Avaliação do antígeno recombinante K39, em teste imunocromatográfico, no diagnóstico da leishmaniose visceral canina endêmica na região noroeste do Estado de São Paulo, Brasil

Introdução: O programa de controle da leishmaniose visceral, no Brasil, preconiza a eutanásia de cães infectados por Leishmania chagasi. Uma das razões para explicar a falha dessa estratégia, em prevenir o aumento do número de casos, é o longo espaço de tempo entre a coleta das amostras, sua análise pelas técnicas sorológicas rotineiras de baixa especificidade e a implantação das medidas de controle. Objetivos: comparar o teste imunocromatográfico rK39, considerado rápido, sensível e específico, à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ao ensaio imunoenzimático (EIE) para detecção da infecção canina e estabelecer critérios para confirmação de caso de leishmaniose visceral canina (LVC) na rotina diagnóstica e em estudos epidemiológicos. Material e métodos: a) 1410 cães da região noroeste do Estado de São Paulo, endêmica para LVC, submetidos à avaliação clínica, eutanásia e necropsia (Grupo estudado); b) Cães portadores de babesiose, (n=10) erliquiose (n=14), dirofilariose (n=10), toxoplasmose (n= 5), leishmaniose tegumentar por L. (Viannia) braziliensis (n=8) (Grupo controle paraoutras patologias); c) 52 cães de área endêmica para leishmaniose tegumentar americana (LTA) com presença de Lutzomyia longipalpis e sem LVC autóctone; d)55 cães de área endêmica para LTA, sem presença de L. longipalpis e sem LVC autóctone (Grupos controles para áreas não endêmicas para LVC). Dos cães eutanasiados foram colhidos: a) amostras de sangue para obtenção de soro e eluato utilizados na realização do teste rK39 em sangue total, soro e eluato, RIFI e EIE em soro e eluato; b) aspirado de baço para isolamento de Leishmania. Resultados e conclusões: O porcentual de resultados concordantes entre o teste rK39 no sangue, soro e eluato e a RIFI realizada em soros foi proporcionalmente maior, quando comparado com a avaliação clínica ou necropsia compatíveis de LVC, com variação de 71,8% a 76,7%. Porcentuais semelhantes a esses foram observados, quando comparados os resultados ...

Avaliação do antígeno recombinante K39, em teste imunocromatográfico, no diagnóstico da leishmaniose visceral canina endêmica na região noroeste do Estado de São Paulo, Brasil / Evaluation of K39 recombinat antigen, in immunochromatogrphic test, for, diagnosis of endemic canine visceral leishmaniasis in São Paulo northwest region, Brazil

Introdução: O programa de controle da leishmaniose visceral, no Brasil, preconiza a eutanásia de cães infectados por Leishmania chagasi. Uma das razões para explicar a falha dessa estratégia, em prevenir o aumento do número de casos, é o longo espaço de tempo entre a coleta das amostras, sua análise pelas técnicas sorológicas rotineiras de baixa especificidade e a implantação das medidas de controle. Objetivos: comparar o teste imunocromatográfico rK39, considerado rápido, sensível e específico, à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ao ensaio imunoenzimático (EIE) para detecção da infecção canina e estabelecer critérios para confirmação de caso de leishmaniose visceral canina (LVC) na rotina diagnóstica e em estudos epidemiológicos. Material e métodos: a) 1410 cães da região noroeste do Estado de São Paulo, endêmica para LVC, submetidos à avaliação clínica, eutanásia e necropsia (Grupo estudado); b) Cães portadores de babesiose, (n=10) erliquiose (n=14), dirofilariose (n=10), toxoplasmose (n= 5), leishmaniose tegumentar por L. (Viannia) braziliensis (n=8) (Grupo controle paraoutras patologias); c) 52 cães de área endêmica para leishmaniose tegumentar americana (LTA) com presença de Lutzomyia longipalpis e sem LVC autóctone; d)55 cães de área endêmica para LTA, sem presença de L. longipalpis e sem LVC autóctone (Grupos controles para áreas não endêmicas para LVC). Dos cães eutanasiados foram colhidos: a) amostras de sangue para obtenção de soro e eluato utilizados na realização do teste rK39 em sangue total, soro e eluato, RIFI e EIE em soro e eluato; b) aspirado de baço para isolamento de Leishmania. Resultados e conclusões: O porcentual de resultados concordantes entre o teste rK39 no sangue, soro e eluato e a RIFI realizada em soros foi proporcionalmente maior, quando comparado com a avaliação clínica ou necropsia compatíveis de LVC, com variação de 71,8% a 76,7%. Porcentuais semelhantes a esses foram observados, quando comparados os resultados...

