Detección de anticuerpos contra trypanosoma cruzi en Somoto, Nicaragua, medianta ELISA indirecto e IFI en muestras de sangre en papel de filtro / Trypanosoma cruzi antibody detection in eight rural communities of Somoto, Nicaragua, through indirect ELISA and indirect immunofluorescence in blood samples collected on filter paper

Se estandarizó un inmunoensayo enzimático en fase sólida (ELISA) para estudiar la presencia de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi en personas asintomáticas que viven en un área endémica de enfermedad de Chagas en Nicaragua. El ensayo fue estandarizado para el análisis de muestras de sangre colectadas en papel de filtro como método simple de transporte de muestras de sangre. Se realizó un estudio previo en el que se estudiaron por ELISA 18 muestras de suero total y 18 eluidos de sangre de pacientes con enfermedad de Chagas crónica, 30 muestras de suero y 30 eluidos de sangre de personas sanas que se utilizaron como controles negativos y 14 muestras de suero y 14 eluidos de sangre de pacientes con leishmaniasis cutánea o visceral que se utilizaron para los estudios de reacciones cruzadas. Tanto con el suero total como con los eluidos de sangre, la prueba de ELISA proporcionó una sensibilidad de 100% y una especificidad de 90%; solo se observaron reacciones cruzadas con las muestras de pacientes con leishmaniasis visceral. El estudio poblacional incluyó a ocho comunidades rurales de Somoto, Nicaragua. Mediante un muestreo al azar se colectaron muestras de sangre en papel de filtro a 2 434 personas (1 335 del sexo masculino y 1 099 del sexo femenino) de las comunidades de Aguas Calientes, La Manzana, Los Canales, Santa Rosa, Las Playas, El Brocal, Santa Isabel y Santa Teresa. Las muestras fueron estudiadas por ELISA e inmunofluorescencia indirecta (IFI) encontrándose un total de 260 seropositivos por ELISA (10,7%), 207 de los cuales fueron también positivos por IFI (8,5%). La mayoría de los sueros seropositivos correspondieron a personas del sexo femenino con ambas técnicas, pero la diferencia entre hombres y mujeres no fue estadísticamente significativa. Los resultados obtenidos con ambas técnicas mostraron una excelente concordancia. Con respecto a la edad se observó una curva ascendente, con 5,4% de seropositivos por ELISA en individuos de 0­10 años y 42,7% en mayores de 50 años. La vasta mayoría de los individuos analizados fueron asintomáticos.

We standardized a solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in order to study the presence of Trypanosoma cruzi antibodies in asymptomatic persons who live in an area of Nicaragua endemic for Chagas' disease. The test was standardized to analyze filter-paper blood samples, which are easy to transport. In the first phase of our investigation, ELISA was used to study 18 samples of total serum and 18 eluates of blood from patients with chronic Chagas' disease; 30 samples of serum and 30 eluates of blood from healthy people, used as negative controls; and 14 samples of serum and 14 eluates of blood from patients with cutaneous or visceral leishmaniasis, which were used to study cross-reactions. Both with the total-serum and the blood-eluate samples, the ELISA test provided 100% sensitivity and 90% specificity. Cross-reactions in the patient samples were observed only with visceral leishmaniasis. The second phase of our investigation was a population study that included eight rural communities in the area of Somoto, Nicaragua. Through random sampling, filter-paper blood samples were collected from 2 434 people (1 335 men and 1 099 women) from the communities of Aguas Calientes, El Brocal, La Manzana, Las Playas, Los Canales, Santa Isabel, Santa Rosa, and Santa Teresa. Studied by ELISA and by indirect immunofluorescence (IIF), the samples included 260 found seropositive by ELISA (10.7%), of which 207 were positive according to IIF (8.5%). With both techniques, the majority of seropositives were among women, but the difference between men and women was not statistically significant. There was a high level of agreement between the results obtained with the two techniques. There was an upward trend with age, with 5.4% of those found seropositive by ELISA being persons 10 years of age or younger and 42.7% of those found seropositive being older than 50. The vast majority of the individuals analyzed were asymptomatic.

