Genetic structure of Latin American Aedes aegypti / Estructura genética de Aedes aegypti latinoamericano

The mosquito Aedes aegypti is the main Dengue vector in Latin America. This study investigated the genetic structure of this vector using samples collected in Venezuela, Colombia, Peru, Mexico, Argentina, Puerto Rico, and French Guiana. We examined the distribution of a 246-basepair region of the NADH dehydrogenase subunit 4 mitochondrial gene among a total of 369 Ae. aegypti from all the populations. This gene was amplified by the polymerase chain reaction and tested for variation using single strand conformation polymorphism analysis. Twelve haplotypes were detected among all the countries sampled and grouped into two clades. Significant differentiation was detected among the populations studied and these were not genetically isolated by distance.

El mosquito Aedes aegypti es el principal vector del Dengue en los países latinoamericanos. En este estudio se investigó la estructura genética de este vector en muestras colectadas en Venezuela, Colombia, Perú, Mexico, Argentina, Puerto Rico y Guyana Francesa. Nosotros examinamos la distribución de una región de 246 pares de bases del gen mitochondrial de la subunidad 4 de la NADH deshidrogenasa entre un total de 369 Ae. aegypti de todas las poblaciones. Este gen fue amplificado por la reacción en cadena de la polimerasa y la variación se determinó usando el análisis de polimorfismos de conformación de cadena simple. Doce haplotipos se detectaron entre todos los países y se repartieron en dos clados. Una diferenciación significativa se detectó entre las poblaciones y estas no se encontraron genéticamente aisladas por distancia.

Persistencia en la competencia vectorial de Aedes albopictus de Venezuela a una cepa asiática dengue 2 / Vector competence persistance of Venezuelan Aedes albopictus for an Asian dengue-2 strain

En Venezuela, existen poblaciones de Aedes aegypti (Ae. aegypti) de diferente origen geográfico y estructura genética que difieren en la competencia vectorial para el virus dengue. Debido a que, recientemente, se reportó la presencia de Aedes albopictus (Ae. albopictus), es importante también conocer la competencia vectorial de esta especie para prever el riesgo epidemiológico el cual conlleva a su propagación. Se determinó la persistencia en la competencia vectorial de Ae. albopictus de Maracay, Venezuela a una cepa asiática dengue 2. Las especies de mosquitos Ae. albopictus y Ae. aegypti fueron alimentadas con una suspensión sangre-virus dengue 2 y luego de 20 días post-exposición viral se determinó la presencia del virus por el ensayo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en las diferentes partes de los insectos: abdomen (infección), patas/alas (diseminación) y cabeza (transmisión). Los resultados muestran que la cepa Ae. aegypti es más susceptible a la infección del abdomen (60 %) que la cepa de Ae. albopictus (37,5%); sin embargo, sólo en Ae. albopictus se encontró el virus presente en las patas/alas (100%) y cabezas (33%). La cepa de Ae. albopictus estudiada podría ser más competente para la transmisión del virus dengue asiático que la de Ae. aegypti. Este hallazgo es de gran importancia epidemiológica, ya que se demuestra que este vector aún no estando en su continente de origen, puede seguir siendo un vector eficiente y con el tiempo adecuarse a las cepas virales propias.

In Venezuela, there are populations of Aedes aegypti (Ae. aegypti) with different geographic origins and genetic structure that differ in vector competence for dengue virus. Since recently, the presence of Aedes albopictus (Ae. albopictus) was reported, it is also important to know the vector competence of this species to predict the epidemiological risk which would bring its spread. The objective was to determine the vector competence persistance of Ae. albopictus from Maracay, Venezuela for an Asian dengue-2 strain. The two species of mosquitoes were fed with a blood-dengue 2 virus suspension and after 20 days post-exposure to virus, the presence of the virus was determined by the polymerase chain reaction assay in different parts of the insect: abdomen (infection), legs/wings (spread) and head (transmission).The results show that the strain Ae. aegypti is more susceptible to infection in the abdomen (60 %) that the strain of Ae. albopictus (37.5%); however, only in Ae. albopictus this virus was found in the legs /wings (100%) and heads (33%). The studied strain of Ae. albopictus may be more competent vector in the transmission of the dengue 2 virus than Ae. aegypti. This finding is of great epidemiological importance as this shows that even this mosquito not being in its continent of origin, it can still be an efficient vector and eventually become adapted to the native viral strains.