Isolamento de Trypanosoma cruzi por xenocultura após aplicaçäo de xenodiagnóstico In Vivo e/ou In Vitro em pacientes na fase crônica da doença de Chagas e na co-infecçäo pelo HIV / Trypanosoma cruzi isolation from xenoculture after In Vivo and/or In Vitro xenodiagnosis executed in Chagasic or co-infected with HIV patients

Neste estudo objetivou-se avaliar a viabilidade da utilizaçäo da xenocultura como técnica para o isolamento de amostras de Trypanossoma cruzi a partir do trato intestinal de Triatoma infestans. Foram realizadas xenoculturas a partir de xenodiagnósticos aplicados em 78 pacientes, procedentes de diferentes regiões do Brasil, todos em fase crônica da doença de Chagas, sendo 32 co-infectados pelo HIV. Foram aplicados no total 101 xenodiagnósticos, executados in vivo/ou in vitro com 30-40 ninfas de T. infestans entre 3§ e 4§ estádios de desenvolvimento. Ao final dos exames dos xenodiagnósticos, aos 30 e 60 dias, o trato digestivo de um número variável de triatomíneos de cada exame foi semeado, individualmente, após tratamento com álcool iodado, em meios bifásicos de Ducrey com LIT ou BHI (com gentamicina). As culturas foram examinadas quizenalmente até 3 meses e, as amostras isoladas estäo preservadas em nitrogênio líquido. Dos 101 xenodiagnósticos aplicados, 73 (72,3 por cento) foram positivos, correspondendo a 57 (73,1 por cento) dos 78 pacientes. Em 51 (89,5 por cento) dos 57 pacientes (26 co-infectados e 31 em fase crônica da doença de Chagas) com xenodiagnóstico positivo, o isolamento do parasita foi viabilizado pela utilizazçäo da xenocultura. O isolamento de T. cruzi foi da ordem de (96,2 por cento) (25/26) entre os pacientes co-infectados e (83,9 por cento) (26/31) entre aqueles soronegativos para HIV. De 461 barbeiros positivos aos exames do xenodiagnóstico in vivo ou in vitro, foi possível o isolamento de 250 (54,2 por cento) amostras de T. cruzi. De 181 insetos reconhecidos como negativos nos xenodiagnósticos positivos, foi consedido o isolamento de 25 (13,8 por cento) amostras do parasita. Mesmo entre 22 ninfas mortas, para as quais nem houvera sido possível o exame, por compressäo do abdomen, no xenodiagnóstico, a xenocultura viabilizou o isolamento de mais 2 (9,1 por cento) amostras de T. cruzi. Em nenhum xenodiagnóstico reconhecido como negativo foi obtido êxito para o isolamento deste protozoário. Foi observada uma perda de cerca de (5 por cento) das xenoculturas por contaminaçäo bacteriana ou fúngica. Verificou-se, ainda, uma aparente melhor adaptaçäo de formas delgadas do parasita nos meios de cultivo. Além de possibilitar o isolamento de T. cruzi

Investigaçäo e isolamento de Leishmania: criopreservaçäo de amostras de biópsias de lesöes cutâneas na leishmaniose tegumentar experimental / Investigation and isolation of leishmania: cryopreservation of samples of biopsies from skim lesions in experimental cutaneous leishmaniasi

