Detection of Mycoplasma hyopneumoniae by polymerase chain reaction in swine presenting respiratory problems / Detecção do mycoplasma hyopneumoniae pela reação em cadeia da polimerase em suínos apresentando problemas respiratórios

Since Mycoplasma hyopneumoniae isolation in appropriate media is a difficult task and impractical for daily routine diagnostics, Nested-PCR (N-PCR) techniques are currently used to improve the direct diagnostic sensitivity of Swine Enzootic Pneumonia. In a first experiment, this paper describes a N-PCR technique optimization based on three variables: different sampling sites, sample transport media, and DNA extraction methods, using eight pigs. Based on the optimization results, a second experiment was conducted for testing validity using 40 animals. In conclusion, the obtained results of the N-PCR optimization and validation allow us to recommend this test as a routine monitoring diagnostic method for Mycoplasma hyopneumoniae infection in swine herds.

A Nested-PCR (N-PCR) tem como objetivo melhorar a sensibilidade do diagnóstico direto da Pneumonia Enzoótica Suína, pois o isolamento do Mycoplasma hyopneumoniae é trabalhoso tornando-se inviável na rotina. Neste trabalho, foi realizado um projeto piloto para a otimização da técnica de N-PCR, utilizando três variáveis: tipo de amostra biológica, meio de transporte da amostra e método de extração do DNA, utilizando oito animais. Os resultados obtidos foram empregados no segundo experimento para a validação do teste utilizando 40 animais. Os resultados obtidos, pela otimização da N-PCR, neste trabalho, permite sugerir esta prova como método de diagnóstico de rotina no monitoramento das infecções por Mycoplasma hyopneumoniae em granjas de suínos.

Comparaçäo de métodos de isolamento de bactérias NAD-dependentes do trato respiratório superior de suínos sadios / Methods to isolate NAD-dependent bacteria from the upper respiratory tract of health pigs

Secreçöes nasais, tonsilares e tecido tonsilar foram coletados de 67 leitöes de 9 a 15 semanas de idade, provenientes de três rebanhos positivos para Actinobacillus pleuropneumoniae (App), e de 50 leitöes provenientes de dois rebanhos, negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento prévio de sorotipos 3, 5 e 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos a controle veterinário, sem notificaçäo de sintomas clínicos, lesöes de pleuropneumonia suína e sem isolamento do agente. O material coletado foi submetido a três diferentes métodos de cultivo: 1- semeadura direta em meio de cultivo sólido seletivo; 2- diluiçäo em caldo seletivo seguido de subsemeadura em meio de cultivo sólido seletivo; 3- diluiçäo em caldo seletivo seguido de subsemeadura em ágar sangue. Entre as amostras NAD-dependentes recuperadas 86 foram classificadas como App, 13 como grupo minor e 21 como grupo taxon (C, D, E e F). Dos rebanhos positivos foram recuperadas quatro amostras de App (sorotipos 3, 7 e 12) e 51 näo sorotipificáveis. Dos rebanhos negativos foram recuperadas 31 amostras de App näo sorotipificáveis, indicando que o App faz parte da flora normal do trato respiratório superior dos suínos. O melhor método de isolamento de amostras NAD-dependentes de leitöes portadores foi da biópsia de tecido tonsilar semeado diretamente em meio sólido seletivo (PPLO ágar adicionado de 2 mica grama de cristal violeta, 10 mica grama NAD, 1 mica grama de lincomicina, 1,4 mica grama de bacitracina por ml)

Utilizaçäo de um teste de ELISA polivalente para detecçäo de anticorpos contra Actinobacillus pleuropneumoniae (App) / Utilization of a polyvalent ELISA test for detection antibodies against of Actinobacillus pleuropneumoniae

Um teste de ELISA polivalente baseado em lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS - CL) de Actinobacillus pleuropneumoniae (App) sorotipos 3, 5 e 7 foi avaliado testando-se amostras do soro de leitöes e matrizes provenientes de 10 rebanhos positivos e de 10 rebanhos negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento prévio do App sorotipos 3, 5 ou 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos ao controle veterinário, sem notificaçäo de sintomas clínicos, sem lesöes de pleuropneumonia suína e sem isolamento do agente. Todos os rebanhos positivos apresentaram sorologia positiva e as matrizes apresentaram maior número de soroconversores (P<0,05) do que os leitöes. Entre os rebanhos negativos quatro apresentaram sorologia negativa, cinco sorologia positiva com valores preditivos altos (96 a 99 por cento) e um com valor preditivo considerado baixo (56 por cento). O teste apresentou 100 por cento de sensibilidade e aparentemente baixa especificidade, porém, como detectou os sorotipos prevalentes no Brasil e sorotipos que possuem LPS - CL homólogos (3, 4, 5, 6, 7 e 8), ele é aplicável somente como teste de triagem