In vitro culture of Neoechinorhynchus buttnerae (Acanthocephala: Neoechinorhynchidae): Influence of temperature and culture media / Cultivo in vitro de Neoechinorhynchus buttnerae (Acanthocephala: Neoechinorhynchidae): influência da temperatura e dos meios de cultura

Abstract Infection by the acantocephalan Neoechinorhynchus buttnerae is considered one of most important concerns for tambaqui fish (Colossoma macropomum ) production. Treatment strategies have been the focus of several in vivo studies; however, few studies have been undertaken on in vitro protocols for parasite maintenance. The aim of the present study was to develop the best in vitro culture condition for N. buttnerae to ensure its survival and adaptation out of the host to allow for the testing of substances to be used to control the parasite. To achieve this, parasites were collected from naturally infected fish and distributed in 6-well culture plates under the following treatments in triplicate: 0.9% NaCl, sterile tank water, L-15 Leibovitz culture medium, L-15 Leibovitz + agar 2% culture medium, RPMI 1640 culture medium, and RPMI 1640 + agar 2% culture medium. The plates containing the parasites were maintained at 24 °C, 28 °C, and 32 °C. The RPMI 1640 + agar 2% culture medium showed the best survival of 24 days at 24 °C. No body alterations such as swollen parasites, body deformation, dehydration and hardening were observed in the RPMI 1640 + 2% culture medium.

Resumo A infecção pelo acantocéfalo Neoechinorhynchus buttnerae é considerada uma das preocupações mais importantes para produção de tambaqui (Colossoma macropomum). Estratégias de tratamento têm sido o foco de vários estudos in vivo ; entretanto, poucos estudos foram realizados em protocolos in vitro para manutenção do parasito. O objetivo deste estudo foi desenvolver a melhor condição de cultura in vitro para N. buttnerae para garantir sua sobrevivência e adaptação fora do hospedeiro, a ser utilizado para teste com substâncias no controle do parasito. Para isso, os parasitos foram coletados de peixes naturalmente infectados e distribuídos em placas de cultura de 6 poços sob os seguintes tratamentos em triplicata: 0.9% NaCl, água estéril do tanque, meio de cultura L-15 Leibovitz, meio de cultura L-15 Leibovitz + ágar 2%, meio de cultura RPMI 1640, e meio de cultura RPMI 1640 + ágar 2%. As placas contendo os parasitos foram mantidos a 24 °C, 28 °C, e 32 °C. O meio de cultura RPMI 1640 + ágar 2% apresentou a melhor sobrevivência de 24 dias a 24 °C. Nenhuma alteração corporal tais como inchaço dos parasitos, deformação corporal, desidratação e endurecimento foram observados no meio de cultura RPMI 1640 + ágar 2%.

Changes in hematological and biochemical parameters of tambaqui (Colossoma macropomum ) parasitized by metazoan species / Alterações nos parâmetros hematológicos e bioquímicos de tambaqui (Colossoma macropomum) parasitado por espécies de metazoários

Abstract The aim of this study was to evaluate the impacts of metazoan parasites on hematological and biochemical parameters and relative condition factor of tambaqui (Colossoma macropomum ) farmed in northern Brazil. A total of 32 juvenile fish were captured from a commercial fish farm located in the municipality of Rio Preto da Eva, Amazonas state, Brazil. Parasite prevalence was 100% for Anacanthorus spathulatus, Mymarothecium boegeri and Notozothecium janauachensis, 100% for Neoechinorhynchus buttnerae and 53.13% for Dolops geayi. The greatest mean parasite intensity was found in acantocephalans followed by monogeneans and branchiuran crustaceans. A negative correlation was observed between abundance of N. buttnerae and hematocrit percentage, hemoglobin concentration, total thrombocyte count and glucose and between abundance of the monogenean and glucose concentration. Parasitic infections caused damage in tambaqui in terms of the observed hematological parameters that were characterized by hypochromic anemia and thrombocytopenia, which are important parameters to be used in parasitic diagnosis. This study is the first record of the occurrence of Dolops geayi in farmed tambaqui in the Amazon.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto do parasitismo por metazoários sobre os parâmetros hematológicos, bioquímicos e fator de condição relativo de tambaquis (Colossoma macropomum) cultivados na região Norte do Brasil. Foram coletados 32 tambaquis em fase de engorda numa piscicultura comercial no município de Rio Preto da Eva, estado do Amazonas, Brasil. A prevalência de parasitos foi de 100% para Anacanthorus spathulatus, Mymarothecium boegeri e Notozothecium janauachensis, 100% para Neoechinorhynchus buttnerae e 53,13% para Dolops geayi. A maior intensidade média foi de acantocéfalos, seguida por monogenéticos e branquiúros. Correlação negativa significativa foi observada entre abundância de N. buttnerae e os parâmetros de hematócrito, concentração de hemoglobina, trombócitos totais e glicose, bem como entre a abundância de monogenéticos e glicose. A infecção por parasitos metazoários foi capaz de debilitar os tambaquis como observado por meio das alterações hematológicas; sendo este quadro de anemia hipocrômica e trombocitopenia importante para ser utilizado no diagnóstico destas parasitoses. Este estudo foi o primeiro registro da ocorrência de Dolops geayi em tambaquis cultivados na Amazônia.