Foi investigada a viabilidade do isolamento de Leishmania(V.) braziliensis e L.(L.)amazonensis a partir da criopreservaçäo, a -20grausC, -70grausC e -196grausC, de amostras de biópsias de lesöes cutâneas de hamsters(Mesocricetus auratus) experimentalmente infectados. Biópsias de 2mm de diâmetro foram obtidas de lesöes de patas de hamsters. Metade das biópsias foi acondicionada em tubos de poliestireno para congelamento, contendo 1,0ml de soluçäo salina estéril e 0,1ml de glicerol. As amostras restantes foram, individualmente, maceradas em soluçäo salina estéril e acondicionadas em alíquotas de 1,0ml em tubos de poliestireno para congelamento, com 0,1ml de glicerol. Foram constituídos três grupos de tubos, que foram mantidos, inicialmente, por uma noite a 4grausC, sendo transferidos sucessivamente para -20grausC, -70grausC e -196grausC, que foram as temperaturas de manutençäo, respectivamente, para os grupos 1,2 e 3, que assim permaneceram por um período de 60 dias. Após este período as amostras foram descongeladas e examinadas em esfregaços, culturas e inoculaçöes desses materiais. Ambas as espécies de Leishmania sobreviveram na condiçäo de manutençäo estabelecida para o grupo 1, ou seja -20grausC, tanto em biópsia como em homogenizado de macerado de biópsia. L.(L.) amazonensis sobreviveu, também, na condiçäo de manutençäo do grupo 3, a -196grausC

Técnicas parasitológicas para investigaçäo de animais naturalmente infectados por flagelados do gênero Trypanosoma gruby, 1843 / Parasitologic technics for investigation of naturally infected animals by genus Trypanosoma gruby, 1843

No presente trabalho, procurou-se avaliar comparativamente as técnicas do exame de sangue a fresco, do esfregaço sanguíneo, da hemocultura e do xenodiagnóstico como procedimentos laboratoriais para triagem de hospedeiros näo humanos naturalmente infectados por flagelados do gênero Trypanosoma. De um total de 440 animais pertencentes a 22 espécies diferentes, 57(12,95%) revelaram presença de tripanossomos na circulaçäo. O xenodiagnóstico mostrou ser a técnica mais efetiva para demonstraçäo de Trypanosoma(Schizotrypanum) cruzi em Didelphis marsupialis e Philander opossum. Em Nasua nasua, Trypanosoma foi observado em todos os procedimentos investigados. As técnicas do exame de sangue a fresco e do esfregaço sanguíneo foram mais eficientes para T.(Herpetosoma) e T.(Trypanozoon) evansi entre Proechimys iheringi e Canis familiaris, respectivamente

Isolamento de Leishmania SP a partir de creme leucocitário de paciente com leishmaniose tegumentar no Estado de São Paulo. Nota prévia / Isolation of Leishmania SP from buffy coat from a patient with tegumentary leishmaniasis in the State of São Paulo. previous note

A presença de flagelados do gênero Leishmania no sangue periférico de pacientes com calazar indiano vem sendo observada desde o início dos estudos sobre leishmaniose visceral. Ainda que esse parasitismo fosse escasso, os percentuais de positividade em esfregaços sanguíneos destes pacientes, já no início do século, eram sempre superiores a 50% (AU).

Variáveis relacionadas ao desenvolvimento de Triatoma infestans Klug, 1834 em condições de laboratório. 1. Relação entre o repasto sanguíneo e o desenvolvimento / Variables influencing the growth of Triatoma infestans Klug, 1834 in the laboratory: 1. Relation between blood meal and growth

Em continuação a estudos iniciados anteriormente, visando padronização de parâmetros envolvidos na realização de xenodiagnóstico, procurou-se observar neste experimento as relações existentes entre as manipulações em laboratório, a quantidade de sangue ingerido no repasto sanguíneo e o desenvolvimento ninfal de Triatoma infestans. Foram utilizados dois grupos, formados por 180 ninfas de 1.0 estádio cada um. Um destes grupos constituiu a amostra testada para as manipulações diárias de pesagem, enquanto o outro grupo foi mantido sem manipulação, servindo como controle. A manipulação interferiu na quantidade de sangue sugado, tendo o grupo manipulado sugado cerca de 35% menos sangue do que o controle. A quantidade de sangue sugado pelas ninfas, no estádio em que morreram, correspondeu a valor sensivelmente menor do que O observado para a média do volume de sangue sugado pelos demais insetos de mesmo estádio, que sobreviveram à muda seguinte. A medida que os reduvídeos avançaram em seus estádios evolutivos, necessitaram mais repastos; assim, no 1.0 estádio 82,43% das ninfas precisaram um único repasto, enquanto no 5.° estádio 77,39% tiveram que se alimentar duas ou mais vezes. Nos estádios mais jovens, quando ocorreu necessidade de mais de um repasto, dentro do mesmo estádio, observou-se que a quase totalidade das ninfas sugaram quantidade de sangue maior do que em repasto anterior. Tais informações permitem que os autores discutam sobre as formas e condições de criação de triatomíneos em laboratório e sobre as ninfas adequadas ao xenodiagnóstico (AU).

