In-house standardization and validation of a multiplex RT-PCR assay for the detection of 13 respiratory viruses / Estandarización interna y validación de un ensayo RT-PRC múltiple para la detección de 13 virus respiratorios

Background. Multiplex real time PCR is increasingly used to diagnose respiratory viruses and has shown to be superior to traditional methods, such as culture and antigen detection. Objective. Standardization and validation of a multiplex real-time PCR assay for the detection of 13 respiratory viruses. Methods. The assay was validated using RNA control targets and comparing results to single-target PCR's. Results. Using RNA controls the multiplex format was found to be as sensitive and specific as the single-target PCRs, and no competition was observed between targets. The efficiencies for most of the reactions were approximately 90%, but a lower efficiency was found for Parainfluenza 2 with a rate of amplification in each cycle of 86.63%. On the other hand, a higher efficiency was observed in respiratory syncytial virus A and respiratory syncytial virus B ((93.07% each). Conclusion: This multiplex RT-PCR format shows an adequate efficiency, demonstrating an excellent sensitivity, specificity and repeatability for all the studied respiratory viruses.

Antecedentes. PRC múltiple en tiempo real es usada cada vez más para el diagnóstico de virus respiratorios y ha mostrado ser superior a metodos tradicionales, como cultivo y detección de antígeno. Objetivo. Estandarizar y validar una PRC múltiple en tiempo real para la detección de 13 virus respiratorios. Metodos. El ensayo fue realizado usando blanco de RNA control y comparando los resultados a blancos únicos de PCR. Resultados. Usando el RNA control, el formato de multiplex era tan sensible y específico como la PCR. Las eficiencias para la mayoría de las reacciones de aproximadamente el 90%, pero una eficiencia baja fue encontrada para influenza 2 con una tasa de amplificación en cada ciclo de 86.63%. Por otra parte, una mayor eficiencia fue observada en virus sincitial respitario A y B (93, 67% cada uno). Conclusión. Este formato RT-PCR múltiple muestra una adecuada eficiencia, demostrando un excelente especificidad y reproducibilidad para todos los virus respiratorios estudiados.

Amplificación del proto-oncogén HER-2/neu asociada a la infección por VPH de bajo riesgo en citología exfoliativa cervical / HER-2/neu prot-oncogen amplification related to low risk VPH infection in cervical exfoliative cytology

Se analizaron 69 muestras positivas para el virus papiloma humano (VPH) tipos -6, -16 y -18, y 24 muestras con citología cervical normal negativas para el VPH como grupo control. El análisis de la amplificación génica del proto-oncogén HER-2/neu se realizó utilizando la técnica de coamplificación con locus de referencia. Se encontró una asociación entre la amplificación del gen HER-2/neu y el grupo viral de "bajo riesgo" (VPH-6) (p < 0.005). Dentro de este grupo, se observó una asociación entre la amplificación del proto-oncogén y el status citopatológico CIN I (p < 0.01). Debido a que la mayoría de las muestras CIN I analizadas presentaron un patrón coilocítico, la amplificación de HER-2/neu parecería estar relacionada con este tipo de alteración celular. Por otra parte, sería importante estudiar la amplificación génica y la expresión de HER-2/neu en los diferentes estadios de las neoplasias intraepiteliales cervicales a fin de poder evaluar su papel en la progresión del cáncer cervical.

Análisis de la prevalencia de mutaciones puntuales en el codón 12 del oncogen K-ras en muestras no cancerosas de citología exfoliativa cervical positivas para VPG tipo 16 o 18 / Preavlence of K-ras codo 12 point mutations in non cancerous cervical samples positives for VPH 16 or 18

Se estudiaron 91 muestras no cancerosas de citilogía exfoliativa cérvico-vaginal positivas para VPH 16 ó 18 y 27 muestras negativas como grupo control. Se analizó la prevalencia de las mutaciones en el codón 12 del gen K-ras utilizando la técnica del PCR con enriquecimiento alélico. Se encontró que el 17,58 por ciento de las muestras estudiadas presentaban mutaciones en ese codón. Se encontraron diferencias significativas entre la frecuencia de mutación en las muestras positivas para VPH y el grupo control (p<0,01). Por otra parte, no se encontraron diferencias significativas en la prevalencia de mutaciones en el gen K-ras entre ambos tipos de VPH. La presencia de mutaciones en el gen K-ras en muestras citologícas no cancerosas abre un nuevo interrogante sobre el papel de las mutaciones en proto-oncogenes y el desarrollo del cáncer cervical