Necesidad del uso de cromógenos para cuantificar promastigotes de Leishmania en placas de 96 pozos / The need for the use of chromogens for quantifying Leishmania promastigotes on plates from 96 wells

The existing difficulties in the treatment of leishmaniasis justify the testing of the effect of new products on parasite forms in the search of a therapeutic alternative for the parasitosis. Given the need of establishing a method to evaluate the activity of natural synthetic products in vitro under the Cuban conditions, this paper was aimed at defining the usefulness of p-nitrophenilphosphate as a chromogenic substance for quantification of parasites in plaques from 96 wells. To standardize this colorimetric method the stages of the parasite growth curve were set. The study of linearity and selection of the sample size, which was optional for these assays, showed that it was possible to obtain maximum linear determination coefficient with 20 mm. Likewise, the variation coefficient was compared with and without the chromogen and the effect of changes in culture medium on the reading of absorbances was analyzed. The set limit of quantification proved the need of using chromogen for the purposes of this paper and the general results allow to recommend this less subjective, simpler and quicker methodology to test products of interest in this field.

Coproantigenos de Fasciola hepatica de posible utilidad en el diagnostico de la fascioliasis / Identification and isolation of coproantigens of Fasciola hepatica that are potentially useful in the diagnosis of fascioliasis

En el presente estudio se describen cuáles son los antígenos de Fasciola hepatica que están presentes en las heces de pacientes con fascioliasis crónica y de ratas infectadas experimentalmente con metacercarias de F. hepatica. Mediante el empleo de la técnica de inmunoelectrotransferencia (Western blot) con un suero hiperinmune obtenido frente a antígenos de excreción/secreción de adultos de F. hepatica, se pudo demostrar que en las heces de los pacientes se encuentran antígenos de posible interés para el diagnóstico con masas moleculares de 14, 19, 20, 23, 25, 32, 46, 51 y 62 kilodaltons (kDa). Además, se comprobó que algunos de estos péptidos (los de 14, 20, 23 y 51 kDa) son reconocidos también por la mayoría de los sueros de pacientes crónicos. Después de purificar por cromatografía de afinidad los antígenos presentes en heces de ratas con 6 a 12 semanas de infección, empleando para ello el anticuerpo monoclonal ES78 acoplado a Sepharosa 4B-CNBr, se identificaron seis polipéptidos de 11, 14, 26, 32, 47 y 51 kDa; otros tres polipéptidos, de 17, 24 y 66 kDa, solo se pudieron identificar en heces de ratas con 10 a 12 semanas de infección. Nuestros resultados sugieren que estos polipéptidos pueden ser antígenos comunes a ambos estadios parasitarios y constituir importantes marcadores de la fascioliasis aguda y crónica, en particular los de 14, 24, , 26 y 51 kDa, que reaccionaron con el inmunosuero, los sueros humanos y el anticuerpo monoclonal ES78

This study describes which antigens of Fasciola hepatica are present in the feces of patients with chronic fascioliasis and in the feces of rats infected experimentally with F. hepatica metacercariae. Using a Western blot assay technique with hyperimmune serum obtained from excretory-secretory antigens of adult F. hepatica, we found in the patients' feces antigens of possible diagnostic interest, with molecular weights of 14, 19, 20, 23, 25, 32, 46, 51, and 62 kilodaltons (kDa). In addition, we showed that the peptides of 14, 20, 23, and 51 kDa are also recognized by the majority of the sera from chronic patients. We used affinity chromatography to purify the antigens present in the feces of rats that had been infected for 6 to 12 weeks, using ES78 monoclonal antibody bound to CNBr-activated Sepharose 4B. Through that approach, we identified six polypeptides, of 11, 14, 26, 32, 47, and 51 kDa; three more polypeptides, of 17, 24, and 66 kDa, could only be identified in the feces of rats that had been infected for 10 to 12 weeks. Our results suggest that these polypeptides could be antigens common to both parasitic stages. This is particularly true for the polypeptides of 14, 24, 26, and 51 kDa, because they reacted with the immune sera, the human sera, and the ES78 monoclonal antibody. These polypeptides could be important markers for acute and chronic fascioliasis.

