Falha na implantação de um novo algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 em população de risco / Lack in introducing a new algorithm of laboratorial tests for detecting HTLV-1 and HTLV-2 infections in at-risk population

Em vista dos problemas detectados no diagnóstico de infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e -2 (HTLV-1 e HTLV-2) em casuística encaminhada ao Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, foi proposto um novo algoritmo de testes laboratoriais que utiliza duas amostras de sangue seqüenciais. Na primeira o sangue é coletado em tubo seco e feita triagem sorológica com dois ensaios imunoenzimáticos (EIAs). Na segunda, o sangue é coletado em tubo contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra acético (EDTA) para a repetição dos EIAs e para os testes confirmatórios de Western blot (WB) e reação em cadeia da polimerase (PCR). Os resultados obtidos com 313 amostras de sangue mostraram ineficiência do algoritmo, pois nos casos EIA reagentes, apenas 25% tiveram uma segunda amostra de sangue coletada e destas, apenas três em EDTA. Portanto, não foi possível comparar o desempenho da PCR em relação ao WB. Um algoritmo simples, de coleta única de sangue em tubo contendo EDTA foi proposto e vem sendo utilizado para a triagem e para os testes confirmatórios.

Pesquisa de anticorpos para Leishamania spp em amostras de sangue de cães da região de Marília/SP, Brasil no período de janeiro de 1999 - junho de 2005 / Anti-Leishmania spp antibodies survey in blood samples from dogs from region of Marília/SP, Brazil in the period from January 1999 to june 2005

No período de 1999 a 2003, foi realizado o inquérito sorológico pesquisa de anticorpos anti-leishmania spp em amostras de soro coletadas de cães de 38 municípios da região centro-oeste de São Paulo (Marília). Foram avaliadas as frequência de reatividade para anticorpos anti-Leishmania spp detectadas em amostras de soros de cães oriundos de três municípios em dois períodos distintos (1999-2003 e 2004-2005). No primeiro período, a detecção de anticorpos específicos foi por meio do teste de imunofluorescência indireta(IFI); no segundo período, foi utilizado o ensaio imunoenzimático (EIE)como teste confirmatótio. A investigação efetuada no período de 1999-2003 sugere a ausência da circulação da Leishmania naquela área. O inquérito realizado na população...

Anti-Leishmania spp antibodies survey in blood samples from dogs from region of Marília/SP, Brazil in the period from January 1999 to June 2005 / Pesquisa de anticorpos para Leishmania spp em amostras de sangue de cães da região de Marília/SP, Brasil no período de janeiro de 1999 - junho de 2005

The data resulted from a survey on anti-Leishmania spp antibodies in serum samples from dogs from 38 municipalities located in the mid-west region of São Paulo State (Marília), during the period from 1999 to 2003, were assessed. Also, the rates of these antibodies detection in dogs serum samples from three municipalities at two distinct periods (1999 - 2003 and 2004 - 2005) were analyzed. From 1999 to 2003, the anti- Leishmania spp antibodies were determined by indirect immunofluorescence assay (IFA); and in the second period of time, enzyme immunoassay (EIA) was used for screening, and IFA as confirmatory testing. The antibodies survey carried out in the period of 1999-2003 suggests that no circulation of Leishmania occurred in that area. Canine surveys conducted in Adamantina, Guarantã and Lucélia municipalities from 2004 to 2005 indicate the occurrence this parasite in the investigated region, as the specific antibodies were detected in 14%, 8%, and 2.5% of dogs serum samples, respectively. Up to April 2008, seven municipalities in Marília region recorded human cases of AVL, and two registered the occurrence of the disease only in dogs; the related vector was detected in at least five municipalities. The increase of AVL cases in the mid-west region of Sao Paulo state certainly requires an improved prevention program and needs to strengthen this disease control activities.

