RESUMEN
Introducción: En Cuba, se desarrolló un medio de cultivo cromogénico y fluorogénico, para la detección, aislamiento y diferenciación de Salmonella de otras bacterias Gram negativas. El método que emplea el medio fue validado y su uso se adoptó en una norma cubana. El aseguramiento de la calidad y el control del rendimiento de los medios garantizan la confiabilidad de los resultados analíticos. La norma ISO 11133 establece criterios mínimos y métodos para evaluarlos. Objetivo: Evaluar los criterios de control de la calidad y de rendimiento de CromoCen® SALM, establecidos en la ISO 11133:2014/Amd.1:2018, para demostrar su fiabilidad para el análisis microbiológico de los alimentos de consumo humano. Métodos: Se evaluaron los indicadores de calidad físico-químicos de tres lotes y se definió un conjunto de ellos que caracteriza la calidad del medio antes y después de terminado, así como la consistencia entre lotes. Para el ensayo de rendimiento se seleccionaron 10 cepas de diferentes géneros. Se determinó la relación de productividad, el factor de selectividad y la electividad de CromoCen® SALM, según la ISO 11133. Resultados: La evaluación físico-química mostró una consistencia entre lotes en color, homogeneidad, apariencia del polvo y del medio preparado. Los valores de contenido de humedad y pH se encontraron dentro de los valores establecidos para este producto. La relación de productividad de CromoCen® SALM con respecto al agar triptona soya, fue superior al 50 por ciento, mientras que el factor de selectividad resultó de 4. Se demostró que en el medio de cultivo se puede diferenciar un grupo representativo de géneros microbianos de Salmonella. Conclusiones: CromoCen® SALM cumple con los requisitos de calidad establecidos para este tipo de productos, según la ISO 11133 vigente. La correcta formulación de los lotes, así como el cumplimiento de los requisitos de calidad aseguran el funcionamiento adecuado para lo que fue diseñado(AU)
Introduction: In Cuba, a new chromogenic and fluorogenic culture medium was developed for the detection, isolation and differentiation of Salmonella from other Gram negative bacteria. The method and medium were validated and their use was adopted as a Cuban standard. Quality assurance and control of media is essential and mandatory to ensure the reliability of the results of the analysis in which they are used. ISO 11133 establishes minimum criteria and methods to evaluate them. Objective: To evaluate the quality and performance criteria of CromoCen® SALM, as recommended in ISO 11133:2014/Amd.1:2018 to demonstrate its reliability for the microbiological analysis of food for human consumption. Methods: The physical-chemical quality indicators of three batches were evaluated and a group of them was defined to characterize its quality before and after finishing, as well to evaluate the consistency between batches. For the performance test, 12 strains of different genera were selected. The productivity ratio, the selectivity factor and the electivity of CromoCen® SALM were determined. Results: The physico-chemical evaluation showed a consistency between batches in color, homogeneity, appearance of the powder and of the prepared medium. The moisture content and pH values ranged within the established values for this product. The productivity ratio of CromoCen® SALM with respect to tryptone soy agar was greater than 50 percent, while the selectivity factor was 4. It was shown that in the culture medium a representative group of Salmonella microbial genera can be differentiated. Conclusions: CromoCen® SALM meets the quality requirements established for this type of products, according to the current ISO 11133 standard. The correct formulation of the batches, as well as the fulfillment of the quality requirements ensure the proper functionality and match the design purpose(AU)
Asunto(s)
Humanos , Control de Calidad , Gestión de la Calidad Total/normas , Compuestos Cromogénicos/normas , Ingestión de AlimentosRESUMEN
