RESUMEN
Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT-Cloning) is a promising technique in many areas and is based on genetically identical individuals. However, its efficiency is low. Studies suggest that the leading cause is inadequate epigenetic reprogramming. This study aimed to characterize the methylation pattern of the exon 10 regions of the IGF2 gene and the Imprinting Control Region (ICR) of the H19 gene in the placenta of cloned calves. For this study, female and male cloned calves presenting different phenotypes were used. Genomic DNA from these animals' placenta was isolated, then treated with sodium bisulfite and amplified to the ICR/H19 and IGF2 loci. PCR products were cloned into competent bacteria and finally sequenced. A significant difference was found between controls and clones with healthy phenotypes for the ICR/H19 region. In this region, controls showed a hemimethylated pattern, as predicted in the literature due to this region has an imprinted control, while clones were showed less methylated. For the IGF2, no significant differences were found between controls and clones. These results suggest that different genomic regions in the genome may be independently reprogrammed and that failures in reprogramming the DNA methylation patterns of imprinted genes may be one of the causes of the low efficiency of SCNT.(AU)
A Transferência Nuclear de Células Somáticas (TNCS-Clonagem) é uma técnica promissora em várias áreas, e se baseia na produção de indivíduos geneticamente idênticos. No entanto, sua eficiência é baixa. Estudos sugerem que a principal causa seja uma reprogramação epigenética inadequada. O objetivo desse trabalho é caracterizar o padrão de metilação da região éxon 10 do gene IGF2 e da Região Controladora de Imprinting (ICR) do gene H19 na placenta de bezerros clonados. Para a execução do trabalho foram selecionados clones bovinos fêmeas e machos, apresentando diferentes fenótipos. O DNA da placenta desses animais foi extraído, e em seguida foi tratado com bissulfito de sódio e amplificado para os loci ICR/H19 e IGF2. Os produtos da PCR foram clonados em bactérias competentes e, por fim, sequenciados. Foi encontrada uma diferença significativa entre os controles e os clones com fenótipos saudáveis para a região da ICR/H19. Nesta região, os controles tiveram um padrão hemimetilado, como previsto pela literatura, devido essa região ser imprinted. Enquanto os clones encontravam-se menos metilados. Para a região do éxon 10 do IGF2, não foi encontrada diferença significativa entre controles e clones. Estes resultados sugerem que as diferentes regiões do genoma podem se reprogramar independente umas das outras e que falhas na reprogramação do padrão de metilação do DNA de genes imprinted podem ser uma das causas da baixa eficiência da TNCS.(AU)
Asunto(s)
Animales , Bovinos , Placenta , Bovinos/genética , Células Clonales , Epigenómica , Factor II del Crecimiento Similar a la Insulina/análisis , Metilación de ADNRESUMEN
This paper reports the sequence analysis of Bm86 Campo Grande strain comparing it with Bm86 and Bm95 antigens from the preparations TickGardPLUS and GavacTM, respectively. The PCR product was cloned into pMOSBlue and sequenced. The secondary structure prediction tool PSIPRED was used to calculate alpha helices and beta strand contents of the predicted polypeptide. The hydrophobicity profile was calculated using the algorithms from the Hopp and Woods method, in addition to identification of potential MHC class-I binding regions in the antigens. Pair-wise alignment revealed that the similarity between Bm86 Campo Grande strain and Bm86 is 0.2 percent higher than that between Bm86 Campo Grande strain and Bm95 antigens. The identities were 96.5 percent and 96.3 percent respectively. Major suggestive differences in hydrophobicity were predicted among the sequences in two specific regions.
O objetivo deste estudo foi analisar a seqüência de Bm86 cepa Campo Grande comparando-a com os antígenos Bm86 e Bm95 das preparações TickGardPLUS e GavacTM, respectivamente. O produto de PCR foi clonado em PMOSBlue e seqüenciado. Para calcular os conteúdos de alfa-hélice e fita beta do polipeptídio previsto, foi utilizada a ferramenta de prognóstico de estrutura secundária PSIPRED. O perfil de hidrofobicidade foi calculado usando os algoritmos de Hopp e Woods, além da identificação das possíveis regiões de ligação com MHC classe I nos antígenos. O alinhamento "pair-wise" revelou que a similaridade entre Bm86 cepa Campo Grande e Bm86 é 0,2 por cento maior que aquela entre Bm86 cepa Campo Grande e Bm95. As identidades foram de 96,5 por cento e 96,3 por cento, respectivamente. Com relação à hidrofobicidade, os resultados sugerem que a maior diferença entre as seqüências está localizada em duas regiões específicas.
Asunto(s)
Animales , Antígenos/genética , Antígenos/inmunología , Glicoproteínas de Membrana/genética , Glicoproteínas de Membrana/inmunología , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/inmunología , Rhipicephalus/genética , Rhipicephalus/inmunología , Vacunas/genética , Vacunas/inmunología , Sitios de Unión de Anticuerpos , Análisis de Secuencia de ProteínaRESUMEN
The protease inhibitor system (PI) was investigated to ascertain if it can be used as a marker of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) in thoroughbred horses. Serum samples were taken from healthy thoroughbreds (n = 13) and those diagnosed as having COPD (n = 24) or inflammatory airway disease (IAD, n = 38) as well as from 3,600 undiagnosed thoroughbred horses. PI allelic and genotypic frequencies were estimated using protein electrophoresis on starch and polyacrylamide gels. The four groups of horses showed high genotypic similarity and none of the observed alleles or genotypes of the equine PI system were found to be associated with COPD.