RA92A recombinant protein as immunogen to protect cattle against tick challenge in Brazil and Uganda

In this study, the recombinant gut protein rRa92A produced in Pichia pastoris yeast cells was used to immunize cattle in two experiments, one in Brazil and the other in Uganda. In both experiments, the animals were intramuscularly (IM) injected with 200 µg of recombinant protein in Brazil on days 0, 30 and 51 and in Uganda on days 0, 30. Blood samples for sera separation were collected from different days in both experiments. These samples were analyzed by ELISAs. In Brazil, ticks collected from the animals during the experimental period were analyzed for biological parameters. At Uganda, blood was collected to assess blood parameters, clinical signs were recorded and adult tick (Rhipicephalus appendiculatus) counts were performed. All animals of the vaccinated groups were shown to produce antibodies, and it was not possible to detect an effect on Rhipicephalus microplus. All the clinical parameters were considered within the normal ranges for both the experimental and control groups in Uganda. Antibody absorbance was elevated after each immunization and remained high until the end of the experiments, remaining low in the control animals. The results of stall test carried out in Brazil using R. microplus tick showed efficacy of 21.95%. The rRa92A immunization trial experiments in Uganda showing a decrease of 55.2% in the number of engorged adult ticks, which was statistically significant (p<0.05). Assessment of the immunogenicity of Ra92A produced in the P. pastoris expression system in bovines is reported for the first time, and the protein acted as a concealed antigen.

Immunogenicity of a Recombinant Gonadotropin-releasing Hormone Associated to the B Subunit of Escherichia coli Heat-labile Enterotoxin Expressed in Pichia pastoris and Escherichia coli Platforms

Abstract Gonadotropin-releasing hormone (GnRH) is one of the main targets for the development of immunocontraceptives vaccines. The aim of this study was to clone and express the recombinant GnRH fused to the B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin (LTB) molecule in Pichia pastoris and Escherichia coli platforms and evaluate their immunogenicity in mice. P. pastoris (pGnRH/LTB) and E. coli (eGnRH/LTB) platforms were able to express GnRH/LTB expected band with ~ 21 kDa. Both constructions were immunogenic in mice. Similar IgG kinetics was observed for both construction when it was used as ELISA antigen respectively, showing significant (p<0.05) IgG levels 5-fold higher than a commercial vaccine and 14-fold higher than the controls. The histological effects of pGnRH/LTB as well as eGnRH/LTB proteins demonstrated a significant effect on the gonads, characterized by atrophy of seminiferous tubules, absence of spermatogenesis and reduction of Leydig cells. Both constructions were able to induce antibodies that block the hormone effect, suggesting the potential of GnRH/LTB, independently of the P. pastoris or E. coli platform used, as a vaccine candidate for immunocontraception.

Staphylococcal slime layers and biofilm from different origins / Slime layer e biofilme de Staphylococcus de diferentes origens

ABSTRACT: The genus Staphylococcus comprises some of the most important pathogenic bacteria for both humans and animals. It is responsible for bovine mastitis and canine otitis, besides being present in the microbiota of animals and as a contaminant in food. Its pathogenesis is related to the formation of capsule and biofilm, which contribute to its infectivity. The objective of this study was to observe the production of slime layer and formation of biofilm, which are related to the resistance to antimicrobial agents and presence of icaA and icaD genes, in 41 isolates of Staphylococcus spp. from different origins, provided by the Universidade Federal de Pelotas (UFPEL), Laboratório Regional de Diagnóstico (LRD). Strains of Staphylococcus spp. were cultivated in Congo red agar for capsule detection. Biofilm formation was detected using the 96-well microplate testing. Antimicrobial susceptibility testing was performed using the plate diffusion method. Part of the analyzed samples produced slime layer (36.6%) and formed biofilm (17.1%). However, six of those that formed biofilms were susceptible to the eight antibiotics tested in the antibiogram. In tests to determine the minimum bactericidal and inhibitory concentrations, gentamicin resistance of biofilm-forming strains was greater than that of non-forming strains. Ampicillin was the least effective antimicrobial drug (51%), followed by tetracycline (71%), neomycin (73%), and erythromycin (73%). Some isolates presented the icaA (6) and icaD (11) genes. Therefore, we suggested that the origin of an isolate can determine its expression of virulence factor and resistance to certain antibiotics.