Asociación entre presencia del virus del papiloma humano y hallazgos anatomo-patológicos / Association between the presence of human papilloma virus and pathological findings

OBJETIVO: Determinar por reacción en cadena de la polimerasa la presencia del virus del papiloma humano en pacientes femeninas, quienes acudieron a un tamizaje de lesiones en cuello uterino en la red ambulatoria del Municipio Francisco Linares Alcántara (Edo. Aragua) y asociar la presencia de virus del papiloma humano con hallazgos anatomo-patológicos. MÉTODOS: Luego de obtener el consentimiento informado se tomó una muestra de hisopado vaginal a 301 pacientes, a quienes se les realizó citología y colposcopia. Se aisló ADN para la genotipificación mediante ensayos de reacción en cadena de la polimerasa acoplados a digestión con enzimas de restricción. Se efectuaron pruebas estadísticas para analizar la relación entre la presencia de virus del papiloma humano y las variables: edad, inicio de relaciones sexuales, número de parejas sexuales y hallazgos citológicos y colposcópicos. RESULTADOS: Se obtuvieron 43 muestras positivas para virus del papiloma humano 17 fueron 16 (39,53.%), 3 virus del papiloma humano 18 (6,98 %), 1 virus del papiloma humano 33 (2,33 %), 14 muestras presentaron coinfección (32,56 %) y en 8 muestras (18,60 %) no ocurrió digestión con las enzimas utilizadas. Existen relaciones estadísticas significativas entre la presencia de virus del papiloma humano y las variables analizadas. CONCLUSIÓN: La presencia de genotipos de alto riesgo en el 48,84 % de las pacientes con virus del papiloma humano, es una situación preocupante, dada la vinculación de dichos genotipos al desarrollo de cáncer de cuello uterino

OBJECTIVE: To determine by Polymerase Chain Reaction the presence of the human papillomavirus in female patients attending a screening for lesions of uterine neck in the outpatient network of Francisco Linares Alcantara Municipality and to relate the results to anatomopathological findings. METHODS: After obtaining informed consent from patients, samples of vaginal swabs were taken from 301 women that were used for cytology and colposcopy studies. Also, DNAs were isolated and they were used for Polymerase Chain Reaction test coupled to restriction enzyme digestion. Statistical tests were performed to analyze the relationship between the human papillomavirus positivity and the variables: stratus age, the onset of sexual activity, number of sexual couple, cytology and colposcopy findings. RESULTS: Out of 43 human papillomavirus positive samples, 17 (39.53 %) were genotype 16, 3 (6.98 %) genotype 18 and 1 (12.33.%) genotype 33; 14 (32.56 %) samples showed coinfection and 8 (18.60 %), samples were not digested with the restriction enzymes used. The relationship between the presence of human papillomavirus and the others studied variables (stratus age, the onset of sexual activity, number of sexual couple and cytological results) was statistically significant. CONCLUSIONS: The presence of human papillomavirus genotypes, of so-called high risk in the 48.84 % of the women with a positive HPV test is a particular concern, because they are associated with the development of cervical cancer.

