Efficiency of sanitary management of litter in Eimeria spp. control in poultry housing of Western Paraná, Brazil / Eficiência dos manejos sanitários de cama no controle de Eimeria spp. em aviários no Oeste do Paraná, Brasil

Abstract The objective of this research was to evaluate the control of coccidiosis in the litter of commercial poultry housing in the Western region of Paraná, Brazil, which adopts sanitary management to control Salmonellosis. Three litter treatments were selected, proposed by an integrating company in the region: fermentation associated with liming (FL); liming (L) and fermentation (F). Stool samples were collected from 18 poultry housing, in a completely randomized experimental design, testing different collection areas in the sheds, from the 5th day of the birds' housing, repeated weekly until the 40th day, during five successive flocks. The incidence of coccidiosis was determined by oocysts count in feces (OoPG), testing the interactions between treatment, age of birds and the number of flocks housed. Samples were selected to identify, through the Multiplex PCR, species of the genus Eimeria. circulating in the shed. The results showed that in litter where fermentation was adopted, the efficiency to control the sporulation of Eimeria spp. was significantly (p <0.05) higher than in the other treatments. The use of the Multiplex PCR technique requires improvements in the preparation of samples for the extraction of genetic material.

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência dos manejos sanitários aplicados à cama de aviários comerciais para o controle da salmonelose nas criações de frango de corte, na região Oeste do Paraná, e verificar seu efeito no controle da coccidiose. Foram selecionados três tratamentos de cama: a fermentação associada à calagem (FL); calagem (L) e fermentação (F). As amostras de fezes foram coletadas de 18 aviários, com um delineamento experimental inteiramente casualizado, testando-se diferentes áreas de coleta. As coletas foram realizadas a partir do 5° dia do alojamento e se repetiram semanalmente até o 40° dia, durante cinco lotes sucessivos. A incidência da parasitose foi determinada pela contagem de oocistos por grama de fezes (OoPG), testando as interações entre tratamento, idade das aves e número de lotes alojados. Amostras de fezes foram selecionadas para identificar os oocistos esperulados das espécies do gênero Eimeria circulantes no galpão, por meio do Multiplex PCR. Observou-se que a fermentação foi significativamente (p<0,05) mais eficiente, comparando-se o mesmo lote ao longo de todos os observados. A utilização da técnica de PCR Multiplex, precisa ser padronizada para amostras de campo.

Suplementação dietética de levedura de cerveja e de minerais orgânicos sobre o desempenho e resposta imune em frangos de corte desafiados com a vacina de coccidiose / Assessment of beer yeast diet and organic minerals on the performance and immune reponse of broilers immunized against coccidiosis vaccine

O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito da suplementação de levedura de cerveja e minerais orgânicos sobre o desempenho, morfometria intestinal e resposta imune humoral de frangos de corte, desafiados com a vacina de coccidiose. Foram utilizados 384 pintos de corte, distribuídos aleatoriamente em um delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos (1. controle, 2. minerais orgânicos 3. levedo de cerveja, 4. associação de minerais orgânicos e levedo de cerveja) e 4 repetições de 24 aves cada. No alojamento, 12 aves de cada repetição foram identificadas com anilha e receberam a vacina contra coccidiose via ocular. Aos 7, 21, 35 e 42 dias, foi coletado sangue para análise de proteínas séricas totais e perfil eletroforético de IgA e IgG e um segmento do duodeno para análise morfométrica. A suplementação de levedo de cerveja ou de minerais orgânicos não afetou o desempenho de frangos de corte ou a produção de anticorpos. O desafio imunológico com a vacina de coccidiose não foi suficientemente eficaz em provocar uma resposta imune capaz de alterar a morfometria da mucosa duodenal e a produção de anticorpos.

The objective of this study was to evaluate the effects of beer yeast and organic minerals supplementations on the performance, intestinal morphometry and humoral immune response of broilers that were challenged with coccidiosis vaccine. Three-hundred-eighty-four chicks were used, randomly distributed in an entirely random design total with four treatments (1. control, 2. organic minerals on top, 3. beer yeast, 4. association between organic minerals and beer yeast) and four treatments with 24-bird repetition each. At housing, 12 birds of each repetition were identified and received the eye-drop vaccine against coccidiosis. At 7, 21, 35 and 42 days it was collected blood to analyze the total serum proteins and the eletrophoretic profile of IgA and IgG and a duodenal segment for morphometric analysis. Neither the beer yeast nor the organic minerals supplementation affected the broiler performance or the antibodies production. The immunological challenge like the coccidiosis vaccine was not efficacious enough to provide an immune response able to modify the duodenal mucosa morphometry and the antibodies production.

