Occurrence and molecular characterization of Cryptosporidium spp. isolated from domestic animals in a rural area surrounding Atlantic dry forest fragments in Teodoro Sampaio municipality, State of São Paulo, Brazil / Ocorrência e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. isolados de animais domésticos de propriedades rurais circunvizinhas a fragmentos de Floresta Atlântica Seca do Estado de São Paulo, Brasil

The aim of this study was to assess the occurrence of Cryptosporidium in domestic animals in rural properties surrounding rain forest fragments within the municipality of Teodoro Sampaio, southeastern Brazil. Conventional sucrose flotation method followed by molecular characterization of the parasites by sequencing PCR products amplified from SSU rRNA gene were used. Stool samples were collected from domestic animals raised as pets and livestock in all rural properties surrounding three forest fragments. Samples from cattle (197), equine (63), pigs (25), sheep (11), and dogs (28) were collected from 98 rural properties. The frequency of occurrence of Cryptosporidium within each animal species was 3.0 percent (6/197) among cattle and 10.7 percent (3/28) among dogs. Cryptosporidium was not detected in stool samples from equine, sheep, and pigs. All sequences obtained from the six samples of calves showed molecular identity with Cryptosporidium andersoni while all sequences from dog samples were similar to C. canis. The frequency of occurrence of Cryptosporidium in these domestic animal species was low. The absence of C. parvum in the present study suggests that the zoonotic cycle of cryptosporidiosis may not be relevant in the region studied. The presence of Cryptosporidium species seldom described in humans may be, otherwise, important for the wild fauna as these animals are a source of infection and dissemination of this protozoan to other animal species. The impact and magnitude of infection by C. andersoni in wild ruminants and C. canis in wild canids have to be assessed in future studies to better understand the actual importance of these species in this region.

O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de Cryptosporidium, em animais domésticos de propriedades rurais ao redor de fragmentos de mata Atlântica de interior no município de Teodoro Sampaio, por exame convencional de flutuação em solução de sacarose, seguido de caracterização molecular dos parasitas através do sequenciamento dos produtos amplificados na PCR do gene SSU rRNA. Foram coletadas amostras fecais de animais domésticos criados para subsistência e estimação nas propriedades rurais do entorno de três fragmentos florestais. Amostras de bovinos (197), equinos (63), suínos (25), ovinos (11) e cães (28) foram coletadas de 98 propriedades rurais. A ocorrência de Cryptosporidium para a espécie bovina foi de 3,0 por cento (6/197); para os cães, de 10,7 por cento (3/28); e para os demais animais os resultados foram negativos. Todas as sequências obtidas das seis amostras de bovinos apresentaram identidade molecular com Cryptosporidium andersoni, enquanto as sequências oriundas de amostras de fezes de cães revelaram-se similares ao C. canis. A ocorrência do Cryptosporidium entre os animais estudados foi baixa. Diante dos resultados do presente estudo, o ciclo zoonótico da criptosporidiose parece ter menos importância nesta região. A presença de espécies de Cryptosporidium ainda pouco relatadas em humanos pode ser, por outro lado, importante para a fauna silvestre, uma vez que estes animais podem ser considerados como uma fonte de infecção e disseminação deste protozoário. O impacto e a magnitude da infecção de C. andersoni, em ruminantes selvagens, e de C. canis, em cães silvestres, deve ser avaliado em estudos futuros, com intuito de verificar a real importância dessas espécies nesta região.

Molecular characterization of Cryptosporidium spp. from HIV infected patients from an urban area of Brazil / Caracterização molecular de Cryptosporidium spp. de pacientes de área urbana do Brasil infectados por HIV

Cryptosporidium spp. are important cause of enteric disease in humans, but may also infect animals. This study describes the relative frequency of several Cryptosporidium species found in human specimens from HIV infected patients in the São Paulo municipality obtained from January to July 2007. Sequence analysis of the products of nested-PCR based on small subunit rRNA and Cryptosporidium oocyst wall protein coding genes revealed 17 (63.0 percent) isolates of C. hominis, four (14.8 percent) C. parvum, five (18.5 percent) C. felis and one (3.7 percent) C. canis. These findings suggest that, in urban environments of Brazil, the cat adapted C. felis may play a potential role in the zoonotic transmission of cryptosporidiosis whereas the anthroponotic transmission of cryptosporidiosis caused by C. hominis seems to predominate.

Cryptosporidium spp. são importantes causas de doenças entéricas em humanos, mas podem também ser encontrados em animais. O presente estudo descreve a frequência relativa de diversas espécies de Cryptosporidium em amostras de humanos da cidade de São Paulo, Brasil, obtidas de janeiro a julho de 2007. Análises de sequências de produtos de nested PCR direcionadas ao genes codificadores da menor unidade ribosomal e da proteina de parede de oocistos revelaram 17 (63,0 por cento) isolados de C. hominis, quatro (14,8 por cento) C. parvum, cinco (18,5 por cento) C. felis, e um (3,7 por cento) C. canis. Estes resultados sugerem que, em ambientes urbanos no Brasil, o genótipo adaptado ao gato pode desempenhar potencial papel na transmissão zoonótica de criptosporidiose, enquanto a transmissão antroponótica da criptosporidiose causada pelo C. hominis parece predominar.