Infección Congénita por Citomegalovirus en neonatos pretérmino: Hospital Central de Maracay; marzo-julio, 2012 / Congenital Citomegalovirus Infection in preterm infants: Hospital Central de Maracay. March-july 2012

Citomegalovirus, virus ADN bicatenario, de la familia Hepesviridae es capaz de ocasionar infecciones agudas o crónicas en el ser humano, invade a sus víctimas, aprovechándose principalmente de los menos inmunocompetentes quienes sufren mayor daño, especialmente los neonatos. Es de vital importancia su diagnóstico en la mujer de edad fértil, por su prevalencia y riesgo de transmisión vertical durante el embarazo, causando infección congénita que varía de 0.2 a 2.2% de todos los nacidos vivos, pudiendo ocasionar secuelas graves. El objetivo de esta investigación fue conocer la incidencia de infección congénita por Citomegalovirus en neonatos pretérmino y/o de bajo peso en el Hospital Central de Maracay en el período Marzo-Julio 2012, amplificando y detectando el ADN viral por reacción en cadena de polimerasa en muestras sanguíneas. Se estudiaron 106 neonatos menores de 1 semana de edad, siguiendo las normas bioéticas, se registraron sus antecedentes y se les tomó una muestra de sangre completa (1 mL) con anticoagulante. De las muestras procesadas se obtuvo 1 muestra positiva, mostrando incidencia de 0.9%. El neonato infectado, presentó sintomatología respiratoria producto de prematuréz, obtenido por cesárea a causa de ruptura prematura de membranas y procidencia de cordón. La incidencia de infección por Citomegalovirus en neonatos en el Hospital Central de Maracay, está dentro del rango encontrado en otros países, el paciente positivo se considera asintomático para Citomegalovirus tal como lo demuestra la literatura, un 90% de los casos nacen sin clínica evidente.

Citomegalovirus, double-stranded DNA virus, from the Herpesviridae family, can cause acute or chronic infections in humans, it invades his victims, mainly taking advantage of the less immunocompetent ones, suffering most damage, especially the newborn. It is vital to the diagnosis in women of childbearing age, because of its prevalence and the risk of vertical transmission during pregnancy, causing congenital infection ranging from 0.2 to 2.2% of all live births and can cause serious sequelae. The objective of this investigation was to know the incidence of citomegalovirus congenital infection in preterm newborns and / or low weight at the Maracay Central Hospital in the period March-July 2012, amplifying and detecting the viral DNA by polymerase chain reaction in blood. 106 newborns being less than one week old were studied, following bioethical standards, their background were registrated, and was taken a blood sample from them (1 mL). from the processed samples, one tested positive, showing an incidence of 0.9%. The infected newborn presented respiratory symptoms caused by the premature state, it was carried out by cesarean section caused by the rupture of the membranes and the prolapsed corde. The incidence of citomegalovirus infection in newborn at the Maracay Central Hospital, is within the range found in other countries, the positive case is considerate asymptomatic for citomegalovirus. as evidenced on text books, 90% of cases are born without clinical evidence.

Tipos del virus dengue identificados en pacientes del Centro Médico Dr. Rafael Guerra Méndez, Valencia, Estado Carabobo, Venezuela / Dengue virus types identified in patients attended at Medical Center Dr. Rafael Guerra Méndez, Valencia, Carabobo, Venezuela

En esta investigación se llevó a cabo un estudio descriptivo de 114 muestras serológicas de pacientes con sospecha clínica de dengue, según criterios establecidos por la Organización Mundial para la Salud (OMS), que se recibieron durante el mes de junio de 2010 en el Centro Médico Dr. Rafael Guerra Méndez, de la ciudad de Valencia, Estado Carabobo. Las muestras se trasladaron al Instituto de Investigaciones Biomédicas de la Universidad de Carabobo (BIOMED-UC) y se analizaron por la técnica de RT-PCR anidada. Los resultados indicaron positividad en 46 muestras y la presencia de los 4 tipos del virus dengue. Los tipos detectados con mayor frecuencia fueron DEN-4 (34,8%), seguido por el DEN-3 (32,6%), sobre todo en niños ≤ 12 años que representaron el 54% del total de las muestras.