Parasitological assessment in the hybrid surubim (Pseudoplatystoma reticulatum x P. corruscans), with uncommon occurrence of Monogenea parasites / Avaliação parasitológica no híbrido surubim (Pseudoplatystoma reticulatum x P. corruscans), com ocorrência incomum de parasitos Monogenea

Abstract This study evaluated the parasite fauna of farmed hybrid surubim (Pseudoplatystoma reticulatum x P. corruscans) and the host-parasite-environment relationship in two fish farms located in Mato Grosso do Sul, Central Brazil, South America. A total of 120 hybrids from two different farms, 60 in each season (30 in the hot and 30 in cold season) were examined during a year. Water quality was weekly measured to evaluate the interaction among environmental conditions and parasitism. Histopathology was used to observe the effects of the parasites and environment on the fish gills. The ciliate protozoan Ichthyophthirius multifiliis and the monogeneans (Ameloblastella sp., Amphocleithrium paraguayensis, Vancleaveus ciccinus, V. fungulus and V. janacauensis) were the most prevalent parasites detected in both seasons in both farms, with prevalence above 80%. It was stated that parasites did not cause important damage in the health status of the hybrid surubim. These results might be related to general good management practices and environmental quality implemented by the fish farmers. The presence of uncommon monogenean parasites to this hybrid compared to their parents causing an environmental and ecological concern is here discussed.

Resumo Este estudo avaliou a fauna de parasitos do surubim híbrido cultivado (Pseudoplatystoma reticulatum x P. corruscans) e a relação hospedeiro-parasito-ambiente em duas pisciculturas localizadas no Estado do Mato Grosso do Sul, região Centro-Oeste, Brasil. Um total de 120 híbridos de duas fazendas, 60 em cada estação (30 na estação quente e 30 na fria), foram examinados durante um ano. A qualidade da água foi medida semanalmente para avaliar a interação entre as condições ambientais e o parasitismo. Histopatologia foi usada para observar os efeitos dos parasitos e do ambiente nas brânquias dos peixes. O protozoário ciliado Ichthyophthirius multifiliis e Monogenea (Ameloblastella sp., Amphocleithrium paraguayensis, Vancleaveus ciccinus, V. fungulus e V. janacauensis) foram os parasitos mais prevalentes detectados em ambas estações nas duas fazendas, com prevalências acima de 80%. Observou-se que os parasitos não causaram danos ao estado de saúde do surubim híbrido. Esses resultados estão relacionados às boas práticas de manejo e qualidade ambiental implementada pelos produtores. É discutida a presença incomum de Monogenea para esse híbrido, comparado com seus progenitores, podendo causar preocupação ambiental e ecológica.

Development and health status of Centropomus undecimalisparasitized by Rhabdosynochus rhabdosynochus (Monogenea) under different salinity and temperature conditions / Desenvolvimento e estado de saúde de Centropomus undecimalisparasitado por Rhabdosynochus rhabdosynochus (Monogenea) sob diferentes condições de salinidade e temperatura

