Adaptación y optimización de un método de lectura por fluorometría en el modelo farmacológico in vitro de cultivo de Plasmodium falciparum / Adaptation and optimization of a fluorometric reading method, in the in vitro pharmacological model of Plasmodium falciparum culture

El modelo farmacológico de cultivo in vitro de P. falciparum es crucial en el tamizaje inicial de sustancias o extractos de plantas con posible actividad antiplasmodial. La densidad parasitaria puede determinarse mediante variadas metodologías, sin embargo, se han descrito numerosas ventajas y desventajas asociadas a cada una de ellas. Se evaluaron el tiempo de incubación necesario para la tinción y el uso de cultivos asincrónicos o sincrónicos en busca de valores óptimos; evidenciando un tiempo óptimo de 2 h, y límites de detección y cuantificación, menores en cultivos asincrónicos. Empleando las cepas FCR3 y FCB2 se evidenció un ruido de fondo de 12% y 38% respectivamente; la linealidad mostró una buena correlación, r² de 0,9644 (FCR3) y 0,9841 (FCB2) y una pendiente de 1761,8 y 852,4 respectivamente. Además, se comprobó había concordancia entre los métodos, fluorométrico con SYBR Green I (SYBRG I) y microscópico con Giemsa, con diferencia media de 0,00002% y 0,09109% para FCR3 y FCB2 respectivamente. Los límites de detección y cuantificación fueron 0,5% y 1,5% de parasitemia. El factor Z con FCB2 fue 0,376, en tanto que con FCR3 alcanzó 0,702. La concentración inhibitoria 50 (CI50) frente a P. falciparum FCR3, generada por cloroquina (CQ) fue 0,37 mcg/mL por microscopía y 0,35 mcg/mL por fluorometría. Nuestros hallazgos sugieren que el ensayo de fluorescencia con SYBRG I, empleando fluorómetros comúnmente disponibles en muchos laboratorios, es preciso, robusto, rápido y exacto; para la evaluación in vitro de sustancias o extractos con posible actividad antiplasmodial.

The in vitro pharmacological model of P. falciparum culture is crucial in the initial screening for substances or plant extracts with possible antiplasmodial activity. The parasite density can be determined by varied methods, however have been described numerous advantages and disadvantages associated with each of them. The incubation time required for staining and the use of synchronous or asynchronous cultures were assessed for optimal settings; showing optimal time of 2 h, and lower limits of detection and quantification in asynchronous cultures. Employing the FCB2 and FCR3 strains, was evidenced a background noise of 12% and 38% respectively; linearity showed a good correlation, r² of 0.9644 (FCR3) and 0.9841 (FCB2) and a slope of 1761.8 and 852.4, respectively. It was evidenced agreement between the methods, fluorometric with SYBR Green I (SYBRG I) and microscopic with Giemsa, the mean difference was 0.00002% and 0.09109% respectively for FCR3 and FCB2, The limits of detection and quantification were 0.5% and 1.5% of parasitaemia. The Z factor was 0.376 with FCB2, whereas with FCR3 reached 0.702. The inhibitory concentration 50 (IC50) against P. falciparum FCR3, generated by chloroquine (CQ), was 0.37 mcg/mL by microscopy and 0.35 mcg/mL by fluorometry. Our findings suggest that the SYBRG I fluorescence based assay, by using fluorometers commonly available in many laboratories, is precise, robust, fast and accurate; for the in vitro evaluation of substances or extracts with possible antiplasmodial activity.

Actividad antiplasmódica y hemolítica de extractos etanólicos y fracciones obtenidas de Cecropia membranacea Trécul. y Cecropia metensis Cuatrec. (sin. Cecropia peltata var. candida Velásquez) / Antiplasmodial and haemolytic activity of ethanolic extracts and fractions obtained from Cecropia membranacea Trécul. and Cecropia metensis Cuatrec. (syn. Cecropia peltata var. candida Velásquez)

Introducción: el estudio de las plantas medicinales ha permitido el desarrollo de productos fitoterapéuticos y fármacos para el tratamiento de diferentes enfermedades, entre estas la malaria. En Brasil las plantas usadas en la medicina tradicional por sus antecedentes como febrífugos o antimaláricos incluyen Cecropia hololeuca, Cecropia sp., Cecropia pachystachya y Cecropia glaziovii. Aún no ha sido comprobada la actividad antimalárica de Cecropia membranacea y Cecropia metensis, especies distribuidas en América Central y América del Sur, incluida Colombia. Objetivo: evaluar la actividad antiplasmódica frente a Plasmodium falciparum de extractos y fracciones de Cecropia membranacea y Cecropia metensis. Métodos: a partir de las hojas con peciolo de las dos especies se prepararon extractos etanólicos utilizando el método de percolación, se llevó a cabo el fraccionamiento del extracto etanólico, de cada especie, utilizando un sistema de partición con solventes de diferente polaridad (éter de petróleo, acetato de etilo, n-butanol y agua). Con los extractos y fracciones obtenidas se realizó un estudio fitoquímico preliminar. La actividad de extractos y fracciones se evaluó in vitro frente a Plasmodium falciparum FCB-2 y se estudió la actividad hemolítica. Resultados: las fracciones acetato de etilo de Cecropia membranacea (CI50 10,12 µg/mL) y Cecropia metensis (CI50 12,52 µg/mL) presentaron actividad antiplasmódica sin generar daño a la membrana de la célula hospedera (CH50> 1 000 µg/mL). La evaluación fitoquímica evidenció en estas fracciones una mezcla de compuestos tipo esteroide, terpénico y flavonoide. Conclusiones: las fracciones acetato de etilo de Cecropia membranacea y Cecropia metensis presentan actividad antiplasmódica promisoria, no asociada con propiedades líticas sobre las células eritrocitarias hospederas. Las dos especies son de interés para profundizar su estudio, en cuanto a la actividad antimalárica y composición fitoquímica(AU)

