Investigación de péptidos plasmáticos en la insuficiencia renal crónica / Investigation of plasma peptides in chronic renal failure

Se describe una metodología para el fraccionamiento de péptidos y se aplica, en el presente trabajo, al análisis de compuestos péptidos presentes en el plasma de pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC). Las muestras de plasma de sujetos controles (C;n=5) y de pacientes con IRC (n-10) fueron ultrafiltradas a través de membranas Diaflo PM 30 e YM 02, obteniéndose 2 fracciones, fracción A con sustancias de masa molecular relativa (M) menor de 1.000 y fracción B con M, aproximada entre 1.000 y 30.000, aunque los ensayos de estandarización mostraron que esta última fracción incluía proteínas de M, semejante a la albúmina. Las fracciones A, estudiadas mediante cromatografía en capa fina, mostraron la presencia de una banda fluorescamina positiva en las muestras de IRC, ausente en las C. Las fracciones B fueron analizadas por electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE) y tranferencia con detección inmunológica. Para desarrollar esta última técnica, se obtuvo un antisuero en conejo contra la fracción plasmática B, obtenida a partir de un pool de plasmas de pacientes con IRC. Después de la separación en SDS-PAGE, los compuestos fueron transferidos a papel de nitrocelulosa y detectados mediante una técnica de doble antisuero, empleando como primer antisuero, el anti-fracción IRC obtenido en conejo y luego, un antisuero inti-IgG de conejo, marcado con peroxidasa. Para el revelado final se utilizó una reacción colorimétrica, mediada por peroxidasa. El análisis de SDS-PAGE mostró que las fracciones plasmáticas B de pacientes con IRC contenían mayor número de bandas en el rango de M, 15.000-70.000 que las C, aumentando las diferencias cuali y/o cuantitativas entre los dos grupos, al emplear la técnica de separación electroforética, tranferencia de detección inmunológica. El procedimiento descrito constituye una metodología apropiada para el estudio de péptidos en líquidos biológicos

Diferenciación de proteinurias mediante electroforesis en gel de poliacrilamida / Differentation of proteinurias interceding polyacrylamide gel electrophoresis

El análisis de la distribución de las proteínas urinarias de acuerdo con sus masas moleculares relativas, constituye una información valiosa para el diagnóstico de enfermedades renales y extrarrenales. Se detalla el fraccionamiento de las proteínas presentes en muestras de orina de 24 h, sin concentrar. Se utiliza la técnica de electroforesis vertical en geles de policrilamida 10% con dodecil-sulfato de sodio (SDS-PAGE). El desarrollo electroforético se realiza entre 25 y 50 mA (V max = 200 V), durante 4-5 h,revelando con azul brillante de Coomassie R-250. Los perfiles proteicos obtenidos permiten diferenciar proteinurias tubulares, glomerulares y mixtas con distintos grados de selectividad y proteinurias extrarrenales. La buena resolución y sensibilidad de la técnica permite analizar muestras sin concentrar (concepción proteica > 0,3 g/l) y resulta adecuada para una correcta caracterización de proteinurias.