RESUMEN
As part of our ongoing research on antifungal agents from Brazilian flora, eight extracts and twelve fractions from Pterogyne nitens Tul., Fabaceae, were screened for antimicrobial activity against four opportunistic fungi species (Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis and Cryptococcus neoformans) using a broth microdilution method. The present investigation reveals that P. nitens extracts and fractions were more effective against C. krusei and C. parapsilosis than against C. neoformans. The growth of C. albicans was moderately affected by all tested extracts and fractions. The strongest effects were observed for n-butanol fractions from branches (MIC = 15.6 μg/mL) and roots (MIC = 31.2 μg/mL) against C. krusei. Additionally, the chromatographic fractionation of the n-butanol fraction from branches afforded four guanidine alkaloids; N-1,N-2,N-3-triisopentenylguanidine (1), described for the first time in the Fabaceae family, and nitensidines A-C (2-4), which showed moderate activity towards C. krusei (MIC = 62.5 μg/mL) and C. parapsilosis (MIC = 31.2 μg/mL).
No contexto de nossas pesquisas por novos agentes antifúngicos obtidos da flora brasileira, oito extratos e doze frações de Pterogyne nitens Tul., Fabaceae, foram submetidos ao ensaio antifúngico pelo método de microdiluição, contra quatro espécies de fungos oportunistas, Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis e Cryptococcus neoformans. Este trabalho revelou que os extratos e frações de P. nitens foram mais ativos contra C. krusei e C. parapsilosis quando comparados a C. neoformans, sendo que o crescimento de C. albicans foi moderadamente afetado por todos os extratos e frações. As atividades mais potentes foram observadas para as frações n-butanólica dos galhos (CIM = 15,6 μg/mL) e raízes (CIM = 31,2 μg/mL) contra C. krusei. Adicionalmente, a fração n-butanólica dos galhos foi submetida ao fracionamento cromatográfico, resultando no isolamento de quatro alcaloides guanidínicos, sendo N-1,N-2,N-3-tri-isopentenilguanidina (1), descrito pela primeira vez em espécies da família Fabaceae e nitensidinas A-C (2-4), os quais apresentaram atividade antifúngica moderada contra C. krusei (CIM = 62,5 μg/mL) e C. parapsilosis (CIM = 31,2 μg/mL).
RESUMEN
Trichosporon asahii is an opportunistic pathogen, associated with a high mortality rate in immunocompromised patients. In this study, ten isolates, recovered from oral cavity and urine of patients in Intensive Care Units (ICU) over six months, were identified by classical and molecular methods, typed by RAPD and tested in vitro for susceptibility to fluconazole, itraconazole, 5-flucytosine and amphotericin B. A total agreement between the identification of Trichosporon sp by PCR based on sequences of the Internal Transcribed Spacer Regions (ITS) and on the sequences of small-subunit (SSU) ribosomal DNA (rDNA) was found. Randomly amplified of polymorphic DNA (RAPD), with primers P6 and M13, was used to determine the genomic profiles. The dendogram analysis indicated that almost all strains showed similarity >0.9 among them and all strains were multidrug-resistant. This study brings new results on the identification and genotyping of T. asahii isolated from Brazilian ICU patients and information about their antifungal drugs susceptibility.
Trichosporon asahii é um patógeno oportunista que apresenta altos índices de mortalidade em pacientes imunocomprometidos. No presente trabalho, dez cepas foram isoladas da cavidade bucal e urina de pacientes internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) por seis meses. Todos os isolados foram identificados por métodos clássicos e moleculares, tipados por RAPD e testados in vitro quanto à sensibilidade ao fluconazol, itraconazol, 5-fluorocitosina e anfotericina B. Houve concordância total entre a identificação de Trichosporon sp por PCR baseado na seqüência da região ITS (Internal Transcribed Spacer) e na seqüência da subunidade menor do DNA ribossômico (rDNA). Os perfis genéticos foram determinados por RAPD utilizando dois iniciadores P6 e M13. A análise do dendrograma mostrou que a maioria das amostras apresentou alta similaridade entre elas (>0.9) e todas foram multidrogas resistentes. Este estudo traz novos resultados em relação à identificação e genotipagem de isolados brasileiros de T. asahii em pacientes internados em UTI, bem como dados sobre o perfil de sensibilidade aos antifúngicos.
Asunto(s)
Humanos , Antifúngicos , Secuencia de Bases , Predisposición Genética a la Enfermedad , Técnicas In Vitro , Reacción en Cadena de la Polimerasa , Técnica del ADN Polimorfo Amplificado Aleatorio , Trichosporon/aislamiento & purificación , Variación Genética , Métodos , MortalidadRESUMEN
Methodology for testing natural compounds for determination of antifungal activity had been developed with adaptations. The most used are bioautography and agar diffusion with a complex and no defined media. In this study, different methods for determination of antifungal activity of natural products are discussed and the use of M27-A2 microdilution test from CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute, 2002), as general standard methodology for testing plant extracts activity is recommended.
Metodologias para determinar atividade antifúngica foram desenvolvidas com adaptações para avaliar produtos naturais. As mais usadas são bioautografia e o método de difusão em agar, que empregam meios de cultura complexos, não definidos. Neste estudo são discutidos os métodos para determinação de atividade antifúngica de produtos naturais e é recomendado o uso do micrométodo modificado segundo o documento M27A2 do CLSI.