Introduction: the study of medicinal plants has led to the development of phytotherapeutic products and drugs for the treatment of various diseases, including malaria. Among the plants used in Brazilian traditional medicine for their febrifuge and antimalarial effects are Cecropia hololeuca, Cecropia sp., Cecropia pachystachya and Cecropia glaziovii. The antimalarial activity of Cecropia membranacea and Cecropia metensis has not been demonstrated. These two species may be found in Central and South America, including Colombia. Objective: evaluate the antiplasmodial activity of extracts and fractions of Cecropia membranacea and Cecropia metensis against Plasmodium falciparum. Methods: ethanolic extracts were obtained from petiolate leaves of the two species using the percolation method. The ethanolic extract of each species was then fractionated, using a partition system based on solvents of varying polarity (petroleum ether, ethyl acetate, n-butanol and water). The extracts and fractions obtained underwent preliminary phytochemical examination. Extracts and fractions were evaluated for their in vitro antiplasmodial activity against Plasmodium falciparum FCB-2, as well as for their haemolytic activity. Results: ethyl acetate fractions of Cecropia membranacea (IC50 10.12 µg/mL) and Cecropia metensis (IC50 12.52 µg/mL) showed antiplasmodial activity without damaging the host cell membrane (HC50 >1000 µg/mL). Phytochemical evaluation of these fractions revealed a mixture of steroid, terpene and flavonoid compounds. Conclusions: ethyl acetate fractions of Cecropia membranacea and Cecropia metensis showed promising antiplasmodial activity, not associated to lytic properties, over erythrocyte host cells. The two species are good ground for further study of their antimalarial activity and phytochemical composition(AU)

Actividad antiplasmódica in vitro de Piper holtonii (cordoncillo) / In vitro antiplasmodial activity of Piper holtonii (cordoncillo)

Introducción: especies vegetales del género Piper (Piperaceae) han sido usadas en la medicina tradicional en diferentes regiones del mundo, incluida Latinoamérica para el tratamiento de enfermedades tropicales como la malaria. Objetivo: evaluar la actividad antiplasmódica del extracto etanólico y las fracciones de diferente polaridad de Piper holtonii C.DC. Métodos: la actividad antiplasmódica del extracto etanólico de las partes aéreas de Piper holtonii y de las fracciones hexánica, clorofórmica, metanólica, butanólica y acuosa, se evaluó sobre un cultivo de Plasmodium falciparum cepa FCB-2. Se determinó la actividad hemolítica y se caracterizaron fitoquímicamente cada una de las fracciones. Resultados: el extracto etanólico y las fracciones de baja polaridad presentaron actividad promisoria con valores de CI50 inferiores a 25 µg/mL. Conclusiones: los resultados de la actividad biológica de Piper holtonii permiten sugerir que los metabolitos de baja y media polaridad están relacionados con la actividad antiplasmódica de esta especie.

Introduction: plant species of the genus Piper (Piperaceae) have been used in traditional medicine in various regions of the world. In Latin America they have been used to treat tropical diseases such as malaria. Objective: evaluate the antiplasmodial activity of the ethanolic extract and fractions of varying polarity of Piper holtonii C. DC. Methods: evaluation was conducted of the antiplasmodial activity of ethanolic extract from aerial parts of Piper holtonii and of hexane, chloroform, methanol, buthanol and aqueous fractions on a Plasmodium falciparum strain FCB-2 culture. Hemolytic activity was determined and phytochemical characterization of each fraction was performed. Results: both the ethanolic extract and the low-polarity fractions displayed promising activity, with CI50 values below 25 µg/mL. Conclusions: results concerning the biological activity of Piper holtonii suggest that low- and medium-polarity metabolites are related to antiplasmodial activity in this species.