Frente a la creciente demanda de producción de la vacuna Antihepatitis B recombinante, constituye un reto para el Centro Nacional de Biopreparados aumentar la fabricación del producto, para lo cual el proceso de llenado aséptico requirió de una inversión. En el trabajo se presenta la selección de la nueva máquina llenadora y se calculan los indicadores económicos asociados a la inversión, la que se recupera en el cuarto año con una ganancia de $2.655.300. Luego de la inversión se evaluó el desempeño de la nueva máquina y se comparó con los resultados anteriores a la inversión. Se compararon los valores de volumen dispensado por vial, velocidad de llenado, rendimiento operacional, principales defectos detectados en los lotes de llenado, tiempo promedio de llenado de un lote, costo de producción y comportamiento del monto resarcido al cliente por rechazos de producto. El volumen dispensado por vial resulta más exacto, reduciendo las pérdidas de producto. La velocidad de llenado aumenta 1,7 veces respecto a la máquina anterior. El rendimiento operacional aumenta en un 13,63 percent. Disminuyen los rechazos de producto en 40.897 viales, representando un ahorro de $24.538 ingresados en 73 lotes producidos. Se ahorra en energía eléctrica un total de $14.718 en un mes. El costo unitario del proceso de llenado disminuye en 0,0648 $/vial(AU)
National Center for Biopreparations must increase the production of the recombinant hepatitis B vaccine because of its growing demand. In order to fulfill this challenge, the aseptic filling process required an investment. This work, presents the selection of the new filling machine and the economic indicators that support the investment. Inversion cost is recovered in the fourth year with a profit equivalent to $2,655,300. After the investment, the performance of the new machine was compared with the previous one. Volume dispensed per vial, filling speed, operational performance, major defects detected in filling batches, average filling time for a batch, production cost and payments to customers due to rejected products were compared. The control of the volume dispensed per vial is more accurate, reducing product losses. The filling speed increases 1.7 times compared to the previous machine. Operational performance increases by 13.63 percent. Product rejections are reduced by 40,897 vials, saving $24,538 for the 73 batches. Electricity consumption diminished, saving $14,718 monthly. The unit cost of the filling process decreases by $0.0648/vial(AU)
Asunto(s)
Humanos , Pichia , Proteínas Recombinantes , Virus de la Hepatitis B , VacunasRESUMEN
La selección de bases nutritivas para los medios de cultivo está relacionada con el microorganismo objeto de estudio y el propósito del medio. Los inhibidores del crecimiento bacteriano en los medios selectivos y diferenciales pueden interferir en el desarrollo del microorganismo de interés. Por ello se requiere un balance entre sustancias promotoras e inhibidoras del crecimiento bacteriano, sobre todo en bacterias que pueden encontrarse a muy bajas concentraciones o sometidas a diferentes condiciones de estrés durante el almacenamiento de las muestras que las contiene, como Salmonella. El objetivo consistió en evaluar el efecto de una combinación de nutrientes de diferentes orígenes y de inhibidores del crecimiento de bacterias grampositivas sobre el desarrollo de Salmonella. Se seleccionaron 52 cepas: incluyendo Salmonella, otras bacterias y levaduras. Se determinó la capacidad nutricional de mezclas de bases nutritivas registrando el incremento de la biomasa mediante técnica espectrofotométrica. Se comprobó la capacidad de recuperación e inhibición de dos variantes experimentales con diferentes inhibidores mediante la determinación de parámetros cuantitativos, y se comparó la productividad de la formulación final con un medio cromogénico. Salmonella mostró un crecimiento abundante en las variantes con diferentes combinaciones nutricionales, se logró la inhibición de un grupo de microorganismos y la productividad de la composición final fue superior a 0.80. La mezcla de bases nutritivas de diferentes orígenes y las sales biliares como inhibidor de crecimiento de bacterias grampositivas resulta una combinación eficaz para promover el crecimiento de Salmonella cuando estas bacterias se encuentran en baja concentración.