No período de 1999 a 2003, foi realizado o inquérito sorológico pesquisa de anticorpos anti-Leishmania spp em amostras de soro coletadas de cães de 38 municípios da região centro-oeste do estado de São Paulo (Marília). Foram avaliadas as freqüências de reatividade para anticorpos anti-Leishmania spp detectadas em amostras de soros de cães oriundos de três municípios em dois períodos distintos (1999 2003 e 2004 2005). No primeiro período, a detecção de anticorpos específicos foi realizada por meio do teste de imunofluorescência indireta (IFI); no segundo período, foi utilizado o ensaio imunoenzimático (EIE) como teste de triagem e a reação de IFI como teste confirmatório. A investigação efetuada no período de 1999-2003 sugere a ausência de circulação da Leishmania naquela área. O inquérito realizado na população canina nas cidades de Adamantina, Guarantã e Lucélia no período de 2004 a 2005 indica a introdução deste parasita na região, em função da ocorrência de soro positividade para anticorpos anti-Leishmania spp, respectivamente em 14%, 8% e 2,5% das amostras. Até abril de 2008, sete municípios da região de Marília notificaram casos humanos de LVA, dois registraram ocorrência da doença somente em cães; o vetor foi detectado em pelo menos cinco municípios. A expansão da LVA na região centro-oeste do território paulista requer certamente a melhoria das atividades de prevenção

Performances of HTLV serological tests in diagnosing HTLV infection in high-risk population of São Paulo, Brazil

Testing problems in diagnosing human T-lymphotropic virus (HTLV) infection, mostly HTLV-II, have been documented in HIV/AIDS patients. Since December 1998, the Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz (IAL) offers HTLV-I/II serology to Public Health Units that attend HTLV high-risk individuals. Two thousand, three hundred and twelve serum samples: 1,393 from AIDS Reference Centers (Group I), and 919 from HTLV out-patient clinics (Group II) were sent to IAL for HTLV-I/II antibodies detection. The majority of them were screened by two enzyme immunoassays (EIAs), and confirmed by Western Blot (WB 2.4, Genelabs). Seven different EIA kits were employed during the period, and according to WB results, the best performance was obtained by EIAs that contain HTLV-I and HTLV-II viral lysates and rgp21 as antigens. Neither 1st and 2nd, nor 3rd generation EIA kits were 100 percent sensitive in detecting truly HTLV-I/II reactive samples. HTLV-I and HTLV-II prevalence rates of 3.3 percent and 2.5 percent were detected in Group I, and of 9.6 percent and 3.6 percent in Group II, respectively. High percentages of HTLV-seroindeterminate WB sera were detected in both Groups. The algorithm testing to be employed in HTLV high-risk population from São Paulo, Brazil, needs the use of two EIA kits of different formats and compounds as screening, and because of high seroindeterminate WB, may be another confirmatory assay.

Problemas nos testes diagnósticos de infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas (HTLV), principalmente HTLV-II, têm sido observados em pacientes com HIV/Aids. Desde Dezembro de 1998, a Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (IAL) oferece a sorologia para HTLV-I/II para Serviços de Saúde Pública que atendem populações consideradas de risco para esta infecção. Duas mil trezentas e doze amostras de soro: 1.393 de Centros de Referência em Aids (Grupo I) e 919 de Clínicas de Especialidade em HTLV (Grupo II) foram encaminhadas para o IAL para a pesquisa de anticorpos anti-HTLV-I/II. A maioria delas foram testadas por dois ensaios imunoenzimáticos (EIAs) e confirmadas por Western Blot (WB 2.4, Genelabs). Sete kits diferentes de EIAs foram empregados durante o período e de acordo com os resultados do WB a melhor performance foi obtida com os EIAs que continham lisado viral dos HTLV-I e -II e a rgp21 como antígenos. Nenhum kit de EIA de 1ª, 2ª ou 3ª geração foi 100 por cento sensível para detectar todas as amostras verdadeiramente HTLV-I/II reagentes. A prevalência de HTLV-I e HTLV-II, respectivamente, foi de 3,3 por cento e 2,5 por cento no Grupo I e de 9,6 por cento e 3,6 por cento no Grupo II. Em ambos os Grupos, foram detectadas altas percentagens de soros com padrão indeterminado no WB. O algoritmo de testes sorológicos para ser usado em população de alto risco para HTLV de São Paulo, Brasil, necessita de dois kits EIAs de princípios e composição diferentes para a triagem sorológica e, pelo elevado número de WB indeterminado, talvez de um outro teste confirmatório.

