Avaliação da produção de toxina tetânica por Clostridium tetani cultivado por processos fermentativos descontínuo e descontínuo alimentado / Evaluation of the toxin production for Clostridium tetani cultivated by batch fermentative and fed-batch process

A toxina tetânica é uma proteína sintetizada pelo bacilio Clostridium tetani que após destoxificação através da ação do formol, continua apresentando propriedades antigênicas e imunogênicas, obtendo a denominação toxóide tetânico. A síntese dessa proteína ocorre quando esse bacilo encontra-se na sua forma vegetativa e em meio de cultura específico relativamente complexo contendo glicose e peptonas. O efeito simultâneo de diferentes níveis de glicose (Go) e N-Z Case TT® (NZo) como fontes de carbono e nitrogênio, respectivamente, na produção de toxina tetânica foi investigada nesta parte do trabalho em cultivo estático por meio de planejamento fatorial em estrela com cinco níveis e avaliado por metodologia de superfície de resposta, com a finalidade de otimização do processo. O valor mais alto de toxina tetânica encontrado, correspondente a Go=9,7 g/L e NZo = 43,5 g/L, foi 79% maior que aqueles obtidos em condições padrões de cultivo (Go = 8,0 g/L e NZo = 25,0 g/L.Também foram realizados cultivos de C. tetani utilizando o processo descontínuo alimentado com diferentes protocolos para a correção da concentração de glicose no meio de cultivo ao longo do tempo em diferentes concentrações iniciais de N-Z Case TT®. Dois grupos de ensaios foram executados: a) experimentos realizados com a correção da concentração de glicose para 3,0 g/L nos instantes 16, 56 e 88 h e b) experimentos com correção inicial da concentração de glicose para 3,0 g/L e após esta cair para 1-1,5 g/L. O primeiro protocolo de correção da concentração de glicose e NZo = 50,0 g/L foram as melhores condições para obtenção de toxina tetânica Nestas condições, o título de toxina tetânica foi 300% maior que aqueles obtidos em cultivos padrão...

Tetanus toxoid: 1. purification in 50 kD molecular weight cut-off membrane

The tetanus anatoxin (M.W.=150,000 dALTONS) is the fundamental component for Tetanus Toxoid (TT) combined vaccines production and must follow the parameters established by World Health Organization (WHO). Among other qualifications the purity degree must be equal or greater than 1,000 Lf/mg PN and the residual formaldehyde must be at maximum level of 0,02 per cent. The Tangential Flow Filtration technique with 50,000 Nominal Molecular Weight Limit (NMWL) membranes and gel filtration in Sephadex G-50 were associated to purify 18 consecutive lots of tetanus anatoxin

Otimizaçäo do processo de purificaçäo industrial de toxóide tetânico por gel filtraçäo / Improvement in the industrial purification of tetanus toxoid by gel filtration

A metodologia industrial para obtençäo de Toxóide Tetânico(T.T.) atual, consiste na pré-precipitaçäo pelo (NH4)2SO4 seguida de gel filtraçäo em Sephadex G-50, com o qual obtém-se grau médio de pureza de 2.300 Lf/mgNP, sendo que o mínimo exigido pela O.M.S. é 1.000Lf/mgNP. Visando basicamente a diminuiçäo do tempo empregado no processo de purificaçäo do T.T., utilizamos resinas cromatográficas de 2§ e 3§ geraçäo, o Sephacryl S-100HR e o Superdex 75 prepgrade, respectivamente, que possibilitaram a eliminaçäo da etapa de pré-precipitaçäo pelo (NH4)2SO4 obtendo-se resultados com grau de pureza ao redor de 3.000Lf/mgNP. A atividade imunogênica destes produtos quando absorvidos pelo Al (OH)3 em concentraçäo de 15Lf/ml foi de 4,5UI/ml em cobaios. A O.M.S. recomenda que o T.T. induza a formaçäo de no mínimo 2UI/ml nestes animais. O rendimento do processo de purificaçäo foi de 88,46//, que é similar ao obtido no processo atual. A metodologia introduzida permitiu a diminuiçäo do tempo empregado neste processamento assim como a possibilidade de trabalhar-se com purificaçäo em sistema fechado (coluna cromatográfica)

