RESUMEN
A utilização de fungicidas azólicos pode estar ligada a resistência aos fármacos utilizados no tratamento da aspergilose invasiva. Em cepas de Aspergillus fumigatus, foram descritas mutações no gene cyp51A resultando em menor afinidade azol-alvo e resistência antifúngica. Mecanismos de resistência aos triazóis já foram descritos em isolados ambientais de áreas agrícolas e em pacientes sob tratamento. A similaridade dos compostos azólicos, clínicos e agrícolas, e o mesmo mecanismo de ação na célula fúngica podem contribuir para a seleção de cepas com resistência cruzada no hospedeiro e no meio ambiente. O gene cyp51A codifica a enzima-chave na produção de ergosterol da membrana celular-14ï¡-demetilase, alvo de todos os compostos azólicos. Mutações no gene cyp51A resultam na produção de enzima com alterações em sua conformação tridimensional levando à menor afinidade azol-alvo e resistência antifúngica. A indução de tais mutações foi atribuída à exposição extensiva das cepas ambientais a agrotóxicos fungicidas triazólicos. Estudos em diversos países sugerem que esses produtos exercem pressão seletiva em fenótipos resistentes de A. fumigatus O objetivo deste estudo foi avaliar a hipótese da origem ambiental de mecanismos de resistência a triazólicos, em 2 isolados clínicos e 2 ambientais de A. fumigatus, modulada pela exposição a um fungicida agrícola. Modelo de horta experimental, parte orgânica e parte exposta a agrotóxico triazólico, foi construída e inoculada com os 4 isolados, todos selvagens não mutantes de A. fumigatus. Ao longo de um ano, 11 pulverizações e recuperações mensais dos 4 isolados a partir de amostras de solo permitiram monitorar possível emergência de resistência aos triazólicos: difenoconazol, metconazol, tebuconazol, itraconazol, voriconazol e posaconazol. A busca da resistência foi feita pela determinação de MIC, tanto de fungicidas quanto de fármacos triazólicos e pesquisa de mutações gênicas no gene cyp51A e sua região promotora. O gene cyp51A sequenciado para um desses isolados não apresentou mutações. Conclui-se que a pulverização de difenoconazol não resultou em alteração de MIC de triazóis nas cepas expostas indicando que não houve seleção de fenótipos resistentes. Outra possibilidade é que, de fato, o tempo de exposição, ou volume/concentração de fungicida não foram suficientes para pressão seletiva. (AU)
Clinical resistance to triazoles, drugs used for invasive aspergillosis, is a growing problem and its relationship with environmental issues is under discussion. The triazolics are also used to control phytopathogenic fungi and the same problem of increasing resistance is present. The relationship between resistance in clinical and environmental strains is based on the same mode of action of the compounds, so that exposure to one triazole compound may select another resistant strain, characterizing "crossresistance". In environmental strains of the main etiological agent of aspergillosis-Aspergillus fumigatus, classified as azole resistant, mutations associated with the cyp51A gene have been described. This gene encodes the key enzyme in the production of cell membrane ergosterol-14-demethylase, target of all azole compounds. Mutations in the cyp51A gene result in enzyme production with changes in its three-dimensional conformation leading to lower target azole affinity and antifungal resistance. The induction of such mutations was attributed to the extensive exposure of environmental strains to triazole fungicide pesticides. Studies in several countries suggest that these products exert selective pressure on resistant A. fumigatus phenotypes. The objective of this study was to evaluate the hypothesis of the environmental origin of triazole resistance mechanisms in 2 clinical isolates and 2 environmental isolates of A. fumigatus, modulated by exposure to an agricultural fungicide. Experimental garden model, organic part and part exposed to triazolic pesticide, was built and inoculated with the 4 isolates, all non-mutant wild A. fumigatus. Over a year, 11 sprayings and monthly recoveries of the 4 isolates from soil samples allowed monitoring of possible emergence of resistance to triazoles: difenoconazole, metconazole, tebuconazole, itraconazole, voriconazole and posaconazole. The search for resistance was made by the search for gene mutations that, so far, has not been found. MIC determination of both fungicides and triazole drugs against isolates, exposed and recovered by the 5th month. The cyp51A gene sequenced for one of these isolates showed no mutations. By microsatellite technique, the same isolate was not similar to the seeded isolate. It was concluded that difenoconazole spraying did not result in alteration of triazole MIC in the exposed strains indicating that there was no selection of resistant phenotypes. On the other hand, it was not possible to correlate the inoculated strain with the recovered strain and evaluated for MIC. Therefore, other recovered strains should be compared to inoculated strains for more grounded conclusion. Another possibility is that, in fact, exposure time, or fungicide volume / concentration was not sufficient for selective pressure. (AU)