UltramicroELISA indirecto para la detección de anticuerpos IgG en pacientes con fascioliasis / Indirect ultramicroELISA for the detection of IgG antibodies in patients with fascioliasis

Se describe la normalización de un ultramicroELISA para la detección de anticuerpos IgG anti-antígenos de excreción-secreción de Fasciola hepatica (UME-Fasciola). Se estudió un numeroso grupo de sueros entre los cuales 56 eran de pacientes con fascioliasis, 168 eran de pacientes con otras enfermedades parasitarias y 300 procedían de personas sanas, las cuales fueron utilizadas como controles negativos. Respecto al examen parasitológico considerado como "Regla de Oro", el UME-Fasciola mostró una sensibilidad del 100 por ciento, especificidad de 98 por ciento y valores predictivos para positivos y negativos de 90,3 y 100 por ciento, respectivamente. Sólo se observó reacción cruzada con los sueros de pacientes infectados con Opistorchis felineus. Al comparar el UME-Fasciola con el ELISA convencional se obtuvo un índice de concordancia de 95,5 por ciento

Detección de coproantígenos para evaluar infección activa por fasciola hepatica en ganado bovino / Detection of coproantigens for evaluation active infection by fasciola hepatica in cattle

Se aplicó un método inmunoenzimático tipo sandwich (Fascidig) para el diagnóstico de infección activa por fasciola hepatica en rebaños bovinos de la ciudad de la Habana, a través de la captura de coproantígenos específicos de excreción-secreción, mediante el uso del anticuerpo monoclonal (AcM) ES-78 de la subclase Ig G 2a. Se procesaron 293 muestras de heces y se compararon con el parasitológico convencional seriado, mostrando el método una sensibilidad del 95,3 por ciento, una especificidad del 99 por ciento y los valores predictivos para positivos y negativos feron de 98 por ciento y 97 por ciento respectivamente, demostrando con un solo muestreo valores de prevalencia significativamente similares a los determinados con 3 muestreos mediante el parasitológico. Los resultados obtenidos demostraron que existe una correlación entre la excreción de huevos por F. hepática y la concentración de antígenos en heces detectados por el método de sandwich-ELISA. Se analiza la ventaja del método para diagnosticar la infección activa por F. hepatica y su empleo en estudios clínico-epidemiológicos

Identificación y aislamiento de antígenos comunes de Fasciola hepatica / Identification and insolation of common antigens of Fasciola hepatica

Se identificaron por Western blotting y purificaron por cromatrografía de afinidad 4 polipéptidos antigénicos presentes en los antígenos de excreción-secreción que eran comunes a los antígenos somáticos y tegumentarios de Fasciola hepatica empleando para ello el anticuerpo monoclonal ES78. Los pesos moleculares calculados para estos polipéptidos oscilan en el rango de 37 a 13 kd y los mismos demostraron ser altamente reactivos con sueros de animales infectados experimentalmente con Fasciola hepatica en períodos tan tempranos como la segunda semana de infección, con máximos en las semanas 6 y 10

Inmunofluorescencia indirecta en filiariasis, II: respuesta humoral en una población alrededor de un paciente confirmado con Wuchereria bancrofti (nemátoda: filarioidea), Cuba, 1983 / Indirect immunofluorescence in filariasis, II: humoral response in a population in the neighoorhood of a patient with proved Wuchereria boncrofti (Nematoda: filarioidea), Cuba, 1983

Se estudiaron por las técnicas de Knott, filtro de membrana e inmunofluorescencia indirecta, 256 personas de la ciudad de Pinar del Río, que vivían alrededor de un paciente con elefantiasis producida por Wuchereria brancofti, 111 individuos donantes del banco de sangre de la misma ciudad y 10 pacientes procedentes de áreas endémicas ingresados en el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí", con el diagnóstico de certeza de brancoftiasis. No se encontró microfilarias circulantes en los vecinos del caso positivo, sin embargo, se observó un alto título de anticuerpos (1:512) antifilaria en 41 de ellos, lo que sugiere que en algún momento esta población pudo haber estado en contacto con este parásito

Obtención y evaluación de antígenos de excresión-secreción en hembras adultas de Angiostrongylus cantonensis / Attainment and evaluation of excretion-secretion antigens in adult females of Angiostrongylus cantonensis

Hembras adultas de Angiostrongylus cantonensis se mantuvieron in vitro para la obtención de antígenos de excreción-secreción (Ag Exc-Sec Ac). Los antígenos se evaluaron frente a inmunosueros obtenidos en conejo y sueros de ratas infestadas experimentalmente, mediante las técnicas de contrainmunoelectrofóresis e inmunodifusión doble al no mostrar reaccciones cruzadas con otros helmintos. Se obtuvo un inmunosuero de alto título y especificidad. Se detectaron títulos de anticuerpos en suero de ratas infestadas en diferentes tiempos de posinfestación con antígenos de excreción-secreción de adultos