SARS-CoV-2 diagnostic diary: from rumors to the first case. Early reports of molecular tests from the military research and diagnostic institute of Rio de Janeiro

Corona virus disease (COVID-19) presents a serious threat to global health. A historical timeline of early molecular diagnostics from government alert (January 22) (D) was presented. After in silico analysis, Brazilian Army Institute of Biology (IBEx-RJ) tested samples in house using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) (fast mode) based on Centers for Disease Control and Prevention (CDC) recommendations. First cases from Brazil, Rio de Janeiro, IBEx, and diagnosis team were reported in D36, D44, D66, and D74 respectively. Therefore, after 1300 tests, we recommend N1/N2 primer sets (CDC) for preliminary and Charité protocol confirmation in case of positive results. Moreover, every professional should be tested before starting work, in addition to weekly tests for everyone involved.

Influência das Quimiocinas na migração dos linfócitos T e na permeabilidade de células endoteliais na infecção pelo vírus Dengue / Influence of chemokines on the migration of T lymphocytes and on the permeability of endothelial cells in the infection by the Dengue virus

Dengue é uma doença causada pelo vírus dengue (DENV) com amplo espectro clínico, variando desde uma infecção assintomática a casos graves, com manifestações hemorrágicas e/ou extravasamento plasmático, que podem levar o paciente ao óbito. Durante a infecção, mediadores pró-inflamatórios, como citocinas e quimiocinas, apresentam papel chave na imunopatogênese da dengue. Dentre esses mediadores, as quimiocinas exercem influência em diversos processos homeostáticos e inflamatórios, atuando na ativação do endotélio vascular e na migração celular. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência das quimiocinas CCL5, CX3CL1 e CXCL10 na alteração da permeabilidade endotelial e na migração de linfócitos T em pacientes infectados com DENV. Soro e células mononucleares do sangue periférico (do inglês PBMC) dos pacientes foram utilizados neste estudo, e obtidas durante as epidemias de 2013 e 2016.

Após a confirmação do diagnóstico laboratorial para dengue, os pacientes foram classificados clinicamente segundo critérios da OMS 2009. Níveis séricos das citocinas TNF-α, IL-1ß e IL-10 e quimiocinas CCL2, CCL5, CXCL8, CXCL10 e CX3CL1 de pacientes foram quantificadas por ELISA e LUMINEX. Para avaliação da permeabilidade endotelial in vitro foi realizado medida da resistência elétrica transendotelial (TEER) em HMVEC-d, através do equipamento Milicell-ERS acoplada a câmara Endohm 6, na presença de soro pré-tratados ou não com anticorpos neutralizantes anti-CCL5, anti-CXCL10 ou anti-CX3CL1. A caracterização do perfil de expressão dos receptores de quimiocinas CCR4, CCR5, CCR7 e CX3CR1 em linfócitos T de pacientes e controles sadios foram realizados por citometria de fluxo. Para avaliação da capacidade in vitro de migração de linfócitos T em câmara transwell foram utilizados os recombinantes TNF+CXCL8/IL-8, CCL5 ou CX3CL1.

Os resultados demonstraram a influência de constituintes presentes no soro de pacientes na alteração da permeabilidade da monocamada de células endoteliais. Essa alteração foi observada com mais frequência nos casos FDSA/Grave comparado aos casos FD e controles sadios. Dentre os mediadores próinflamatórios quantificados, os níveis de CCL5 foram menores em pacientes cujo soro foi capaz de induzir alteração da permeabilidade das HMVEC-d, comparado aos pacientes cujo soro não induziu. O pré-tratamento do soro de pacientes que promoveram a redução do TEER relativo com os anticorpos bloqueadores CCL5 e CX3CL1, levou ao aumento do valor TEER relativo das células HMVEC-d, indicando que, neste grupo de pacientes, existe uma influência das quimiocinas CCL5 e CX3CL1 na manutenção da integridade endotelial. Pacientes FDSA/Grave apresentam maior frequência de linfócitos T CD4 e CD8 expressando CCR5 e CX3CR1 em comparação aos linfócitos T de pacientes FD. Estudo sobre a influência das quimiocinas CCL5 e CX3CL1 na migração de linfócitos T de pacientes indicou que tanto os linfócitos T CD4 como os CD8 de pacientes FDSA/Grave migram mais, independente da presença do estímulo quimiotático, do que os linfócitos T de pacientes FD, provavelmente porque as células dos FDSA/Grave expressam mais a molécula CD49d. Em condições nas quais foram utilizados os recombinantes CCL5 e CX3CL1 como estímulos quimiotáticos, os linfócitos T CD4 e CD8 de pacientes FDSA/Grave foram mais responsivos ao CCL5 e, portanto, migraram mais na presença de CCL5, comparado aos linfócitos T dos pacientes FD. O conjunto desses dados demonstra a influência das quimiocinas CCL5 e CX3CL1 na regulação da integridade endotelial e de CCL5 na migração dos linfócitos T, mais evidenciado nos pacientes FDSA/Grave. (AU)