Otimização e avaliação do ensaio de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos anti-herpesvírus humano 8 (HHV-8) usando sangue colhido em papel de filtro / Standardization of the indirect immunofluorescence assay to search for human herpesvirus 8 (HHV-8) antibodies using blood collected on filter paper

O presente trabalho objetivou a otimização e a avaliação da coleta de sangue em papel de filtro para ser usada em levantamentos soroepidemiológicos de infecção por herpes vírus humano 8 (HHV-8). Foram utilizados os ensaios de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico para a pesquisa de anticorposanti-HHV-8 em amostras de sangue colhidas em membrana Schleicher Schuell de 28 pacientes com sarcomade Kaposi (SK)/AIDS e 10 indivíduos sadios sem SK, dos quais os soros haviam sido anteriormente usados na padronização destas técnicas. Lâminas contendo células da linhagem BCBL-1 estimuladas ou não com éster de forbol, e luatos de sangue e conjugado anti-imunoglobulina humana marcado com fluor esceína foram empregados nas reações sorológicas e, as reações e os critérios de positividade seguiram os previamente estabelecidos na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz. Foi detectada fluorescência verde-amarelada na maioria das células nas diluições 1:50 e 1:100. Isto dificultou a leitura da IFI-Lítico, principalmente em diluições baixas, mas não interferiu na IFI-LANA cujo padrão pontilhado no núcleo coexistiu com a fluorescência de membrana. À medida que se seguiram as diluições, houve desaparecimento da inespecificidade e a leitura prosseguiu normalmente. Houve concordância de resultados positivos e negativos, com diferenças mínimas nos títulos de anticorpos. Os resultados obtidos viabilizam a coleta de sangue em papel para estudos epidemiológicos de infecção por HHV-8.

Levantamento do perfil sorológico de infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV-2) em casuística encaminhada ao Instituto Adolfo Lutz de São Paulo para análise / Serological patterns for human T-lymphotropic virus type 1 and 2 infections (HTLV-1 and HTLV-2) in serum samples sent to Instituto Adolfo Lutz or analysis

Problemas nos testes diagnósticos de infecção pelo vírus linfotrópicos de células T humanas (HTLV), principalmente HTLV-2, tem sido observados em pacientes com HIV/Aids. Desde Dezembro de 1998, a Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo (IAL) oferece esta sorologia para Serviços de Saúde Pública que atendem populações consideradas de risco para esta infecção. Com o objetivo de verificar o perfil sorológico da casuística encaminhada ao IAL para análise, foi realizado o presente estudo. No período de dezembro de 1998 a março de 2006, 2.312 amostras de soro: 1.393 de Centros de Referência e Treinamento em Aids (CRTA - Grupo I; 411 mulheres e 982 homens) e 919 de Ambulatórios de Especialidades do SUS (AE - Grupo II; 381 mulheres e 539 homens) foram avaliadas quanto à presença de anticorpos anti-HTLV-1/2. Hum mil oitocentos e cinquenta e sete soros (80,32%) foram testados por dois ensaios imunoenzimáticos (EIAs) e 455 (19,58%) por um EIA. Soros que resultaram reagentes em pelo menos um EIA foram confirmados por Western Blot (WB 2.4, Genelabs). Sete "kits" EIAs foram empregados durante o período. Os resultados obtidos mostraram infecção tanto por HTLV-1 como por HTLV-2 em ambos os Grupos e um grande número de soros com padrão indeterminado ao WB. Houve maior número de mulheres com sorologia positiva para o HTLV-1 no Grupo II (AE) e mais mulheres com sorologia positiva para o HTLV-2, no Grupo I (CRTA). A população masculina mostrou mais soros com padrão 2 indeterminado no WB, principalmente do Grupo II. Houve grande variabilidade de perfis de WB indeterminados com predomínio dos padrões GD21 e GD21, rgp46-II em soros do CRTA e dos padrões p24 e p19, em soros de pacientes de AE. Houve em avaliação longitudinal, soro confirmação para HTLV-1/2 em amostras de sangue independentemente de gênero e Grupo. Nenhum "kit" EIA de 1a , 2a ou 3a geração isoladamente foi capaz de detectar todos os soros verdadeiramente positivos para HTLV-1/2, sendo os de 3ª geração mais sensíveis e os de 2ª geração mais específicos e de melhor desempenho. Houve relação entre a quantidade de anticorpos (DO/Cut-off) e o "kit" empregado, com valores mais altos para os soros positivos para HTLV-1 quando avaliados pelos "kits" de 1a e 2a geração. Os resultados obtidos permitiram propor um algoritmo de testes de triagem para ser usado em Laboratórios de Saúde Pública do país que emprega dois "kits" EIA de composição antigênica e formatos diferentes, e sugerir outro teste confirmatório de infecção por HTLV1/2 em substituição ao WB (AU).