RESUMO: O gênero Staphylococcus abrange algumas das bactérias patogênicas mais importantes tanto para humanos como para animais. Ele é responsável pela mastite bovina e otite canina, além de estar presente na microbiota de animais e como contaminante em alimentos. Sua patogênese está relacionada à formação de cápsula e biofilme, que contribuem para sua infectividade. O objetivo deste estudo foi observar a produção de slime layer e a formação de biofilme, que estão relacionados à resistência a antibicrobianos e à presença dos genes icaA e icaD, em 41 isolados de Staphylococcus spp. de diferentes origens fornecidos pelo Laboratório Regional de Diagnóstico (LRD) da Universidade Federal de Pelotas (UFPEL). Os isolados de Staphylococcus spp. foram cultivados em ágar vermelho do Congo para detecção de cápsulas. A formação de biofilme foi detectada usando o teste de microplaca com 96 poços. O teste de susceptibilidade antimicrobiana foi realizado usando o método de difusão em placa. Parte das amostras analisadas produziram slime layer (36,6%) e formaram biofilme (17,1%). Entretanto, seis daquelas que formaram biofilmes foram sensíveis aos oito antibióticos testados no antibiograma. Em testes para determinar as concentrações bactericidas e inibitórias mínimas, a resistência à gentamicina de cepas formadoras de biofilme foi maior que aquela das cepas não formadoras. O antimicrobiano menos eficaz foi a ampicilina (51%), seguida por tetraciclina (71%), neomicina (73%) e eritromicina (73%). Alguns isolados apresentaram os genes icaA (6) e icaD (11). Portanto, sugerimos que a origem de um isolado pode determinar sua expressão de fator de virulência e resistência a certos antibióticos.

Analysis of Bm86 conserved epitopes: is a global vaccine against Cattle Tick Rhipicephalus microplus possible? / Análise de epítopos conservados da Bm86: é possível uma vacina global contra Carrapato-do-Boi Rhipicephalus microplus?

Abstract The cattle tick Rhipicephalus microplus causes significant economic losses in agribusiness. Control of this tick is achieved mainly through the application of chemical acaricides, often resulting in contamination of animal food products and of the environment. Another major concern associated with acaricide use is the increasing reports of resistance of this tick vector against the active ingredients of many commercial products. An alternative control method is vaccination. However, the commercially available vaccine based on a protein homologous to Bm86 exhibits variations in efficacy relative to the different geographical locations. This study aimed to identify antigenic determinants of the sequences of proteins homologous to Bm86. Phylogenetic analyses were performed to determine the extent of divergence between different populations of R. microplus to identify the sequence that could be used as a universal vaccine against the multiple geographically distinct populations of R. microplus and related tick species. Considering the extensive sequence and functional polymorphism observed among strains of R. microplus from different geographical regions, we can conclude that it may be possible to achieve effective vaccination against these cattle ticks using a single universal Bm86-based antigen.

Resumo O carrapato Rhipicephalus microplus é responsável por perdas significativas no agronegócio. O controle deste carrapato é feito principalmente por meio da aplicação de acaricidas químicos, geralmente resultando na contaminação de produtos de origem animal e do meio ambiente. Outra preocupação importante associada ao uso de acaricidas é o crescente aumento de relatos sobre a resistência deste carrapato a princípios ativos de vários produtos comerciais. Uma alternativa de controle é por meio de vacinação. Porém, a vacina comercializada contendo proteína homóloga à Bm86, apresenta variações de eficácia em relação às diferentes localizações geográficas. Este estudo buscou identificar determinantes antigênicos das sequencias de proteínas homólogas a Bm86. As análises filogenéticas foram feitas para determinar a extensão da divergência entre diferentes populações de R. microplus com o objetivo de identificar a sequência que poderia ser usada como vacina universal contra as múltiplas populações geograficamente distintas de R. microplus e espécies de carrapatos relacionados. Considerando-se a extensa sequência e o polimorfismo observados entre linhagens de R. microplus de diferentes regiões geográficas, podemos concluir que pode ser possível obter uma vacinação efetiva contra esses carrapatos bovinos utilizando um único antígeno universal baseado em Bm86.

