Clonación y expresión del ADNc para el activador tisular del plasminógeno en cèlulas de animales / Cloning and expresion of human tissue-type plasminogen activator cDNA in eukararyotic cells

Una alta expresión de tPA humana recombinante en células de hamster chino (CHO), fue obtenida usando el sistema de coamplificación del gen de la dehidrofolato reductasa (DHFR). La proteina fue secretada activa al medio de cultivo. En varios clones se mantuvo la producción estable, aun en ausencia de presión selectiva. No obstante, cuando el mismo ADN complementario fue clonado en un vector de expresión de baculovirus, sólo fue posible detectar niveles muy bajos de actividad tPA

Determinación de actividad estreptoquinasa utilizando un ensayo cuantitativo / Determination of streptokinase activity by quantitative assay

Para determinar la actividad estreptoquinasa (SK) presente en muestras de cultivo y purificación, se desarrolló un método cuantitativo a partir de la formación del complejo estequiométrico estreptoquinasa-plasminógeno (sk-plg). Las determinaciones fueron realizadas utilizando el método del sustrato cromogénico S-2251. La sk se obtuvo del cultivo de Streptococcus equisimilis beta hemolítico (grupo C). El plasminógeno empleado en el ensayo fue purificado a partir de plasma humano en nuestro laboratorio. El método permite la detección de hasta 7 UI de sk/ml. En el trabajo se describen los resultados obtenidos a diferentes concentraciones de sales presentes en las muestras, así como el efecto estimulador del fibrinógeno en la reacción

Expresión directa de la hormona de crecimiento humana madura en Escherichia coli / Direct expression of the mature human growth hormone in Escherichia coli

En el presente trabajo se describe una forma novedosa para la expresión directa de proteinas maduras de mamíferos en E.coli. Las regiones 3' y 5' no taducidas, y la secuencia señal de la hormona de crecimiento humana (hGH) fueron removidas, y un codón de iniciación se situó adyacente al primer codón de la secuencia correspondiente a la proteína madura. Los sitios de restricción Ncol Y BamHI fueron introducidos en las regiones 5' y 3' respectivamente, y la secuencia correspondiente a la proteína madura se amplificó por el método de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), clonándose directamente en un vector de expresión. Se alcanzaron altos niveles de expresión en E. coli