The selection of nutrient bases depends on the microorganism and the purpose of the medium. Inhibitors of bacterial growth are of great importance in selective and differential media and may interfere in the growth of the microorganism of interest. An adequate balance between promoter substances and inhibitors of bacterial growth is thus required, especially for bacteria that could be found either at very low concentrations or those subject to different stress conditions during storage of the samples containing them, such as Salmonella. The aim was to evaluate the effect of a combination of nutrients of different origins and inhibitors of grampositive bacteria on the development of Salmonella serotypes. 52 Salmonella strains and a representation of other bacteria and yeasts were selected. The nutritional capacity of the composition was determined by spectrophotometric technique formulating variants with mixtures of nutritive bases, and recording the increase in biomass. Recovery capacity and inhibition of two experimental variants with different inhibitors were quantitatively tested. The productivity of the final formulation was compared with a chromogenic medium (Oxoid, England). Salmonella showed abundant growth in the variants made with different nutrient combinations. Both experimental formulations showed their ability to recover microorganisms of interest. The final composition showed productivity values higher than 0.80 in both variants. The mixture of nutrient bases and bile salts as an inhibitor of growth of grampositive bacteria was an effective combination, capable of stimulating the growth of Salmonella genus when these bacteria are found at low concentration.
Asunto(s)
Salmonella , Crecimiento Bacteriano , Medios de CultivoRESUMEN
INTRODUCCIÓN: el medio caldo Nitrato es utilizado en los laboratorios de microbiología clínica como prueba bioquímica para la identificación de enterobacterias por la capacidad que tienen estos microorganismos para reducir los nitratos a nitrito. OBJETIVO: evaluar diferentes combinaciones de bases nutritivas destinadas al desarrollo del medio de cultivo. MÉTODOS: se seleccionó como material biológico un conjunto de cepas certificadas y aisladas pertenecientes a especies representativas de varios géneros de la familia de Enterobacteriaeceae. Se diseñaron cinco variantes y se utilizó como bases nutritivas la peptona de gelatina y el extracto de carne, en diferentes combinaciones y concentraciones, para determinar el incremento de absorbancia en el tiempo como indicador de la densidad microbiana y se calculó la velocidad de crecimiento. Se evaluó la capacidad funcional del medio de cultivo por la habilidad de las especies de reducir o no el nitrato a nitrito. RESULTADOS: la mejor combinación de bases nutritivas correspondió a la de mayor concentración de peptona de gelatina (10 g/L) y extracto de carne (3 g/L). La evaluación organoléptica y fisicoquímica del medio de cultivo mostró características satisfactorias para este tipo de producto. Se comprobó la reducción satisfactoria del nitrato a nitrito, por los microorganismos empleados como control positivo. CONCLUSIONES: el medio de cultivo caldo nitrato desarrollado, cumple con los requisitos de calidad y su funcionalidad microbiológica y permite la caracterización de especies bacterianas que poseen la capacidad de reducir los nitratos a nitritos.
INTRODUCTION: the nitrate broth culture medium is used in clinical microbiology laboratories as a biochemical test for the identification of Enterobacteriaceae by the ability of these microorganisms to reduce nitrate to nitrite. OBJECTIVE: to evaluate different combinations of nutritive bases for the development of the culture medium. METHODS: certificed strains were selected as biological test material. The strains belong to different generu of the Enterobactericiae family. Five variants were designed with gelatin peptone and meat extract as nutrient bases at different concentrations and combinations, the growth rate was calculated by measuring the increase in absorbance over time as an indicator of microbial density. The functionality of the culture medium was evaluated by the ability of tested bacteria or reduce nitrate to nitrite RESULTS: the best combination of nutritive bases contained the highest concentration of gelatin peptone (10 g/L) and beef extract (3 g/L). Physicochemical and sensory evaluation of the culture medium showed results characteristic for this type of product. Reductions of nitrate to nitrite were observed for all tested microorganisms choosed as the positive control. CONCLUSIONS: the nitrate broth culture medium developed complies the quality requiment and its microbiological functionality allows the characterization of bacterial species by the ir ability to reduce nitrate to nitrite