This study evaluated the correlation of hematological parameters with the mean abundance of the monogenean helminth Rhabdosynochus rhabdosynochus in Centropomus undecimalis reared at different temperatures and salinities. The experimental conditions were: 28 °C/0 ppt (parts per thousand); 28 °C/15 ppt; 28 °C/32 ppt; 25 °C/0 ppt; 25 °C/15 ppt; and 25 °C/32 ppt. The prevalence was 100.0% in fish at 28 °C/15 ppt, 28 °C/32 ppt and 25 °C/15 ppt, which was significantly different (p < 0.05) from those at 25 °C/32 ppt. The red blood cell (RBC) count, hematocrit and total leukocyte (WBC) count were significantly higher in fish at 28 °C/15 ppt and 28 °C/32 ppt. The mean abundance of R. rhabdosynochus, hematocrit and RBC showed positive correlations (P < 0.05) with temperature (ρ= 0.3908; ρ= 0.4771 and ρ = 0.2812). Mean abundance showed negative correlations with hemoglobin (ρ= -0.3567) and mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) (ρ = -0.2684). No correlation between abundance and salinity was detected among the experimental conditions (ρ = -0.0204). The low numbers of monogeneans recorded (min -1 and max -33) explain the few changes to fish health. This suggests that these experimental conditions may be recommended for development of rearing of C. undecimalis in Brazil, without any influence or economic losses from R. rhabdosynochus.

Este estudo avaliou a correlação dos parâmetros hematológicos com a abundância média de helmintos monogenea Rhabdosynochus rhabdosynochus em robalo-flecha, Centropomus undecimalis, cultivado em diferentes temperaturas e salinidades. As condições experimentais foram: 28 °C/0 ‰; 28 °C/15 ‰; 28 °C/32 ‰; 25 °C/0 ‰; 25 °C/15 ‰; 25 °C/32 ‰. A prevalência (P) foi de 100,0% nos peixes de 28 °C/15 ‰, 28 °C/32 ‰, 25 °C/15 ‰ significativamente diferente (p<0,05) dos peixes de 25 °C/32 ‰ (P=75,0%). O número de eritrócitos, hematócrito e leucócitos totais foram significativamente maiores nos peixes mantidos a 28 °C/15 ‰ e 28 °C/32 ‰. A abundância média de R. rhabdosynochus, hematócrito e número de eritrócitos mostraram correlação positiva (p<0,05) com a temperatura (ρ = 0,3908; ρ = 0,4771 e ρ = 0,2812, respectivamente). Houve correlação negativa da abundância média com a hemoglobina (ρ = -0,3567) e a concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) (ρ = -0,2684). Não houve correlação entre a abundância e a salinidade entre os tratamentos (ρ = -0,0204). O baixo número de Monogenea registrado (mín: 1 e máx: 33) justifica as poucas alterações na saúde dos animais avaliados. Isso sugere que essas condições experimentais de cultivo podem ser recomendadas para um futuro desenvolvimento do cultivo de C. undecimalis no Brasil, sem que haja influência e perdas econômicas associadas a mortalidades, por parasitos R. rhabdosynochus.

Haematological Parameters of the Hybrid Surubim (Pseudoplatystoma reticulatum x P. corruscans) farmed in Brazil

This study evaluated the haematological parameters of the hybrid surubim (Pseudoplatystoma corruscans x P. reticulatum) farmed in intensive and semi intensive system. A total of 240 fish were examined, 120 from fish farm and 120 from a semi-intensive for comparison between the hot and cold season. The water quality was weekly measured to evaluate the influence of environmental conditions on the haematology. Fish from intensive system showed hematocrit and white blood cell count (WBC) higher in hot season while the total plasmatic protein, hemoglobin concentration, mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) and mean corpuscular volume (MCV) were higher in cold season. In fish from semi intensive system, the red blood cells count (RBC) and total thrombocyte number was higher in hot season while the MCHC and MCV were higher in cold season. There was no alterations in the numbers of lymphocytes, neutrophils, basophils, eosinophils and PAS - positive granular leukocyte (PAS-LG). The results showed the influence of seasonality on the hematological parameters of the hybrid surubim kept under normal farming conditions. Regarding water quality, hot season was directly related to increased water temperature and decreased dissolved oxygen while the opposite was found in cold season.