This research conducted a descriptive study of 114 serum samples from patients with clinical suspicion of dengue, according to criteria established by the World Health Organization (WHO) who were received during the month of June 2010 at the Medical Center Dr. Rafael Guerra Mendez in the city of Valencia, Carabobo State. Samples were transported to the Institute of Biomedical Research of the University of Carabobo (BIOMED-UC) and analyzed by RT-nested PCR. The results showed positivity in 46 samples and the presence of the 4 types of dengue virus. The most frequently detected types were DEN-4 (34.8%), followed by DEN-3 (32.6%) which were, especially in children ≤ 12 years and accounted for 54% of total samples.

Cuantificación relativa de genes relacionados con la respuesta inmune antiviral en una población venezolana de Aedes (stegomyia) aegypti / Relative quantification of Antiviral immune response related genes in an Aedes (stemgoyia) aegypti Venezuelan population

El virus DENV-3 es el responsable del segundo mayor porcentaje de afecciones hemorrágicas severas causadas por este virus, solo superado por el virus DENV-2. La virulencia de este serotipo, causante de brotes epidémicos a gran escala en países como Venezuela donde circula activamente durante todo el año, es la razón principal del desarrollo investigativo en el campo de las interacciones virus-vector en la búsqueda de un control epidémico efectivo. En el presente trabajo, se evaluó la expresión de dos genes, RNAi (dcr-2 y ago-2), que codifican para proteínas de respuesta antiviral en mosquitos con la finalidad de estudiar el cambio en la expresión de los mismos en el vector una vez infectado con el DENV-3. Para ello, se infectó artificialmente una población de Aedes (stegomyia) aegypti de Trujillo, elaborándose dos grupos experimentales (15dpi y 20dpi) y un control; posteriormente se aisló, cuantificó y se realizó transcripción reversa al RNA total aislado de los grupos. La infección en los grupos experimentales se evidenció por la detección de bandas de productos de PCR de 511pb para DENV y 290pb para DENV-3 mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%, y se realizó la cuantificación relativa de la expresión genética por PCR en tiempo real. Como resultado, la expresión de los genes no presentó cambios con respecto a los mosquitos no infectados (grupo control) (p<0.05). Estos resultados indican que el virus DENV-3 pudiera estar mostrando mecanismos de evasión sobre las vías de RNAi dentro del cuerpo del vector, y esto puede estar relacionado al hecho de que la replicación de los miembros del genero Flavivirus, entre ellos el DENV, se lleva a cabo en el sistema de membranas y vesículas, lo que les permite evadir el encuentro en el citoplasma con las proteínas asociadas al complejo de RNAi.

DENV-3 is the responsible for the second major percentage of hemorrhagic severe affections caused by this virus, only overcome by DENV-2. The virulence of this serotype is the cause of broad scale fever outbreaks in different countries, especially in Venezuela where it circulates actively throughout the year. This is the main reason of investigative developments in the virus-vector interactions field to find an effective epidemic control. In this study, we evaluated the expression of dcr-2 and ago-2, two RNAi antiviral pathway genes in mosquitoes to study the fold change in the expression of these genes in the mosquito vector Aedes (stegomyia) aegypti infected with DENV-3. We artificially infected a population of mosquitoes from Trujillo state (Venezuela) and prepared three (3) experimental groups (15dpi, 20dpi and a control group). Later, we isolated, quantified and applied a reverse transcription to the total RNA obtained of mosquitoes and the infection in the experimental groups was detected performing a 2% agarose gel electrophoresis of the PCR products of the total RNA (511bp for DENV and 290bp for DENV3). In addition, the infection in the experimental groups was confirmed by the detection of PCR products. The fold change in dcr-2 and ago-2 expression genes was quantify by Real Time PCR. As results, the fold change expression in the ago-2 and dcr-2 were equal to the non-infected mosquitoes “control group” (p<0.05). These results indicate that DENV-3 could have evasion mechanisms of RNAi pathway inside vector’s body, and this can be related to the fact that dengue virus replication is accomplished in the vesicle system and membrane system as well (endoplasmic reticulum and golgi complex) avoiding cytoplasmic encounter with the RNAi pathway proteins.