Recombinant gp19 as a potential antigen for detecting anti-Ehrlichia canis antibodies in dog sera / gp19 recombinante como um antígeno potencial para detecção de anticorposanti-Ehrlichia canis em soros de cães

The canine monocytic ehrlichiosis, caused by Ehrlichia canis, is endemic in several regions of Brazil. Some serological diagnostic techniques using immunodominant proteins of E. canis as antigens are available, but their specificities and sensitivities are questionable. Based on this, the objective of this study was to test the antigenic potential of the recombinant gp19 protein (rGP19) for subsequent use in diagnostic tests. The rGP19 expressed in the Escherichia coli strain BL21 (DE3) C41 was recognized in the sera from experimentally infected dogs using ELISA and Western blotting. Thus, it was possible to obtain a promising antigen with the ability to differentiate between E. canis-positive and -negative animals, even 1 week after infection.

A erliquiose monocítica canina, causada por Ehrlichia canis, é uma doença endêmica em diversas regiões do Brasil. Algumas técnicas de diagnóstico sorológico, utilizando proteínas imunodominantes de E. canis como antígenos, estão disponíveis, porém suas especificidades e sensibilidades são questionáveis. Com base nesse fato, o objetivo deste trabalho foi testar o potencial antigênico da proteína GP19 recombinante (rGP19) para posterior utilização em testes diagnósticos. A rGP19, expressa em E. coli cepa BL21 (DE3) C41, foi reconhecida por soros de cães experimentalmente infectados pelas técnicas de ELISA e Western blotting. Dessa maneira, conseguiu-se obter um antígeno promissor com a capacidade de diferenciar animais positivos de negativos, até mesmo uma semana após a infecção.

Detecção de fraude em amostras comerciais de queijo bubalino por adição de leite bovino por meio da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) multiplex / Detection of fraud of cow milk addition into the commercially available buffalo cheese samples by multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR)

No presente estudo foi verificada a eficiência da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) multiplex para detecção de fraude por adição de leite bovino em queijo de búfala, e para identificar amostras dequeijo fraudadas no comércio de municípios dos estados do Pará e Amapá. Os queijos de búfalacontendo 10 %, 25 %, 50 %, 75 % e 90 % de leite bovino foram produzidos, bem como os queijos exclusivamente de vaca e búfala (controles). Essas amostras foram analisadas por meio de Reação em Cadeia da Polimerase. Posteriormente, 44 amostras de queijos bubalinos foram coletadas na região alvo doestudo e a PCR multiplex foi novamente utilizada, visando à detecção de fraude. Os resultados obtidos demonstraram que os iniciadores utilizados neste trabalho foram capazes de detectar o incremento de todasas percentagens de leite de vaca nos queijos de búfala experimentalmente fraudados, e que 13,6 % das amostras comercialmente disponíveis continham leite bovino. PCR multiplex é uma técnica capaz de detectar adição de valores a partir de 10 % de leite bovino não declarado na rotulagem de queijo de búfala,e este tipo de fraude foi encontrado nas amostras comercializadas nos municípios do Amapá e Pará, Brasil...

Expressão heteróloga da EMA-2 (equi merozoite antigen) de Theileria equi em Pichia pastoris com potencial utilização em imunobiológicos / Heterologous expression of EMA-2 (equi merozoite antigen) of Theileria equi in Pichia pastoris with potential use in immunobiologics

A piroplasmose equina causada por Theileria equi acomete os equinos de forma endêmica no Brasil e em diversos outros países tropicais e subtropicais. Considerada uma das mais importantes doenças de equinos, causa danos à saúde animal e perdas econômicas. A proteína equi merozoite antigen (EMA-2) é uma das principais proteínas de superfície, expressa nos diversos estágios do ciclo do parasita, estimula resposta imune em animais infectados, tornando-se um possível candidato para utilização em diagnóstico. O gene EMA-2 foi clonado e expresso na levedura Pichia pastoris. A proteína EMA-2 recombinante (rEMA-2) foi caracterizada antigenicamente por Western Blot e por ELISA indireto, utilizando-se soro de equino positivo para theileriose. O resultado do ELISA demonstrou uma especificidade de 90,9% e sensibilidade de 83,3%, quando comparado ao padrão, sendo superior à imunofluorescência (80,6% de especificidade e 75,0% de sensibilidade), o que sugere que a rEMA-2 expressa em P. pastoris é um promissor antígeno para ser utilizado como ferramenta no imunodiagnóstico de theileriose equina.

Theileria equi, the causative agent of equine piroplasmosis, is endemic in Brazil and many other tropical and subtropical countries. It is considered one of the most important diseases of horses causing animal health problems and significant economic loss. The Protein equi merozoite antigen-2 (EMA-2) is a major surface protein that is expressed in different parasite cycle stages and induces immune response in infected animals, being a possible candidate to be used in diagnose. EMA-2 gene was cloned and expressed in the yeast Pichia pastoris, and the recombinant protein EMA-2 (rEMA-2) was characterized by Western Blot and indirect ELISA using equine positive sera. The ELISA results demonstrated a specificity of 90.9% and a sensitivity of 83.3% compared to the standard ELISA and being superior to immunofluorescence (80.6% of specificity and 75.0% of sensitivity) suggesting that the rEMA-2 expressed in P. pastoris is a promising antigen to be used as a tool in immunodiagnostic of theileriasis.