Antibody dynamics during gestation in cows naturally infected with Neospora caninum from four dairy herds in Brazil / Dinâmica de anticorpos durante a gestação em vacas naturalmente infectadas com Neospora caninum de quatro rebanhos leiteiros no Brasil

Neospora caninum has been described as an important cause of abortion in bovine worldwide. The objective of the present study was to characterize patterns of antibody dynamics during gestation in dairy cows naturally infected with N. caninum. Twelve N. caninum naturally infected cows were selected from four dairy herds from Brazil and blood samples were monthly collected during pregnancy. Serum were tested for antibodies against N. caninum by Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT). During this period, all cows remained clinically normal and gave birth to healthy calves. The cows remained seropositives during the study and N. caninum IFAT titers ranged from 100 to 12,800; only animal 234 presented one negative result in the first month of pregnancy. Significant differences of N. caninum IFAT titers were found between months from 1 to 9 of pregnancy bythe Friedman Test (P<0.001). The statistical analysis showed an increase of N. caninum antibody titers from second and third trimester of pregnancy in relation to first trimester. High titers were observed in few cows after month fifth of pregnancy. This study showed a variation of specific antibody levels in seropositive cows during different gestational periods. The highest values were observed during the second and third trimester. The antibody increase after the fifth month of gestation was not associated to abortion.

Neospora caninum é descrito como uma importante causa de abortamento em bovinos por todo o mundo. O objetivo do presente estudo foi caracterizar o padrão da dinâmica de anticorpos durante a gestação em vacas leiteiras infectadas naturalmente por N. caninum. Doze vacas gestantes infectadas naturalmente com N.caninum foram selecionadas de quatro rebanhos leiteiros do Brasil e amostras de sangue foram mensalmente colhidas da concepção até o parto das vacas. Soros foram testados para anticorpos contra N. caninum pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Durante a gestação, todas as vacas permaneceram clinicamente normais e geraram bezerros saudáveis. As vacas permaneceram soropositivas durante o estudo e títulos de anticorpos anti-N.caninum variaram de 100 a 12.800; somente o animal 234 apresentou um resultado negativo no primeiro mês de gestação. Diferenças significativas dos títulos da RIFI para N. caninum foram encontradas entre os meses de 1 a 9 de gestação pelo Teste de Friedman (P<0,001). As análises estatísticas mostraram um aumento dos títulos de anticorpos anti-N. caninum no segundo e terceiro trimestre de gestação em relação ao primeiro trimestre. Altos títulos de anticorpos foram observados em algumas vacas após o mês cinco de gestação. Este estudo mostrou variação dos níveis de anticorpos em vacas soropositivas durante diferentes períodos gestacionais. Altos títulos foram observados durante o segundo e terceiro trimestre e o aumento dos títulos de anticorpos após o quinto mês de gestação não foi associado a abortamentos.

Perfil sorológico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em bezerros livres da infecção / Serological profile of colostral antibodies to Neospora caninum in infection free calves

Neospora caninum é considerado a principal causa de aborto bovino mundial. O diagnóstico laboratorial correto é muito importante para identificar os animais infectados e para aplicar medidas de controle. O objetivo deste trabalho foi mostrar o declínio de anticorpos colostral em bezerros. Este estudo empregou oito bezerros holandeses, recém-nascidos, machos, descendentes de vacas soronegativas para N caninum. Amostra de sangue pré-colostral foram colhidas destes bezerros e todos estavam soronegativos pra N. caninum. Estes bezerros foram alimentados com dois litros de um pool de colostro de vacas soropositivas dentro de duas horas após o nascimento. Amostras de sangue dos bezerros foram colhidas semanalmente até os animais soroconverterem negativo. As amostras foram testadas para anticorpos de N. caninum usando teste de imunofluorescência indireta nos títulos de 1:50; 1: 100 e 1:200. Os resultados mostraram que 3 dos 8 bezerros não soroconverteram e foram excluídos do estudo. Os restantes cinco bezerros soroconverteram em todos os títulos no quinto dia após a inoculação. No título 1:50, um bezerro permaneceu positivo por 21 semanas, dois por 20 semanas e um por 13 semanas. No título 1:100, um bezerro foi positivo por 15 semanas e o restante quatro bezerros por 13 semanas. No título 1:200, cada bezerro foi positivo por 1; 7; 12; 12 e 13 semanas, respectivamente. Estes resultados demonstram que o anticorpo colostral para N. caninum pode permanecer até 21 semanas após o nascimento nos bezerros e é muito importante excluir os bezerros até quatro meses de idade nos estudos de soroprevalência para impedir os resultados falso-positivos.

Neospora caninum is considered the main cause of bovine abortion worldwide. The correct laboratorial diagnose is very important to identify the infected animals and to apply control measure. The objetive of this study was to show the persistence period of colostral antibodies in calves. Eight newborn Holstein Friesan calves, males, were selected from N. caninum soronegative dams. Pre-colostral blood samples were collected of these calves and all of them were seronegative to N. caninum. They were fed with two liters of pooled colostrum from seropositive cows within two hours after birth. Blood samples were collected and tested weekly until the animals turned negative. Serum samples were tested for antibodies to N. caninum using indirect fluorescence antibody test at 1:50; 1: 100 and 1:200 dilutions. Antibodies were not detected from three out of eight calves and they were excluded from the study. The remaining 5 calves seroconverted in all dilutions at the fifth day after colostrums ingestion. At 1:50 dilution, one calf remained positive for 21 weeks, two for 20 weeks and one for 13 weeks. At 1:100, one calf was positive for 15 weeks and the remaining 4 calves for 13 weeks. At 1:200, each calf was positive for 1, 7, 12, 12 and 13 weeks, respectively. These results demonstrate that the colostral antibody to N. caninum may persist until 21 weeks after birth in calves and it?s very important to exclud the calves at the first month of age in the seroprevalence studies to avoid the false-positive results.