Condición de venta de analgésicos antiinflamatorios no esteroides, legalmente autorizados para su comercialización en Colombia. Estrategias de uso racional / Condition of sale of non-steroidal anti-inflammatory drugs authorized for marketing in Colombia. Strategy of rational use

La condición de comercialización (venta libre, con fórmula médica, bajo control especial o para uso hospitalario exclusivamente) determina las circunstancias en las cuales puede ser publicitado y comercializado un medicamento. La venta libre no involucra una consulta al equipo de salud, quienes no participan de la selección del medicamento, su dispensación ni seguimiento fármaco-terapéutico. El presente trabajo, mediante un estudio observacional descriptivo de corte transversal desarrollado partiendo del universo de registros sanitarios de medicamentos en Colombia, identifica y describe las variaciones en la condición de venta de analgésicos antiinflamatorios no esteroides. Para este grupo farmacológico, de gran consumo en el país, predominan la modalidad de registro "fabricar y vender", las formas farmacéuticas sólidas no estériles, la condición de venta con fórmula médica y la vía de administración enteral; asimismo, predomina como principio activo el diclofenaco, seguido de ibuprofeno y piroxicam. Ocho de los principios activos de este grupo farmacológico poseen doble condición de venta (venta sin prescripción facultativa o libre y venta con fórmula médica) y alcanzan el 70% de las autorizaciones de comercialización de aines en Colombia. Se evidencia una relación entre la cantidad principio activo por unidad posológica y la condición de venta autorizada, relación que no es evidente con respecto a la indicación.

The commercialization status (otc, under medical prescription, under special monitoring or for hospital use only) sets out the circumstances under which it may be publicized and marketed a drug. The otc does not involve consulting the health team, who do not participate in the selection of the drug, its dispensing or therapeutic monitoring. Present work through an observational, descriptive, cross-sectional study from the universe of Colombian drug approvals, identify and describe the variations in the condition of sale of non-steroidal anti-inflammatory drugs. For this pharmacological group, widely consumed in the country, dominated the modality "make and sell", the non-sterile solid dosage forms, the condition of sale under prescription and the enteric route of administration, likewise predominate as active substance diclofenac, followed by ibuprofen and piroxicam. Eight of the active ingredients of this pharmacological group have double condition of sale (otc and under medical prescription) achieving 70% of marketing authorization for nsaids in Colombia. It is evidenced a relationship between the amount of active substance per dosage unit and the commercialization status, a relationship that is not evident with respect to the indication.

Evaluación de la opinión de estudiantes de farmacia sobre la implementación de alternativas basadas en computador para el proceso enseñanza: aprendizaje de la farmacología experimental / Pharmacy student`s opinion about the implementation of computer based alternatives on experimental pharmacology learning-teaching process

Antecedentes. Actualmente el uso del animal de laboratorio en educación está siendo eliminado a nivel mundial y se buscan otras estrategias que permitan sustituirlo, pues no hay evidencia de que los estudiantes formados con métodos alternativos sean menos calificados. Objetivo. Contrastar la opinión de los estudiantes de farmacología, carrera de Farmacia Universidad Nacional de Colombia, sobre la implementación de un software interactivo en comparación con el montaje de órgano aislado. Material y métodos. Se comparó un recurso pedagógico usando animales en el laboratorio, con otro recurso basado en un software interactivo, para la práctica de “órgano aislado en intestino de roedor” por medio de la aplicación de una encuesta a estudiantes de séptimo semestre. Resultados. La opinión de los estudiantes, en una escala de uno a cinco, es que existen ventajas del montaje de órgano aislado sobre el software interactivo (p menor que 0,05) en cuanto al aporte de información (mediana 5:4 respectivamente), la integración de conocimientos (mediana 5:4) y la interpretación de datos inesperados (mediana 4:3). En cuanto a la claridad de la información obtenida la apreciación de los estudiantes muestra que no existen diferencias entre las dos alternativas (mediana 4). La utilización del animal involucra un costo ético (67 por ciento) que no se da con el empleo del software (27 por ciento). Finalmente es muy alta la aceptación del software interactivo como una ayuda eficaz para el aprendizaje de la farmacología (77 por ciento) y es notorio el interés de los estudiantes en que éstas alternativas sean implementadas en otras asignaturas (79 por ciento)...

Background. Nowadays the usage of lab animals in education is being eliminated all around the world. Other strategies are looked for to replace it because there is not any evidence that students trained using other alternatives are less qualified. Objective. The purpose of this research work was to contrast the opinion of the pharmacology students ofPharmacy, Universidad Nacional de Colombia, about the implementation of interactive software compared to theisolated tissue technique. Material and methods. This study compared teachingmaterial which uses lab animals to another one based on an interactive software for the isolated tissue of rodentintestine by means of a survey applied to the seven semester students.Results. Student’s opinion, in scale 1 to 5, is that there are advantages of the isolated tissue technique over theinteractive software (p<0,05) with respect to information contribution (median 5:4 respectively), knowledgeintegration (median 5:4) and unexpected results interpretation (median 4:3). In relation to obtainedinformation clarity, student’s opinion shows that there aren’t differences between the two alternatives (median4). The use of laboratory animal implies an ethical cost (67%) that doesn’t exist with the use of interactive software(27%). Finally, is high the acceptance of interactive software as an effective tool in pharmacology learning (77%) and is noticeable the student’s interest about this alternative being used in other courses (79%)...