Wildlife species, Ixodid fauna and new host records for ticks in an Amazon forest area, Rondônia, Brazil / Espécies de vida selvagem, fauna ixodídica e novos registros de hospedeiros de carrapatos em uma área de Floresta Amazônica, Rondônia, Brasil

Abstract The objective of this work was to evaluate the diversity of ticks associated with free-living animals and to investigate new host records for ticks. Ticks were collected from animals rescued during the flood of the Jamari River in the municipality of Ariquemes, state of Rondônia, North Region of Brazil. A total of 39 animals were captured, out of which 10 were amphibians, 19 were reptiles and 10 were mammals. A total of 127 ticks of the Amblyomma genus were collected from these animals, distributed among seven species: Amblyomma dissimile, Amblyomma geayi, Amblyomma humerale , Amblyomma longirostre, Amblyomma nodosum , Amblyomma rotundatum and Amblyomma varium. In addition, one specimen of Rhipicephalus (Boophilus) microplus was collected. Among these specimens, 85 were adults and 42 were nymphs, with A. rotundatum being the most prevalent species. An Amblyomma spp. larvae was also collected from a lizard (Uranoscodon superciliosus), and one Amblyomma calcaratum and one Amblyomma dubitatum were recovered from the environment, thus totaling 130 ticks. Among the Ixodidae collected from different hosts, we provide the first report for the species A. rotundatum parasitizing Rhinella major, U. superciliosus, Leptophis ahaetulla, Chironius multiventris, and Mastigodryas boddaerti, as well as of A. humerale parasitizing U. superciliosus, A. geayi parasitizing Choloepus didactylus, and Rhipicephalus (B.) microplus parasitizing Alouatta puruensis.

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade de carrapatos associados à animais de vida livre e investigar novos registros de hospedeiros. Coletas foram feitas em animais resgatados durante a cheia do Rio Jamari, localizado no município de Ariquemes, estado de Rondônia, Região Norte do Brasil. Um total de 39 animais foi capturado, dos quais dez eram anfíbios, 19 eram répteis e dez eram mamíferos. 127 carrapatos do gênero Amblyomma foram coletados destes animais, distribuídos em sete espécies: Amblyomma dissimile , Amblyomma geayi, Amblyomma humerale, Amblyomma longirostre, Amblyomma nodosum, Amblyomma rotundatum e Amblyomma varium. Adicionalmente, um exemplar de Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi coletado. Dentre estes espécimes, 85 eram adultos e 42 eram ninfas, com A. rotundatum sendo a espécie mais prevalente. Uma larva de Amblyomma spp. também foi coletada de um lagarto (Uranoscodon superciliosus), um Amblyomma calcaratum e um Amblyomma dubitatum foram recuperados do ambiente, assim totalizando 130 carrapatos. Dentre os ixodídeos coletados de diferentes hospedeiros, este trabalho fornece o primeiro registro da espécie A. rotundatum parasitando Rhinella major, U. superciliosus, Leptophis ahaetulla, Chironius multiventris e Mastigodryas boddaerti, assim como da espécie A. humerale parasitando U. superciliosus , a espécie A. geayi parasitando Choloepus didactylus e R. microplus parasitando Alouatta puruensis .

New insights from molecular characterization of the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus in Brazil / Novos pontos de vista sobre a caracterização molecular em carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus, no Brasil

Abstract The Rhipicephalus (Boophilus) microplus complex currently consists of five taxa, namely R. australis, R. annulatus, R. (B.) microplus clade A sensu, R. microplus clade B sensu, and R. (B.) microplus clade C sensu. Mitochondrial DNA-based methods help taxonomists when they are facing the morpho-taxonomic problem of distinguishing members of the R. (B.) microplus complex. The purpose of this study was to perform molecular characterization of ticks in all five regions of Brazil and infer their phylogenetic relationships. Molecular analysis characterized 10 haplotypes of the COX-1 gene. Molecular network analysis revealed that haplotype H-2 was the most dispersed of the studied populations (n = 11). Haplotype H-3 (n = 2) had the greatest genetic differentiation when compared to other Brazilian populations. A Bayesian phylogenetic tree of the COX-1 gene obtained strong support. In addition, it was observed that the population of R. (B.) microplus haplotype H-3 exhibited diverging branches among the other Brazilian populations in the study. The study concludes that the different regions of Brazil have R. (B.) microplus tick populations with distinct haplotypes.