Asunto(s)
Humanos , Peptonas , Técnicas Microbiológicas/métodos , Reacciones Bioquímicas/métodos , Medios de Cultivo , NitratosRESUMEN
INTRODUCCIÓN: el control de la calidad de las aguas es vital para la protección de la salud humana y la biodiversidad en el ambiente acuático. Varios microorganismos son utilizados como indicadores de contaminación fecal para este propósito, dentro de ellos los enterococos son considerados buenos indicadores, porque sobreviven más tiempo ante condiciones adversas en la naturaleza. OBJETIVOS: evaluar la capacidad de un nuevo método cromogénico alternativo para la detección y enumeración de enterococos en aguas por la técnica de filtración por membrana, en comparación con el método estándar ISO 7899:2. MÉTODOS: se recolectaron muestras de aguas de tres orígenes diferentes para determinar su calidad. Las muestras se ensayaron en paralelo por las dos metodologías (alternativa y referencia), empleando la técnica de filtración por membrana. Para evaluar el desempeño de los métodos se determinaron varios parámetros: sensibilidad, especificidad, exactitud, porcentaje de falsos positivos, porcentaje de falsos negativos, índice kappa. Los tres primeros parámetros se calcularon para ambos métodos antes y después de la confirmación por pruebas bioquímicas. Los resultados se analizaron desde el punto de vista estadístico, teniendo en cuenta los principales criterios definidos en las normas ISO 16140 e ISO 177994. RESULTADOS: con el método alternativo los resultados se obtuvieron a las 24 h, estos mostraron valores de sensibilidad (99 %) y exactitud (98 %) más elevados que con el de referencia (97 % y 97 %, respectivamente), el cual demoró más de 48 h. La eficiencia y exactitud de ambos métodos fue similar y se obtuvo una concordancia entre ellos casi perfecta (kappa = 0,96) con el total de las muestras de aguas ensayadas. CONCLUSIONES: los resultados alcanzados indican que el método alternativo es eficiente para el recuento de enterococos provenientes de diferentes tipos de muestras de agua. Resulta además un método simple, más rápido y económicamente factible.
INTRODUCTION: water quality control is essential for the protection of human health and biodiversity in the aquatic environment. For this purpose, several microorganisms are used as indicators of fecal contamination. Among them are enterococci, which are considered to be good indicators, since they survive for a longer time in adverse natural conditions. OBJECTIVES: evaluate the suitability of a new alternative chromogenic method for the detection and enumeration of enterococci in water by membrane filtration technique, in comparison with the ISO 7899:2 standard method. METHODS: water samples were collected from three different sources to determine their quality. The samples were assayed in parallel with the two methodologies (alternative and reference) using the membrane filtration technique. The following parameters were determined to evaluate the performance of the methods: sensitivity, specificity, accuracy, percentage of false positives, percentage of false negatives, kappa index. The first three parameters were estimated for both methods before and after confirmation by biochemical testing. Results were analyzed statistically based on the main criteria defined by ISO standards 16140 and 177994. RESULTS: with the alternative method, results were obtained at 24 h, whereas the reference method required more than 48 h. Sensitivity and accuracy were higher with the alternative method (99 % and 98 %, respectively) than with the reference method (97% and 97%, respectively). Both methods had similar efficiency and accuracy, with almost perfect concordance between them (kappa = 0.96) in all the water samples tested. CONCLUSIONS: results show that the alternative method is efficient for the enumeration of enterococci from different types of water samples. It is also a simple, faster and economically feasible method.