Effect of dietary supplementation with propolis and Aloe barbadensis extracts on hematological parameters and parasitism in Nile tilapia / Efeito da suplementação dietária com extratos de própolis e Aloe barbadensis sobre parâmetros hematológicos e parasitismo em tilápia do Nilo

This study evaluated the influence of diet supplementation with propolis and Aloe barbadensis on hematological parameters and parasitism in tilapia. One hundred and eighty fish were distributed among 12 water tanks forming four treatments: fish supplemented with a 1:1 mixture of 0%, 0.5%, 1% and 2% propolis and aloe extracts. After the fish had been fed on the experimental diets for 15 and 21 days, blood samples were taken and parasites collected. The monogeneans Cichlidogyrus sclerosus, C. halli, C. thurstonae and Scutogyrus longicornis were identified in the gills. Between the sampling times, there were increases in the numbers of erythrocytes, leukocytes, thrombocytes and lymphocytes, as observed after 21 days, possibly due to the stress level over the course of the assay and/or accumulation of substances in the organism. Supplementation with the mixture of propolis and aloe for 15 days showed the highest efficacy against the parasites. This was possibly due to the association between the two compounds. The results demonstrated that supplementation with mixtures of extracts did not produce hematological alterations and also favored a significant reduction in the number of gill parasites. The best results were achieved after 15 days of feeding with a diet with 0.5% and 1% supplementation with the extract mixture, which increased efficiency by 83 and 85% respectively.

Este estudo avaliou a influência da alimentação de tilápias com dieta suplementada com extratos de própolis e Aloe barbadensis sobre os parâmetros hematológicos e parasitismo. Setenta e dois peixes foram distribuídos em 12 tanques, formando 4 tratamentos: peixes suplementados na dieta com extrato de própolis e aloe (0%, 0,5%, 1% e 2%). Após 15 e 21 dias de alimentação com dietas experimentais foram realizadas coletas de sangue e parasitos. Os monogeneas Cichlidogyrus sclerosus, C. halli, C. thurstonae e Scutogyrus longicornis foram identificados nas brânquias. Entre os períodos de coleta, observou-se aumento nos valores de eritrócitos, leucócitos, trombócitos e linfócitos, após 21 dias de alimentação, o que pode significar estresse ao longo do período experimental e/ou acúmulo dos produtos no organismo.A suplementação com a mistura de própolis e aloe, por 15 dias, apresentou melhor eficácia frente parasitos, possivelmente, devido à associação dos compostos. Os resultados demonstram que a suplementação com a mistura dos extratos não alterou os parâmetros hematológicos, além de favorecer redução significativa no número de parasitos branquiais. Os melhores resultados foram obtidos em 15 dias de alimentação com a dieta suplementada com 0,5% e 1% da mistura dos extratos, respectivamente por 83% e 85% de eficiência.

Trichodina colisae (Ciliophora: Trichodinidae): new parasite records for two freshwater fish species farmed in Brazil / Trichodina colisae (Ciliophora: Trichodinidae): novo registro de parasito para duas espécies de peixes de água doce cultivadas no Brasil

Family Trichodinidae comprises ciliate protozoa distributed worldwide; they are considered some of the main parasitological agents infecting cultivated fish. However, the trichodinidae parasitizing important fish species cultured in Brazil are unknown, and more taxonomic studies on this group of parasites are required. This research morphologically characterizes Trichodina colisae Asmat & Sultana, (2005) of pacu (Piaractus mesopotamicus) and patinga hybrid (P. mesopotamicus × P. brachypomus) cultivated in the central and southeast regions of the country. Fresh assemblies were made from mucus scraped from the skin, fins and gills, fixed with methanol and, subsequently, impregnated with silver nitrate and stained with Giemsa for assessment under light microscopy. This research reports not only the second occurrence of T. colisae in the world, but also its first occurrence in South America.(AU)

Tricodinídeos são protozoários ciliados móveis com ampla distribuição mundial; são considerados um dos agentes parasitários que mais acometem peixes cultivados. No Brasil, a maioria dos tricodinídeos que parasitam importantes espécies de peixes cultivados são desconhecidos, o que requer mais estudos taxonômicos com esse grupo de parasitos. Este estudo caracteriza morfologicamente Trichodina colisae Asmat & Sultana, 2005 de pacu (Piaractus mesopotamicus) e do híbrido patinga (P. mesopotamicus × P. brachypomus) cultivados, respectivamente, no Centro-Oeste e Sudeste do Brasil. Foram feitas montagens a fresco do raspado de muco da pele, nadadeiras e brânquias, fixados com metanol e, posteriormente, impregnados com nitrato de prata e coradas com Giemsa para avaliação em microscopia óptica. O presente estudo relata não só a segunda ocorrência de T. colisae no mundo, mas também a primeira ocorrência na América do Sul.(AU)