Resumo Carrapatos do complexo R. (B.) microplus se distribuem em cinco taxa: R. australis, R. annulatus, R. (B.) microplus clado A sensu R. microplus clado B sensue e R. (B.) microplus clado C sensu. Métodos baseados no DNA mitocondrial podem auxiliar taxonomistas quando há dificuldades em estabelecer diferenças morfológicas para distinguir membros do complexo R. (B.) microplus. O objetivo deste estudo foi a caracterização molecular e a inferência de relações filogenéticas em carrapatos de todas as cinco regiões geográficas do Brasil. Para o gene COX-1, a análise molecular caracterizou 10 haplótipos. Na análise molecular em rede foi observado que o haplótipo H-2 é o mais disperso entre as populações (n=11). O haplótipo H-3 (n=2) foi o que obteve maior diferenciação genética ao ser comparado com outras populações brasileiras. A árvore filogenética Bayesiana de gene COX-1 gerou suporte robusto e foi observado que a população de R. (B.) microplus haplótipo H-3 apresentou ramificação com divergência entre as outras populações brasileiras apresentadas neste estudo. Conclui-se que as populações brasileiras possuem diversidade haplotípica com divergência entre as diversas populações de R. (B.) microplus no Brasil.

Neospora caninum and Toxoplasma gondii serodiagnosis in human immunodeficiency virus carriers

ABSTRACTINTRODUCTION:Neospora caninum and Toxoplasma gondii belong to the Sarcocystidae family, and both have one definitive and various intermediary hosts. Owing to their weak immune systems, immunocompromised persons might be prone to opportunistic infections. The aim of this study was to investigate the presence of anti- N. caninum and anti- T. gondii antibodies in immunocompromised individuals.METHODS:This cross-sectional study investigated the rates of N. caninum and T. gondii , as assessed using immunofluorescent antibody reaction (IFAT) with 1:50 and 1:16 dilution, respectively, in patients with human immunodeficiency virus (HIV).RESULTS:The seropositivity for N. caninum was 26.1% (81/310) in Mato Grosso do Sul and 31.2% (10/32) in Paraná and for T. gondii was 76.8% (238/310) in Mato Grosso do Sul and 68.7% (22/32) in Paraná.CONCLUSIONS:There is evidence of anti- N caninum and anti- T. gondii antibodies in patients with HIV. Other aspects of T. gondii , which is a zoonosis, and N. caninum , which might affect immunodeficient individuals, need to be evaluated and reported.

Recombinant gp19 as a potential antigen for detecting anti-Ehrlichia canis antibodies in dog sera / gp19 recombinante como um antígeno potencial para detecção de anticorposanti-Ehrlichia canis em soros de cães

The canine monocytic ehrlichiosis, caused by Ehrlichia canis, is endemic in several regions of Brazil. Some serological diagnostic techniques using immunodominant proteins of E. canis as antigens are available, but their specificities and sensitivities are questionable. Based on this, the objective of this study was to test the antigenic potential of the recombinant gp19 protein (rGP19) for subsequent use in diagnostic tests. The rGP19 expressed in the Escherichia coli strain BL21 (DE3) C41 was recognized in the sera from experimentally infected dogs using ELISA and Western blotting. Thus, it was possible to obtain a promising antigen with the ability to differentiate between E. canis-positive and -negative animals, even 1 week after infection.

A erliquiose monocítica canina, causada por Ehrlichia canis, é uma doença endêmica em diversas regiões do Brasil. Algumas técnicas de diagnóstico sorológico, utilizando proteínas imunodominantes de E. canis como antígenos, estão disponíveis, porém suas especificidades e sensibilidades são questionáveis. Com base nesse fato, o objetivo deste trabalho foi testar o potencial antigênico da proteína GP19 recombinante (rGP19) para posterior utilização em testes diagnósticos. A rGP19, expressa em E. coli cepa BL21 (DE3) C41, foi reconhecida por soros de cães experimentalmente infectados pelas técnicas de ELISA e Western blotting. Dessa maneira, conseguiu-se obter um antígeno promissor com a capacidade de diferenciar animais positivos de negativos, até mesmo uma semana após a infecção.

