Identificação de antígenos imunodominantes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni através de microarranjo de proteínas / Identification of immunodominant antigens in leptospira interrogans serovar copenhageni using a protein microarray approach

A leptospirose é uma doença zoonótica causada por bactérias do gênero Leptospira sp. Aausência de um teste diagnóstico rápido e confiável dificulta o diagnóstico precoce e o acessoao impacto da leptospirose na saúde pública. O Teste de Microaglutinação, consideradopadrão-ouro pela Organização Mundial de Saúde, é realizado em poucos laboratórios dereferência no mundo e, apesar de altamente específico, apresenta baixa sensibilidade na faseinicial da doença. O objetivo do presente estudo foi identificar novos alvos proteicos a seremempregados como marcadores diagnósticos para leptospirose. Para tal, foi construído ummicroarranjo de proteínas compreendendo 61 por cento do genoma codificante de Leptospirainterrogans sorovar Copenhageni e investigou-se a resposta por anticorpos IgG de 274indivíduos, sendo 80 pacientes em fase aguda da doença, 80 em fase convalescente e 114indivíduos saudáveis provenientes de área com transmissão endêmica e não endêmica paradoença. Foram encontrados 16 antígenos capazes de identificar casos agudos de leptospirose e18 capazes identificar casos convalescentes. Entre estes, antígenos como LipL32 e osdomínios das proteínas Lig já foram previamente descritos como sendo reconhecidos porsoros de pacientes humanos, atuando como prova de conceito para a plataforma demicroarranjo proteico. Novos antígenos também foram identificados no estudo, como aproteína hipotética LIC10215, que mostrou alta acurácia na identificação de casos agudos econvalescentes de leptospirose. Os antígenos imunodominantes identificados demonstrampotencial uso no desenvolvimento de novos ensaios diagnósticos e no melhoramento dostestes diagnósticos disponíveis no mercado. Estudos complementares serão realizados paraavaliar o desempenho desses antígenos nos formatos de ELISA e/ou de teste rápido...

Leptospirosis is a zoonotic disease caused by bacteria of the genus Leptospira sp. The lack ofa rapid and reliable point-of-care diagnostic test is a major barrier not only to assess the globalburden of the disease but also to provide an early diagnosis. Despite the high specificity of themicroaglutination test, which is the gold standard test for diagnosing leptospirosis accordingto the World Health Organization, it presents low sensitivity and is performed in fewreference laboratories worldwide. Therefore, the aim of this work was to identify new proteintargets to be used as diagnostic markers for leptospirosis. Accordingly, we developed aprotein microarray chip comprising 61 percent of the Leptospira interrogans serovar Copenhagenicoding genome and investigated the IgG response of 274 individuals, including 80convalescent- and 80 acute-phase patients and 114 healthy individuals from areas withendemic and non-endemic transmission of the disease. We found 16 antigens that identifiedacute leptospirosis cases and 18 antigens that identified convalescent cases. Among theseantigens are LipL32 and the unique domains of the Lig proteins, which have already beendescribed as seroreactive antigens among leptospirosis patients, thus acting as a proof-ofconceptfor the protein microarray platform. Novel antigens were also identified in this study,such as the hypothetical protein LIC10215, that showed high diagnostic accuracy for bothacute and convalescent cases. The imunodominant antigens identified here are potentialcandidates for the development of new diagnostic assays as well as for the improvement ofcurrently available tests. Further studies are needed to evaluate their performance in ELISAand rapid test platforms...

High dilutions of Euphorbia tirucalli L. (aveloz) modify the viability and glycolytic metabolism of cell lines / Altas diluições de Euphorbia tirucalli L. (aveloz) modificam a viabilidade e o metabolismo glicolítico de linhas celulares

The latex of Euphorbia tirucalli L. (Aveloz) is popularly used to treat cancers from diverse sources such as: breast, prostate, lung and kidney. Furthermore, high dilutions of this latex (latex-HDs) have been successfully used in the treatment of tumors, although the mechanisms involved in this antitumoral activity are not yet known [...] Latex-HDs were obtained through the interaction of two procedures: 1:100 dilution in mass and agitation, using 2 solvents, water and 70% ethanol in homeopathic preparations 5, 15 and 30cH, following the Brazilian Homeopathic Pharmacopeia. Cell lines were incubated with 1 % and 10 % of latex-HDs for 24 hours. Controls treated with similar preparations without latex were incubated under the same conditions. Cell viability was analyzed by MTT assay and morphological features were assessed by May-Grunwald-Giemsa method. Cell ultrastructure was analyzed by transmission electron microscopy. Metabolic alterations were detected by spectrophotometric assay for the enzyme 6-phosphofructo-1-kinase (PFK-1) activity. 1% of ethanolic latex-HDs induced no alterations in MelanA cells viability, however Aveloz 15cH induced an increase in MCF7 cells viability. After aqueous treatment, MelanA cells viability decreased in almost all systems, whereas in MCF7 cells, an increase was detected in dynamized water systems and Aveloz 15CH. However, only water 15cH increased cell viability in comparison to control and non-dynamized water. No alterations in MCF7 morphology and ultrastructure were visualized through light microscopy or electronic microscopy, respectively. Interesting results were detected when we studied the glycolytic metabolism of both cells, giving support to evidences showing that HDs interfere in the metabolism of cell lines. Further studies are needed to better understand the mechanisms involved in this in vitro biological response to HDs.