Testing problems in diagnosing human T-lymphotropic virus (HTLV) infection, mostly HTLV-2, have been documented in HIV/AIDS patients. Since December 1998, the Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz of São Paulo (IAL) has set in the HTLV1/2 serology to be available to Public Health Units that attend HTLV high-risk individuals, and under these circumstances the present study aimed to analyze and to discuss these serological results. From December 1998 to March 2006, 2,312 serum samples were tested for HTLV-1/2 antibodies: 1,393 sera from AIDS Reference Centers patients (Group I; 411 females and 982 males), and 919 sera from patients of HTLV out-patient clinics (Group II; 381 females and 539 males). One thousand eight hundred and fifty-seven sera (80.32%) were screened by two enzyme immunoassays (EIAs), and 455 (19.58%) by one EIA. Sera that resulted reactive on at least one EIA were confirmed by Western Blot (WB 2.4, Genelabs). Seven EIA kits were employed during the period. HTLV-1 and HTLV-2- seropositive results were detected in both Groups of patients along with high rate of HTLVseroindeterminate WB results. Higher rates of HTLV-1 infection were observed in females of Group II, and HTLV-2 among females of Group I. Males of Group II showed higher HTLV-seroindeterminate results. A large spectrum of indeterminate WB profiles was detected. GD21 and/or rgp46-II bands were more frequently detected in Group I, and p24 or p19 band in Group II. Neither 1st and 2nd, nor 3rd generation EIA kits were able to detect 4 all truly HTLV-1/2 positive samples, in spite of the best sensitivity of the 3rd generation EIA kits, and the best specificity and performance of the 2rd generation EIA kits. According to antibody titers (DO/Cut-off) some correlation was detected with the employed EIA kit, pointing to high antibodies titers among HTLV-1 positive samples tested by 1st and 2nd generation EIAs. The obtained results allow us to suggest an algorithm testing to be employed in Public Health Laboratory of São Paulo, Brazil, using two EIA kits of different formats and compounds as screening testing, and another confirmatory assay instead of WB (AU).

Levantamento do perfil sorológico de infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV-2) em casuística encaminhada ao Instituto Adolfo Lutz de São Paulo para análise / Survey of the serological profile of infection by human T-cell lymphotropic viruses types 1 and 2 (HTLV-1 and HTLV-2) in a sample sent to Instituto Adolfo Lutz in São Paulo for analysis