Geographical distribution of Trypanosoma cruzi in triatomine vectors in the State of Mato Grosso do Sul, Brazil

Introduction This work presents the initial findings of a molecular epidemiological investigation of Trypanosoma cruzi in triatomine insects in State of Mato Grosso do Sul. Methods A total of 511 triatomines from different regions of the state were examined. Deoxyribonucleic acid (DNA) was extracted from the intestinal contents of the insects using phenol-chloroform-isoamyl alcohol (25:24:1). Polymerase chain reaction (PCR) using primers 121/122 targeting DNA kinetoplast (kDNA) was then performed to identify T. cruzi, and positive samples were subjected to PCR using the primer pair TcSC5D-F/R followed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) with the restriction enzymes SphI and HpaI (1 U/reaction), cloning and sequencing. Results One hundred samples were positive for T. cruzi, and three discrete typing units (DTUs) were identified (TcI, TcII, and TcBat). Triatoma sordida had the highest T. cruzi occurrence (83.3%), and DTUs were found in three samples: 58.3% of the samples were TcI, 33.3% were TcII and 8.3% were TcBat. There was a clear geographical distribution of the DTUs throughout the state, with TcI, TcII and TcBat located in the center, TcI located in the east, and TcII located in the west. Conclusions This study showed the occurrence ...

Detection of Leishmania infantum in Lutzomyia longipalpis captured in Campo Grande, MS / Detecção de Leishmania infantum em Lutzomyia longipalpis capturados em Campo Grande, MS

Leishmaniasis is a zoonotic disease caused by protozoa of the genus Leishmania (Ross, 1903) and is the focus of considerable attention in human and veterinary medicine. In the city of Campo Grande, MS, the causative agent of visceral leishmaniasis is Leishmania infantum (= L. chagasi) primary vector, comprising approximately 92.9% of the local sandfly population, is Lutzomyia longipalpis. The aim of this work was to compare real-time PCR with PCR as a tool for the detection of the kinetoplast DNA (kDNA) of L. infantum in sandflies. Sandflies of this species were caught, and a total of 38 samples with 1-4 individuals in each sample were obtained; these were distributed across 13 districts and divided between seven urban areas of the city of Campo Grande, MS. Three positive samples were found by PCR and, when using real-time PCR, this was able to detect the presence of this agent in 6 of the 13 districts sampled, which were all located on the outskirts of the city, where indicates the greater enzootic potential of these regions, as they are closer to natural forest reserves. We conclude that real-time PCR can be used for epidemiological studies of L. infantum.

A Leishmaniose é uma zoonose causada por protozoários do gênero Leishmania (Ross 1903), objetos de considerável atenção em medicina humana e veterinária. Na cidade de Campo Grande – MS, o agente etiológico da Leishmaniose Visceral é Leishmania infantum (= L. chagasi), e o principal vetor é a espécie Lutzomyia longipalpis, que representa cerca de 92,9% da população de flebotomíneos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a PCR em tempo real como ferramenta para a detecção de kDNA de L. infantum em flebotomíneos, comparando-se com PCR convencional. Flebotomíneos dessa espécie foram capturados, somando 38 amostras de 1 a 4 espécimens cada, distribuídas em 13 bairros, divididos entre as 7 regiões urbanas da cidade de Campo Grande – MS, e armazenados a −70 °C até a extração de ADN e amplificação por PCR e PCR em tempo real. Das 38 amostras testadas, foram encontradas 3 amostras positivas pela PCR convencional e 11 pela PCR em Tempo Real. Na otimização da PCR em tempo real, a temperatura de dissociação do amplificado foi de 82, 89 °C. Neste estudo, utilizando-se a técnica da PCR em tempo real, foi possível detectar a presença desse agente em 6 dos 13 bairros amostrados, todos na periferia da cidade, indicando o maior potencial enzoótico dessas regiões, que têm maior proximidade com reservas de matas naturais. Conclui-se que a PCR em tempo real pode ser utilizada para estudo epidemiológico de L. infantum.