O látex de Ephorbia tirucalli L. (aveloz) é usado popularmente no tratamento de diversos tipos de câncer incluindo mama, próstata, pulmão e rim. Além do mais, altas diluições desse látex (latex-HDs) têm sido utilizadas com sucesso no tratamento de tumores, embora o mecanismo dessa ação ainda seja desconhecido [...] As látex-HDs foram obtidas através de 2 procedimentos: diluição 1:100 em massa e agitação, com 2 solventes, água e etanol 70%, nas diluições homeopáticas 5, 15cH e 30cH de acordo com a Farmacopéia Homeopática Brasileira. As linhas celulares foram incubadas com látex-HDs 1% e 10% por 24 horas. Foram preparados controles similares sem o látex e incubados sob as mesmas condições. A viabilidade celular foi analisada através do método May-grunwald-Giemsa. A ultrastrutura celular foi analisada através de microscopia eletrônica de transmissão. As alterações metabólicas foram detectadas por ensaio de espectrofotometria para a atividade da enzima 6-fosfofructo-1-quinase (PFK-1). Látex-Hds em etanol 1% não induziram qualquer alteração na viabilidade das células MelanA, mas Aveloz 15cH induziu aumento da viabilidade das células MCF7. Após tratamento, a viabilidade das células MelanA diminuiu em quase todos os sistemas, enquanto que nas células MCF7 foi detectado aumento nos sistemas aquosos e Aveloz 15cH, mas só água 15cH aumentou a viabilidade celular por comparação ao controle e água não dinamizada. Não foram detectadas alterações na morfologia celular por microscopis de luz quando se estudou o metabolismo glicolítico em ambas as células, demonstrando que os padrões de resposta celular dependem do tipo de solvente, metabolismo celular e procedimento de diluição. Esta é a primeira vez que se mostra que as altas diluições interferem no metabolismo de linhas celulares. Outros estudos são necessários para se compreender melhor os mecanismos envolvidos nesta resposta in vitro a altas diluições de aveloz.

Chronic toxicological effects of high diluted solutions of Aveloz (Euphorbia tirucalli L. ) on healthy mice: a preliminary study / Efeitos toxicológicos crônicos de altas diluições de Aveloz (Euphorbia tirucalli L. ) em camundongos sadios: estudo preliminar

The latex extracted from Euphorbia tirucalli, a plant popularly known as Aveloz, is used in complementary medicine to induce tumor regression. However, as this latex has toxic effects when administered orally in ponderal doses, the present study was designed to assess the effects of high dilutions in healthy mice over a period of 18 weeks. The Aveloz latex-high diluted solutions (latex-HD) were obtained through the interaction of two processes: 1:100 dilution in mass and succussion, using ethanol 70% as a solvent, in the homeopathic dilutions of 5, 15 and 30cH, following Farmacopéia Homeopática Brasileira. Control solutions without latex were compounded (ethanolic-HD) in the same dilutions and were administered simultaneously. The animals which received latex-HD 30cH showed a significant increase in food consumption (p < 0.05) without significant difference in weight gain. In regards to water consumption, no statistical difference was shown when different Aveloz latex-HD groups were compared, apart from the group that received 1 drop of pure latex in water, which presented a significant increase (p < 0.05) in this parameter.

O látex extraído de Euphorbia tirucalli, planta conhecida popularmente como Aveloz, é utilizado em medicina complementar para induzir regressão tumoral. No entanto, como este látex tem efeitos tóxicos quando administrado por via oral em doses ponderais, este estudo foi desenhado para avaliar os efeitos de altas diluições do mesmo em camundongos sadios por um período de 18 semanas. As altas diluições do látex do Aveloz (látex-HD) foram obtidas através da interação de dois processos: diluição 1:100 em massa e sucussão, utilizando etanol 70% como solvente, nas diluições homeopáticas 5, 15 e 30cH, de acordo com a Famracopéia Homeopática Brasileira. Soluções de controle sem o látex (etanol-HD) foram compostas nas mesmas diluições e ministradas simultaneamente. Os animais que receberam látex-HD 30cH mostraram aumento significativo no consumo de alimento (p < 0,05) sem diferença significativa em ganho de peso. A respeito do consumo de água, não foram observadas diferenças significativas entre os diferentes grupos látex-HD, enquanto que o grupo que recebeu 1 gota de látex puro em água apresentou aumento significativo neste parâmetro (p < 0,05).