Variáveis relacionadas ao desenvolvimento de Triatoma infestans Klug, 1834 em condições de laboratório. 2. Efeitos da manipulação na sobrevivência e na fertilidade / Variables related to the development of Triatoma infestans Klug, 1834 under laboratory conditions. 2. Effects of manipulation on survival and fertility

Avaliaram-se neste estudo os efeitos da manipulação excessiva em laboratório sobre a sobrevivência em cada estádio e sobre a fertilidade de Triatoma inf eetans, Foram utilizados neste experimento ovos selecionados ao acaso no dia da desova, coleta dos em número tal que permitiu, após eclodirem, a constituição de dois grupos com 180 ninfas cada, sendo que um grupo foi mantido sem manipulações, servindo como controle e o outro constituiu o grupo testado para as manipulações de pesagem diária. Os insetos receberam alimentação em intervalos fixos de 21 dias, quando se lhes permitia sugar até a saciedade. ° tempo de permanência em cada estádio foi sempre maior no grupo testado; no grupo controle o tempo total de evolução foi, em média 47 dias inferior ao do outro grupo. Nos estádios iniciais, o grupo testado mostrou altas taxas de mortalidade. Viu-se ainda que a grande maioria dos exemplares do grupo testado apresentou-se ao mudar para a fase adulta com anormalidades morfológicas. Ao chegarem à fase alada os insetos foram acasalados, observando-se que todas as fêmeas do grupo controle desovaram ovos férteis, enquanto as do grupo testado, com exceção de uma única fêmea, desovaram ovos inférteis. Ao se efetuar o acasalamento de indivíduos de um grupo com os do outro, verificou-se que várias outras fêmeas do grupo testado passaram a desovar ovos férteis. Discute-se a importância da manipulação sobre o desenvolvimento, sobrevivência e fertilidade de Triatoma infestans criados em laboratório (AU).

Efeitos do jejum e da temperatura em laboratório na infectividade de triatomineos por Trypanosoma cruzi / Effects of fasting and laboratory temperature on the infectivity of Triatominae by Trypanosoma cruzi

A tentativa de padronização de alguns parâmetros que envolvem a realização do xenodiagnóstico, levou os autores do presente trabalho a estudarem a influencia do tempo de jejum e da temperatura de criação em laboratório sobre a evolução do T. cruzi em Triatoma infestans, assim como, sobre a própria evolução dos estádios ninfais destes artropodes. Estudaram também, a quantidade de sangue ingerido por tais insetos quando mantidos em diferentes temperaturas e períodos de jejum. Foram utilizados quatro lotes de 50 ovos cada. Os lotes 1 e 2 foram mantidos em temperatura constante (28o.C +/- 2) e umidade relativa do ar de 70-80%; os lotes 3 e 4 ficaram em temperatura ambiente (19-31o.C), variando a umidade livremente de acordo com as condições climáticas. Os lotes de números impares tiveram repastos quinzenais e os lotes de números pares, repastos mensais. Entre o 3o. e o 4o. estádios evolutivos, os barbeiros tomaram repasto contaminado com T. cruzi. Observou-se que a temperatura influiu no tempo de eclosão e desenvolvimento, que foi maior em temperatura ambiente. Quanto ao jejum, verificou se que tem uma importância menos acentuada sobre a evolução dos triatomíneos, porem, influiu decisivamente na mortalidade e na infectividade, pois, quanto maior era o tempo de abstinência de alimento, menor a quantidade de sangue sugado (AU).