Calculation of the efficacy of vaccines against tick infestations on cattle / Calculo de eficacia de vacinas contra a infestacao de carrapatos nos bovinos

Cattle ticks are responsible for great economic losses in cattle farming worldwide, and their main control method, chemicals, has been showing problems, whether resulting from the development of resistant strains of ticks or environmental contamination. Research studies directed toward developing vaccines against ticks are emerging. One way to evaluate those vaccines is to calculate the percentage of efficacy. The aim of this study was to analyze scientific publications archived in PubMed that used this method of assessment and discuss the main factors that may affect its calculation. Thus, 25 articles addressing this subject were selected. The percentage of efficacy was usually calculated in one of two ways, with one considering the reduced fertility of eggs and the other not. The latter method may underestimate the vaccine efficacy, and the most complete formula for calculating the efficacy reflects how much the vaccine actually affects the infestation. In our view, the use of the complete formula for calculating the percentage of efficacy is broader and more representative of the vaccine effect on the tick population.

Carrapatos de bovinos são responsáveis por grandes perdas econômicas para a pecuária bovina mundial e seu principal método de controle, o químico, vem apresentando problemas, seja pelo desenvolvimento de amostras de carrapatos resistentes ou pela contaminação ambiental. Na tentativa de diminuir a utilização dos acaricidas, surgem pesquisas direcionadas ao desenvolvimento de vacinas contra carrapatos. Uma maneira de avaliar essas vacinas é pelo cálculo de percentagem de eficácia. O objetivo deste trabalho foi analisar as publicações científicas indexadas no PubMed que utilizaram este método de avaliação e discutir os principais fatores que podem interferir no seu cálculo. Dessa maneira, selecionaram-se 25 artigos que tratavam desse assunto. A percentagem de eficácia apareceu sendo calculada de duas formas, uma considerando a redução da fertilidade dos ovos e a outra não. Essa última pode subestimar a eficiência da vacina, e a fórmula de cálculo da eficácia mais completa representa o quanto da infestação a vacina realmente reduziu. Em nosso entendimento, a utilização da fórmula completa para o cálculo da percentagem de eficácia é mais abrangente e representativa do efeito da vacina na população de carrapatos.

Environmentally associated ticks (Acari: Ixodidae) in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil / Carrapatos (Acari: Ixodidae) associados com o ambiente em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil

Herein, we report tick species found on wild and domestic animals and in the environment during a one-year sampling period at the Brazilian Farming Research Company beef cattle unit (Embrapa Beef Cattle), which is located within the urban area of Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil. From 55 wild hosts including six different species (Nasua nasua, Cebus spp., Cerdocyon thous, Myrmecophaga tridactyla, Tamandua tetradactyla and Dasyprocta aguti), 323 ticks were collected. Amblyomma ovale ticks were found solely on coatis, and Amblyomma nodosum was identified solely on anteaters. No ticks were found on capuchin monkeys. However, Amblyomma cajennense was found on all parasitized host species with the exception of capuchin monkeys. Giant anteaters displayed the highest infestation abundance, with a mean of 53 ticks/animal. Environmental sampling yielded 166 adult A. cajennense ticks. The tick species found on domestic animals (Rhipicephalus (Boophilus) microplus, R. sanguineus, Dermacentor nitens and A. cajennense) were those typically found on these hosts in Brazil. The most prevalent tick species, A. cajennense, was found on both wild and domestic animals and was also prevalent in the environment. Thus, this tick species is the primary vector that allows pathogens to bridge wild and domestic animals in the Cerrado.