Toxina tetânica: produçäo e purificaçäo em escala industrial / Tetanus toxin: production and purification in large scale

A obtençäo de toxina tetânica purificada em grandes volumes é um passo fundamental para a produçäo de Toxóide Tetânico. A utilizaçäo de vapor para a esterilizaçäo do meio de cultura para a produçäo desta toxina apresentava títulos baixos de toxina tetânica. O emprego da filtraçäo convencional teve como consequência índices insatisfatórios de pureza (Lf/mgNP) e de rendimento (porcentagem) do processo. Com o objetivo de encontrar soluçöes para estas etapas do processo produtivo, foi utilizada a esterilizaçäo por cartuchos para o meio de cultura e a filtraçäo tangencial através de um sistema Prostak, associado à ultrafiltraçäo molecular em 30Kd para a toxina tetânica. A nova metodologia trouxe aumentos significativos em pureza (Lf/mgNP) e em rendimento (porcentagem). A tecnologia empregada e a comparaçäo dos resultados obtidos nos diferentes processos säo apresentadas neste trabalho

Estabelecimento da concentracao antimicrobiana eficaz de tiomersal em toxoide tetanico / Determination of effective antimicrobial concentration of thimerosal in tetanus toxoid

Amostras de taxoide tetanico, contendo quatro concentracoes de tiomersal (0,005; 0,010; 0,015 e 0,020%) dentro dos limites recomendados oficialmente,foram submetidos ao teste de eficacia antimicrobiana do conservante. Com relacao as exigencias da Farmacopeia Americana XXII, apenas Staphylococcus aureus se mostrou resistente as quatro concentracoes, enquanto que para Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans e Aspergillus niger o sistema conservador atendeu as exigencias oficiais, mesmo na menor concentracao. O teor de tiomersal em toxoide tetanico podera ser de 0,005%

Purificaçäo industrial do toxóide tetânico por gel filtraçäo / Industrial purification of tetanus toxoids by gel filtration

Com o fracionamento pelo sulfato de amônio ou com a precipitaçäo alcoólica, säo obtidos toxóides tetânicos com pureza ao redor de 500 Lf/mg N.P. incompatíveis com as exigências da OMS, de 1000 a 1200 Lf/mg N.P. Foram descritas técnicas eficazes com a utilizaçäo da gel filtraçäo em Sephadex G200, G100 e G75 que, no entanto, pela longa duraçäo do processo, dificultam a produçäo em escala industrial. Introduzimos , assim, uma metodologia baseada na combinaçäo da pré-precipitaçäo pelo sulfato de amônio com a gel filtraçäo em Sephadex G50 com a qual obtivemos toxóides tetânicos com grau médio reprodutivo de pureza ao redor de 2.312,75 Lf/mg N.P. e resposta imunogênica satisfatória

Preparaçäo e teste da toxina botulínica tipo "E" e do seu anti-soro específico / Preparation and test of botulinum toxins type \"E\" and its specific immune sera

Os autores descrevem o método utilizado na preparaçäo do soro antibotulínico tipo E, que näo apresenta reaçäo cruzada com a toxina heteróloga, pela hiperimunizaçäo de equídeos, através do antígeno absorvido pelo alúmen de potássio (sulfato duplo de alumínio e potássio). Empregando o esquema de imunizaçäo anteriormente proposto, conseguiram obter mistura de plasma hiperimunes o qual, após purificado pelo método de Pope, modificado, concentrou até níveis na ordem de 750 a 1.000 UI/ml. Este produto foi diluído convenientemente para que contivesse 500 UI/ml de antitoxina