Problemas nos testes diagnósticos de infecção pelo vírus linfotrópicos de células T humanas (HTLV), principalmente HTLV-2, tem sido observados em pacientes com HIV/Aids. Desde Dezembro de 1998, a Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo (IAL) oferece esta sorologia para Serviços de Saúde Pública que atendem populações consideradas de risco para esta infecção. Com o objetivo de verificar o perfil sorológico da casuística encaminhada ao IAL para análise, foi realizado o presente estudo. No período de dezembro de 1998 a março de 2006, 2.312 amostras de soro: 1.393 de Centros de Referência e Treinamento em Aids (CRTA - Grupo I; 411 mulheres e 982 homens) e 919 de Ambulatórios de Especialidades do SUS (AE - Grupo II; 381 mulheres e 539 homens) foram avaliadas quanto à presença de anticorpos anti-HTLV-1/2. Hum mil oitocentos e cinqüenta e sete soros (80,32%) foram testados por dois ensaios imunoenzimáticos (EIAs) e 455 (19,58%) por um EIA. Soros que resultaram reagentes em pelo menos um EIA foram confirmados por Western Blot (WB 2.4, Genelabs). Sete "kits" EIAs foram empregados durante o período. Os resultados obtidos mostraram infecção tanto por HTLV-1 como por HTLV-2 em ambos os Grupos e um grande número de soros com padrão indeterminado ao WB. Houve maior número de mulheres com sorologia positiva para o HTLV-1 no Grupo II (AE) e mais mulheres com sorologia positiva para o HTLV-2, no Grupo I (CRTA). A população masculina mostrou mais soros com padrão 2 indeterminado no WB, principalmente do Grupo II. Houve grande variabilidade de perfis de WB indeterminados com predomínio dos padrões GD21 e GD21, rgp46-II em soros do CRTA e dos padrões p24 e p19, em soros de pacientes de AE. Houve em avaliação longitudinal, soroconfirmação para HTLV-1/2 em amostras de sangue independentemente de gênero e Grupo. Nenhum "kit" EIA de 1a , 2a ou 3a geração isoladamente foi capaz de detectar todos os soros verdadeiramente positivos para HTLV-1/2, sendo os de 3ª geração mais sensíveis e os de 2ª geração mais específicos e de melhor desempenho. Houve relação entre a quantidade de anticorpos (DO/Cut-off) e o "kit" empregado, com valores mais altos para os soros positivos para HTLV-1 quando avaliados pelos "kits" de 1a e 2a geração. Os resultados obtidos permitiram propor um algoritmo de testes de triagem para ser usado em Laboratórios de Saúde Pública do país que emprega dois "kits" EIA de composição antigênica e formatos diferentes, e sugerir outro teste confirmatório de infecção por HTLV1/2 em substituição ao WB.

Testing problems in diagnosing human T-lymphotropic virus (HTLV) infection, mostly HTLV-2, have been documented in HIV/AIDS patients. Since December 1998, the Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz of São Paulo (IAL) has set in the HTLV1/2 serology to be available to Public Health Units that attend HTLV high-risk individuals, and under these circumstances the present study aimed to analyze and to discuss these serological results. From December 1998 to March 2006, 2,312 serum samples were tested for HTLV-1/2 antibodies: 1,393 sera from AIDS Reference Centers patients (Group I; 411 females and 982 males), and 919 sera from patients of HTLV out-patient clinics (Group II; 381 females and 539 males). One thousand eight hundred and fifty-seven sera (80.32%) were screened by two enzyme immunoassays (EIAs), and 455 (19.58%) by one EIA. Sera that resulted reactive on at least one EIA were confirmed by Western Blot (WB 2.4, Genelabs). Seven EIA kits were employed during the period. HTLV-1 and HTLV-2- seropositive results were detected in both Groups of patients along with high rate of HTLVseroindeterminate WB results. Higher rates of HTLV-1 infection were observed in females of Group II, and HTLV-2 among females of Group I. Males of Group II showed higher HTLV-seroindeterminate results. A large spectrum of indeterminate WB profiles was detected. GD21 and/or rgp46-II bands were more frequently detected in Group I, and p24 or p19 band in Group II. Neither 1st and 2nd, nor 3rd generation EIA kits were able to detect 4 all truly HTLV-1/2 positive samples, in spite of the best sensitivity of the 3rd generation EIA kits, and the best specificity and performance of the 2rd generation EIA kits. According to antibody titers (DO/Cut-off) some correlation was detected with the employed EIA kit, pointing to high antibodies titers among HTLV-1 positive samples tested by 1st and 2nd generation EIAs. The obtained results allow us to suggest an algorithm testing to be employed in Public Health Laboratory of São Paulo, Brazil, using two EIA kits of different formats and compounds as screening testing, and another confirmatory assay instead of WB (AU).