Neste trabalho são descritas as espécies de carrapatos de animais selvagens e domésticos e do ambiente coletados por um ano na EMBRAPA Gado de Corte localizado na área urbana de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil. Dos 55 hospedeiros selvagens de seis espécies diferentes (Nasua nasua, Cebus spp.,Cerdocyon thous, Myrmecophaga tridactyla,Tamandua tetradactyla e Dasyprocta aguti) foram coletados 323 carrapatos. Amblyomma ovale foi encontrado apenas em quatis e Amblyomma nodosum apenas sobre tamanduás. Nenhum carrapato foi encontrado sobre macacos-prego. Por outro lado, Amblyomma cajennense foi encontrado em todos os hospedeiros com exceção dos macacos-pregos. A maior abundancia de infestação foi aquela em tamanduás-bandeira com média de 53 carrapatos/animal. No ambiente foram capturados 166 carrapatos, todos da espécie A. cajennense. As espécies de carrapatos em animais domésticos (Rhipicephalus (Boophilus) microplus, Rhipicephalus sanguineus, Dermacentor nitens e A. cajennense) foram aquelas características nestes hospedeiros no Brasil. De forma geral a espécie de carrapato A. cajennense foi a mais prevalente sendo encontrada em animais domésticos e selvagens bem como no ambiente. Portanto, esta é a principal espécie de vetor a estabelecer uma ponte para bioagentes patogênicos entre animais domésticos e selvagens.

Bovine immunoprotection against Rhipicephalus (Boophilus) microplus with recombinant Bm86-Campo Grande antigen / Imunoproteção de bovinos contra Rhipicephalus (Boophilus) microplus com antígeno recombinante Bm86-Campo Grande

The southern cattle fever tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, is no doubt the most economically important ectoparasite of cattle globally. The inappropriate use of chemical acaricides has driven the evolution of resistance in populations of R. (B.) microplus. Anti-tick vaccines represent a technology that can be combined with acaricides in integrated control programs to mitigate the impact of R. (B.) microplus. The recombinant form of Bm86 antigen from the Campo Grande (rBm86-CG) strain of R. (B.) microplus was produced using the Pichiapastoris expression system to test its ability to immunoprotect cattle against tick infestation. Secretion of rBm86-CG by P. pastoris through the bioprocess reported here simplified purification of the antigen. A specific humoral immune response was detected by ELISA in vaccinated cattle. Immunoblot results revealed that polyclonal antibodies from vaccinated cattle recognized a protein in larval extracts with a molecular weight corresponding to Bm86. The rBm86-CG antigen showed 31% efficacy against the Campo Grande strain of R. (B.) microplus infesting vaccinated cattle. The rBm86-CG is an antigen that could be used in a polyvalent vaccine as part of an integrated program for the control of R. (B.) microplus in the region that includes Mato Grosso do Sul.

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é, sem dúvidas, o ectoparasito economicamente mais importante para o gado a nível mundial. A utilização inadequada de acaricidas tem impulsionado a evolução da resistência em populações de R. (B.) microplus. Vacinas contra o carrapato representam uma tecnologia que pode ser combinada com acaricidas em programas de controle integrado para diminuir o impacto de R. (B.) microplus. A forma recombinante da Bm86 da cepa Campo Grande (rBm86-CG) de R. (B.) microplus foi produzido utilizando o sistema de expressão em Pichia pastoris para testar sua capacidade de imunoproteção ao gado contra a infestação de carrapatos. A secreção de rBm86-CG em P. pastoris pelo bioprocesso, simplificou a purificação do antígeno. A resposta imune humoral específica foi detectada por ELISA em soros de bovinos vacinados. Resultados de "imunoblot" revelaram que anticorpos policlonais de bovinos vacinados reconheceram uma proteína em extratos de larvas com um peso molecular correspondente à Bm86. O antígeno rBm86-CG mostrou eficácia de 31% contra a amostra CG de R. (B.) microplus utilizada para infestar os bovinos vacinados. Pelos resultados obtidos, concluímos que a rBm86-CG é um antígeno que pode ser usado em uma vacina polivalente, como parte de um programa integrado para o controle de R. (B.) microplus no estado do Mato Grosso do Sul, Brasil.