First record of Trypanosoma sp. (Protozoa: Kinetoplastida) in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) in the Pantanal wetland, Mato Grosso do Sul State, Brazil / Primeiro registro de Trypanosoma sp. (Protozoa: Kinetoplastida) em tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) no Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brasil

The blood infection by Trypanosoma sp. in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) from the Pantanal wetland was reported in this study. Ten fish from the Paraguay River in the Pantanal were evaluated for the presence of hemoflagellates. Trypomastigotes of Trypanosoma sp. were observed in blood smears from three fish (30 percent prevalence) and some forms were seen to be undergoing division. Using the diagnostic methods of fresh examination and blood centrifugation in hematocrit capillary tubes, the prevalence rate was 80 percent. This is the first report of Trypanosoma sp. in tuvira in Brazil.

O objetivo do presente estudo foi reportar a infecção por Trypanosoma sp. em tuviras (Gymnotus aff. inaequilabiatus) oriundas do Pantanal Sul-mato-grossense, Brasil. Dez peixes provenientes do rio Paraguai, Pantanal Sul-mato-grossense, foram avaliados quanto à presença de hemoflagelados. Tripomastigotas de Trypanosoma sp. foram observados nas extensões sanguíneas de três peixes (30 por cento de prevalência), e algumas formas encontravam-se em divisão. Por meio do exame a fresco e da centrifugação do sangue em capilar de hematócrito como métodos para diagnóstico, a taxa de prevalência foi de 80 por cento. Esse é o primeiro relato de Trypanosoma sp. em tuviras no Brasil.

Heparina e Na2EDTA como anticoagulantes para surubim híbrido (Pseudoplatystoma reticulatum x P. corruscans): eficácia e alterações hematológicas / Heparin and Na2EDTA as anticoagulants for hybrid surubim catfish (Pseudoplatystoma reticulatum x P. corruscans): efficacy and hematological changes

Este estudo avaliou o efeito da heparina 100UI e do Na2EDTA nas concentrações de 3, 5 e 10 por cento sobre a coagulação sanguínea e os parâmetros hematológicos de surubim híbrido. Foram utilizados 10 peixes, com peso médio de 386,7±24,3g e comprimento total médio de 38,7±6,4cm, para colheita das amostras sanguíneas e determinação do percentual do hematócrito, teor de proteínas plasmáticas totais e teste de fragilidade osmótica dos eritrócitos (FOE). Os dados foram submetidos à análise de variância, e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey, a 5 por cento de probabilidade. A coagulação foi eficientemente inibida quando utilizado o Na2EDTA; já as amostras com heparina coagularam 10 horas após a coleta. Houve aumento na fragilidade osmótica dos eritrócitos (P<0,01), especialmente quando utilizado o Na2EDTA 10 e 5 por cento, não havendo diferença entre o controle e a heparina. No hematócrito e teor de proteínas plasmáticas totais, não foram verificadas diferenças significativas. O Na2EDTA 3 por cento é seguro e eficiente como anticoagulante para surubim híbrido, prevenindo a coagulação por mais de 10h e ocasionando discreto efeito sobre a fragilidade osmótica dos eritrócitos.

The effect of heparin 100IU and Na2EDTA in concentration of 3 percent, 5 percent and 10 percent on the blood coagulation and hematological parameters of hybrid surubim catfish were evaluated. We used ten fish weighing 386,7±24,3g and average length of 38,7±6,4cm for collection of blood samples and determination of the percentage of hematocrit, plasma total protein content and osmotic fragility erythrocytes test (OFE). Data were submitted to analysis of variance and averages compared by Tukey test at 5 percent probability. Coagulation was efficiently inhibited when used the Na2EDTA, while the samples with heparin coagulate ten hours after collection. There was an increase in osmotic fragility of erythrocytes (P<0.01), especially when using Na2EDTA 10 percent and 5 percent, with no difference between control and heparin. In hematocrit and total plasma protein content were not observed statistical differences. The Na2EDTA 3 percent is safe and effective anticoagulant for hybrid surubim catfish, preventing clotting for more than 10 hours causing slight effect on the osmotic fragility of erythrocytes.