubo capilar al ser mezclado con el suero de pacientes con fiebre tifoidea, produjo un fenómeno de aglutinación-floculación, visible en un tiempo menor de 30 segundos al ser comparado con los sueros controles. A un total de 75 sueros de niños con fiebre tifoidea comprobada por aislamiento de S. typhi en sangre y a un mismo número de controles se les practicó las pruebas de hemoaglutinación (HA), inmunoenzimática (ELISA), fijación en superficie (FS) y la prueba capilar (PC) a describir en este trabajo. Los resultados fueron: HA: sensibilidad 88%, especificidad 94%; ELISA: sensibilidad 84%, especificidad de 94%; FS: sensibilidad 90%, especificidad de 100%; PC: sensibilidad 89%, especificidad 100%. La prueba de capilar mostró sensibilidad comparables a las demás pruebas. Tiene las ventajas de ser económica, rápida y fácil de interpretar. Como prueba de escrutinio puede ser útil en pequeñas comunidades donde la fiebre tifoidea es endémica

Frecuencia de microorganismos enteropatógenos aislados en niños con y sin diarrea aguda / Frecuency of enteropathogenic microorganisms isolated from children with and without diarrhea

Se estudiaron dos grupos de 50 niños cada uno, de uno y otro sexo, con edades comprendidas entre un mes a dos años. En el primer grupo o problema, se incluyeron niños con cuadro diarreico activo, de menos de dos semanas de evolución, sin tratamiento antibiótico previo. Los niños del grupo control no presentaban diarrea. En 44 pacientes (88%) del grupo problema, se aislaron microorganismos considerados enteropatógenos, siendo los más frecuentes los rotavirus, la E. coli enteropatógena y la E. coli toxigénica. En 26 pacientes se aisló un solo microorganismo, en tanto que en los 18 restantes se identificó más de un agente enteropatógeno. En 18 niños (38%) del grupo control, se aislaron microorganismos enteropatógenos. En este grupo predominaron la E. coli toxigénica, los rotavirus y la Salmoella. Los resultados del estudio mostraron que el aislamiento en heces de enteropatógenos reconocidos, no significa necesariamente que exista la enfermedad. A este respecto, se discute la influencia de los factores del medio ambiente, del huésped o de la lactancia materna, en la expresión patogénica de un microorganismo