Rhipicephalus (Boophilus) microplus: expression and characterization of Bm86-CG in Pichia pastoris / Rhipicephalus (Boophilus) microplus: expressão e caracterização da Bm86-CG em Pichia pastoris

The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is responsible for great economic losses. It is mainly controlled chemically, with limitations regarding development of resistance to the chemicals. Vaccines may help control this parasite, thereby reducing tick pesticide use. In this light, we performed subcloning of the gene of the protein Bm86-GC, the homologue protein that currently forms the basis of vaccines (GavacTM and TickGardPLUS) that have been developed against cattle ticks. The subcloning was done in the pPIC9 expression vector, for transformation in the yeast Pichia pastoris. This protein was characterized by expression of the recombinant Mut+ strain, which expressed greater quantities of protein. The expressed protein (rBm86-CG) was recognized in the Western-blot assay using anti-Gavac, anti-TickGard, anti-larval extract and anti-rBm86-CG polyclonal sera. The serum produced in cattle vaccinated with the antigen CG rBm86 presented high antibody titers and recognized the native protein. The rBm86-GC has potential relevance as an immunogen for vaccine formulation against cattle ticks.

O carrapato-do-boi Rhipicephalus (Boophilus) microplus é responsável por grandes perdas econômicas. Seu controle é principalmente químico e apresenta limitações quanto ao desenvolvimento de resistência aos princípios ativos. As vacinas podem auxiliar no controle deste parasita diminuindo as aplicações de carrapaticidas. Considerando isso, foi realizada a subclonagem do gene da proteína Bm86-CG, proteína homologa a que atualmente é a base das vacinas desenvolvidas (GavacTM e TickGardPLUS) contra o carrapato-do-boi, no vetor de expressão pPIC9, para ser transformado em levedura, Pichia pastoris. Esta proteína foi caracterizada pela expressão da cepa recombinante Mut+ que expressou maior quantidade de proteína. A proteína expressa, rBm86-CG, foi reconhecida no ensaio de Western-blot pelos soros policlonais anti-Gavac, anti-TickGard, anti-Extrato de larva e anti-rBm86-CG. O soro produzido em bovinos vacinados com o antígeno rBm86-CG apresentou altos títulos de anticorpo e reconheceu a proteína nativa. A rBm86-CG possui potencial relevância como imunógeno para formulação vacinal contra o carrapato de bovinos.

Association between seropositivity for Neospora caninum and reproductive performance of beef heifers in the Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil / Associação entre soropositividade para Neospora caninum e o desempenho reprodutivo de novilhas de corte no Pantanal Sul-Mato-Grossense, Brasil

Neospora caninum is an obligate intracellular parasite that can infect domestic and wild canids, ruminants, and horses. The purpose of this study was to evaluate the association between the presence of antibodies to N. caninum and reproductive loss in beef heifers in the South Pantanal region of Mato Grosso, Brazil. A total of 1098 heifers were evaluated from breeding to calving with regard to reproductive performance, and serology for neosporosis was assayed by indirect immunofluorescence reaction. The prevalence of N. caninum in cows that had failed to conceive was 22.13 percent higher than in those that had conceived (p < 0.0001), indicating a significant correlation between non-conception and presence of anti-N. caninum antibodies. The extraction rates for seropositive and seronegative heifers were 28.24 and 50.12 percent, respectively, with a statistically significant value (p < 0.0001) that showed a decrease of 44 percent in the extraction rate of seropositive animals. The results emphasize the importance of diagnosis for monitoring of neosporosis in primiparous cows, and indicators of seropositive females as a factor in strategies for culling the beef cattle herd.

Neospora caninum é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar canídeos domésticos e selvagens, ruminantes e equídeos. Neste trabalho estudou-se a associação entre soropositividade para Neospora caninum e perda reprodutiva em novilhas de corte na região do Pantanal Sul-Mato-Grossense. Foram avaliadas 1098 novilhas da estação de reprodução ao nascimento dos bezerros com relação ao desempenho reprodutivo e realizada a sorologia para N. caninum através da reação de imunofluorescência indireta. A soroprevalência de N. caninum nas vacas que falhara na concepção foi 22,13 por cento maior que nas que conceberam (p < 0,0001), indicando que há uma correlação significativa entre a não concepção e a presença de anticorpos anti-N. caninum. As taxas de desfrute para as novilhas soropositivas e soronegativas para neosporose foram de 28,24 e 50,12 por cento, respectivamente, mostrando uma redução de 44 por cento na taxa de desfrute de novilhas soropositivas para N. caninum. Ressalta-se a importância do monitoramento do diagnóstico da neosporose em primíparas, e o indicador de fêmeas soropositivas como um fator nas estratégias de descarte no rebanho bovino de corte.