Production of anti-Cryptosporidium polyclonal antibodies and standardization of direct immunofluorescence for detecting oocysts in water / Produção de anticorpos policlonais anti-Cryptosporidium e padronização da imunofluorescência direta para a detecção de oocistos na água

INTRODUCTION: The production of anti-Cryptosporidium polyclonal antibodies and its use in direct immunofluorescence assays to determine the presence of Cryptosporidium in water are described in the present work. METHODS: Two rabbits were immunized with soluble and particulate antigens from purified Cryptosporidium oocysts. The sera produced were prepared for immunoglobulin G extraction, which were then purified and conjugated with fluorescein isothiocyanate (FITC). Slides containing known amounts of oocysts were prepared to determine the sensitivity of the technique. To test the specificity, slides containing Giardia duodenalis cysts were prepared. RESULTS: The conjugate was successfully used in water samples experimentally contaminated with Cryptosporidium oocysts, and it was possible to detect up to five oocysts/spot, corresponding to contamination of 250 oocysts/mL. CONCLUSIONS: The three immunizations performed in the rabbits were enough to produce antibodies against Cryptosporidium, the standard direct immunofluorescence assay permitted the detection of five oocysts in 20 percent of the samples, and no cross-reaction with Giardia duodenalis cysts occurred.

INTRODUÇÃO: A produção de anticorpos policlonais anti-Cryptosporidium e sua utilização na imunofluorescência para determinar a presença de Cryptosporidium em água são descritas no presente trabalho. MÉTODOS: Dois coelhos foram imunizados com antígeno solúvel e particulado provenientes de oocistos purificados de Cryptosporidium. O soro produzido foi preparado para a extração de imunoglobulinas G, que foram purificadas e conjugadas com isotiocianato de fluoresceína (FITC). Lâminas contendo quantidades conhecidas de oocistos foram preparadas para determinar a sensibilidade da técnica. Para testar a especificidade foram preparadas lâminas contendo cistos de Giardia duodenalis. RESULTADOS: O conjugado foi usado com sucesso em amostras de água contaminadas experimentalmente com oocistos de Cryptosporidium, sendo capaz de detectar até cinco oocistos/spots que corresponde a uma contaminação de 250 oocistos/mL. CONCLUSÕES: As três imunizações realizadas nos coelhos foram suficientes para produção de anticorpos contra Cryptosporidium; a reação de imunofluorescência direta padronizada permitiu a detecção de cinco oocistos em 20 por cento das amostras; não houve reação cruzada com cistos de Giardia duodenalis.

Resposta imune-humoral e celular em bovinos da raça Nelore imunizados com extrato de larvas (L2 e L3) de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) / Immune humoral and cellular response of nelore bovines immunized with larvae extract (L2 and L3) of Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781)

As larvas da Dermatobia hominis provocam lesões ulcerativas, danificando o tecido subcutâneo e conseqüentemente a pele do hospedeiro. O couro é o subproduto que sofre maior depreciação, o que, muitas vezes, impossibilita seu aproveitamento na industrialização. Atualmente o controle químico é utilizado como forma de combate à dermatobiose, entretanto, leva ao acúmulo de substâncias tóxicas nos animais e no ambiente. No presente trabalho, foram avaliadas as respostas imune-humoral e celular de bovinos imunizados com extrato antigênico preparado com larvas de D. hominis. Três grupos de oito bezerras da raça Nelore com 10 meses de idade foram usados, tendo o primeiro grupo (A) recebido aplicação de extrato imunogênico de larvas de D. hominis, com intervalos de quinze dias; o grupo (B), utilizado como controle, não recebendo nenhum tipo de tratamento; e o grupo (C) recebendo o tratamento ectoparasiticida à base de Dichlorvos associado a Cypermetrina. Neste mesmo período, foram avaliados o leucograma e os níveis de IgG contra D. hominis pela técnica de enzimoimunoensaio-ELISA. Quanto à avaliação da imunidade humoral, verificou-se que os animais do grupo A apresentaram maior produção de IgG contra D. hominis, com níveis máximos de anticorpos circulantes aos 45 dias após a primeira imunização. Estes animais também apresentaram maior produção de neutrófilos, eosinófilos e monócitos que os dos grupos B e C. O número de nódulos de larvas encontrado nos animais do grupo C foi 148,3 por cento maior que nos animais dos grupos A e B. A comprovação da resposta imune celular e humoral, parcialmente caracterizadas, bem como a redução do número de nódulos, são indicadores que a imunização contra D. hominis foi parcialmente protetora para os bovinos imunizados.

Dermatobia hominis larvae cause ulcerative lesions and damage to subcutaneous tissue and skin of the host. Leather is the subproduct which undergoes major depreciation, making it difficult to industrial use. Nowadays, the chemical control is utilized against dermatobiosis, therefore it leads to rising toxic chemicals in the animals and environment. The immunological challenge with D. hominis larval extract may represent an important altervative for this parasitosis control. Humoral and cellular immune responses were tested in bovine using an antigenic extract prepared with D. hominis larvae. Three groups of 10 months old Nelore females were used. The first group (A) received immunogenic larval extract of D. hominis with fifteen-days interval between injections; the group (B) was the control and has not received any sort of treatment; and the group (C) received an ectoparasitecide treatment based on Dichlorvos associated to Cypermetrina. Aditionally, leucogram and levels of IgG against D. hominis by immunoassay technique were evaluated. As for the humoral immunity, animals from group A presented higher IgG production against D. hominis with maximum levels of circulating antibodies at the 45th day after the first injection. These animals also showed higher production of neutrophils, eosinophils and monocytes than those from groups B and C. The number of D. hominis larvae nodules observed in animals from the group C was 148.3 percent larger than those from group A and B. The evidence concerning both cellular and humoral immune responses as well as the reduction on nodules number are an indication that the immunization against D. hominis was partially protective for the immunized bovines.