Detection of toxigenic Clostridioides --#1;Clostridium--#3; difficile: Usefulness of two commercially available enzyme immunoassays and a PCR assay on stool samples and stool isolates / Detección de Clostridioides --#1;Clostridium--#3; difficile toxigénico: utilidad de dos métodos de enzimoinmunoensayo comerciales y una PCR en las muestras de materia fecal y en los respectivos aislamientos

The best laboratory diagnostic approach to detect Clostridioides --#1;Clostridium--#3; difficile infection (CDI) is a subject of ongoing debate. With the aim of evaluating four laboratory diagnostic methods, 250 unformed stools from patients with suspected CDI submitted to nine medical center laboratories from November 2010 to December 2011, were studied using: (1) an immunochromatographic rapid assay test that combines the qualitative determination of glutamate dehydrogenase (GDH) plus toxins A and B (QAB), the CDIFF QUIK CHEK COMPLETE assay; (2) an enzyme immunoassay for qualitative determination of toxins A and B, the RIDASCREENTC. difficile Toxin A/B assay (RAB); (3) a PCR for the toxin B gene assay (PCR); and (4) the toxigenic culture (TC).C. difficile isolates from direct toxin negative stools by QAB, RAB and PCR were evaluated for toxigenicity by the same direct tests, in order to assess the contribution of the TC (QAB-TC, RAB-TC, PCR-TC). A combination of the cell culture cytotoxicity neutralization assay (CCCNA) in stools, and the same assay on isolates from direct negative samples (CCCNA-TC) was considered the reference method (CCCNA/CCCNA-TC). Of the 250 stools tested, 107 (42.8%) were positive by CCCNA/CCCNA-TC. The GDH and PCR/PCR-TC assays were the most sensitive, 91.59% and 87.62%, respectively. The QAB, RAB, QAB/QAB-TC and RAB/RAB-TC had the highest specificities, ca. 95%. A negative GDH result would rule out CDI, however, its low positive likelihood ratio (PLR) of 3.97 indicates that a positive result should always be complemented with the detection of toxins. If the RAB, QAB, and PCR assays do not detect toxins from direct feces, the toxigenic culture should be performed. In view of our results, the most accurate and reliable methods to be applied in a clinical microbiology laboratory were the QAB/QAB-TC, and RAB/RAB-TC, with PLRs >10 and negative likelihood ratios <0.30.

El mejor procedimiento para realizar el diagnóstico de laboratorio de la infección causada por Clostridioides --#1;Clostridium--#3; difficile (ICD) es aún objeto de debate. Con el fin de evaluar cuatro métodos diagnósticos de laboratorio, se estudiaron 250 muestras de heces diarreicas provenientes de pacientes con sospecha de ICD remitidas a los laboratorios de nueve centros médicos entre noviembre de 2010 y diciembre de 2011. Dichas muestras se analizaron mediante los siguientes métodos:1) un ensayo rápido inmunocromatográfico que combina la detección cualitativa de la glutamato deshidrogenasa (GDH) y de las toxinas Ay B (QAB), CDIFF QUIK CHEK COMPLETE;2) un enzimoinmunoanálisis para la determinación cualitativa de las toxinas A/B, RIDASCREENTC. difficile Toxin A/B (RAB);3) un método molecular basado en PCR para la detección del gen que codifica la toxina B (PCR) y 4) el cultivo toxigénico (TC). Como método de referencia se utilizó la combinación del ensayo de citotoxicidad sobre cultivo de células con la neutralización de toxina mediante anticuerpo específico en los filtrados de las heces (CCCNA) y el mismo método en sobrenadantes de aislamientos de C. difficile (CCCNA-TC). La toxigenicidad de las cepas aisladas de muestras directas negativas con QAB, RAB y PCR se evaluó con los mismos métodos, con el propósito de detectar la contribución del TC (QAB-TC, RAB-TC, PCR-TC). De las 250 muestras estudiadas, 107 (42,8%) fueron positivas por CCCNA/CCCNA-TC. Los métodos GDH y PCR/PCR-TC fueron los más sensibles: 91,59 y 87,62%, respectivamente. Los métodos QAB, RAB, QAB/QAB-TC y RAB/RAB-TC mostraron las mayores especificidades, del 95%, aproximadamente. Un resultado negativo para GDH excluiría la ICD, pero su baja razón de verosimilitud positiva (PLR), que fue 3,97, indica que un resultado positivo debe complementarse con la detección de toxinas. Cuando no se detectan toxinas directas por RAB, QAB ni PCR, debería realizarse el TC. De acuerdo con nuestros resultados, los métodos más precisos y confiables para ser aplicados en un laboratorio de microbiología clínica son QAB/QAB-TC y RAB/RAB-TC, con una PLR> 10 y una razón de verosimilitud negativa < 0,30.

Anaerobiospirillum succiniciproducens y Desulfovibrio desulfuricans en 2 casos de bacteriemias insidiosas / Anaerobiospirillum succiniciproducens and Desulfovibrio desulfuricans in 2 cases of insidious bacteremia

Se presentan 2 casos de bacteriemias insidiosas por bacilos gram negativos anaerobios curvos, espiralados, móviles e infrecuentes en pacientes atendidos en un hospital de la ciudad de Buenos Aires. Estas bacteriemias, asociadas al aislamiento de Anaerobiospirillum y Desulfovibrio, fueron de origen poco claro y afectaron a pacientes inmunocomprometidos, con patologías simultáneas. Pruebas claves en la identificación del género Anaerobiospirillum fueron el estudio de la micromorfología, su carácter de anaerobio estricto, el resultado negativo en la prueba de catalasa, el patrón de discos de interés taxonómico, la fermentación de glucosa y la producción de β-N-acetilglucosaminidasa. El género Desulfovibrio se diferenció por el perfil presentado en las pruebas con discos, por ser asacarolítico, sin actividad de enzimas glucosídicas, y por producir desulfoviridina y H2S. Se alerta sobre la resistencia o sensibilidad intermedia de Anaerobiospirillum succiniciproducens (especie a la que correspondió el aislado de Anaerobiospirillum) a algunos de los antimicrobianos de primera línea frente a bacilos gram negativos anaerobios, como el metronidazol; fueron activas las combinaciones de aminopenicilinas con inhibidores de β-lactamasas y el imipenem. Desulfovibrio desulfuricans (especie a la que correspondió el aislado de Desulfovibrio) fue productora de β-lactamasas y resistente a las cefalosporinas; en cambio, fueron activos el metronidazol, el imipenem y la levofloxacina. La identificación confiable de estos microorganismos orienta hacia el mejor esquema terapéutico.

Two cases of insidious bacteremia by uncommon curve and spiral-shaped, motile anaerobic gram-negative rods are presented. Both of them were of an unclear origin and occurred in immunosuppressed patients with simultaneous diseases. The key tests for the identification of Anaerobiospirillum were its micromorphology, a strictly anaerobic condition, negative catalase activity, the special-potency disk profile, glucose fermentation, and β-NAG production. Desulfovibrio species was identified by all the above preliminary tests but with a different disk profile, as well as for being asaccharolytic and desulfoviridin and H2S producer. We here alert about the resistance or intermediate susceptibility of Anaerobiospirillum succiniciproducens against antimicrobial agents, such as metronidazole, one of the first-line drugs used for the treatment of anaerobic gram-negative infections. Aminopenicillins with β-lactamase-inhibitor combinations and imipenem were active for this agent. Desulfovibrio desulfuricans was β-lactamase producer and resistant to cephalosporins, while metronidazole, imipenem and levofloxacin were active. A reliable identification of these microorganisms is important for establishing the best therapeutic scheme.