Asunto(s)
Humanos , Calidad del Agua/normas , Técnicas Microbiológicas/métodos , Filtración por Membranas/métodos , Compuestos Cromogénicos , Enterococcus/patogenicidad , Glucosidasas/análisisRESUMEN
INTRODUCCIÓN: las especies de Candida son responsables de la mayoría de las infecciones micóticas oportunistas. La identificación rápida y precisa de las levaduras es importante no solo para la aplicación del tratamiento efectivo de la infecciones, sino para prevenir la emergencia de cepas con resistencia a las drogas. Hasta ahora, los procedimientos para su identificación se basan en varias pruebas, incluida la habilidad de asimilar azúcares como única fuente nutricional. OBJETIVO: el propósito del presente estudio fue evaluar una modificación de la prueba de auxonograma de sustancias carbonadas, utilizada para la identificación de especies de Candida en un período de 24 a 48 h. MÉTODOS: el procedimiento, basado en la asimilación de sustancias carbonadas (auxonograma), fue evaluado para la identificación de las especies de Candida de mayor relevancia clínica. Un total de 164 cepas del género Candida fueron incluidas en el estudio, de ellas 156 aisladas a partir de muestras clínicas y otras 8 cepas de referencia provenientes del cepario central de BioCen (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei y C. kefyr). En el procedimiento se utilizó una suspensión estandarizada de levadura, que se inoculó por el método de vertimiento en placa en un medio libre de carbono, esterilizado en autoclave. Sobre la mezcla (60 mL de medio de cultivo y 3 mL de suspensión microbiana) solidificada se dispensaron 10 µL de varias soluciones de carbohidratos esterilizadas por filtración en diferentes puntos del medio de cultivo. La asimilación del compuesto fue observada como una zona de crecimiento alrededor del punto de distribución del carbohidrato después de 24 a 48 h de incubación. RESULTADOS: todas las especies de Candida fueron correctamente identificadas por el método de auxonograma modificado y se logró 100 por ciento de concordancia con la técnica de Wickerham. CONCLUSIONES: el método alternativo para la prueba de auxonograma del carbono es simple, confiable, más rápido y más fácil de interpretar que el de Wickerham.
INTRODUCTION: Candida species are responsible for the most common opportunistic mycotic infections. Rapid and accurate identification of yeast has become relevant not only for the effective management of infections, but also for the prevention of drug resistance. Up to now, yeast identification procedures are based on a variety of tests, including their ability to use sugars. OBJECTIVE: the purpose of the study was to evaluate a modified auxonographic procedure with the use of carbonated compounds for the rapid identification of Candida species within 24 to 48 h. METHODS: the new procedure is based on the carbohydrates assimilation (auxonograph) and was developed and evaluated for the identification of the most clinically relevant Candida species. A total number of 164 Candida species strains were included in the study, 156 of them were isolated from clinical specimens and other 8 reference strains from the central culture collection of BioCen (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei y C. kefyr). The new methodology was based on the use of standardized yeast suspension of carbon-free culture medium sterilized by autoclaving. After gelling the mixture (60 mL of cultural medium and 3 mL of microbial suspension), 10 µL of different carbohydrate filtering-sterilized solutions were dispensed at different points of the culture medium surface. The carbohydrate uptake was seen as a growth zone around the carbohydrate point of distribution after 24-48 h of incubation. RESULTS: all Candida species were correctly identified by the modified auxonographic method and 100 percent agreement with the Wickerham technique was achieved. CONCLUSIONS: the alternative method for the auxonographic carbon test is simple, reliable, faster and easier to interpret than the Wickerham method.
Asunto(s)
Humanos , Candida/aislamiento & purificación , Técnicas Microbiológicas/métodosRESUMEN
Se estudiaron las condiciones de la deshidratación por aspersión de un hidrolizado papaínico proveniente del músculo animal, y se demostró que el parámetro de mayor influencia directa sobre la densidad aparente del polvo resultó la concentración de sólidos totales (43 por ciento), seguidamente de la temperatura en la entrada de la cámara (140 °C) y velocidad del atomizador (21 500 rev/min), ambos de forma inversa. La densidad aparente alcanzó aproximadamente 400 kg m-3 en comparación con la obtenida antes del estudio de 50 kg m-3. Se comprobó que mejores resultados, en cuanto a la densidad aparente, se obtuvieron al deshidratar el hidrolizado a 122 °C en la entrada de la máquina y 90 °C en la salida en comparación con 140 °C en la entrada del equipo. Se demostró que el producto obtenido posee características físico-químicas y bioquímicas favorecedoras del crecimiento de diferentes especies microbianas de colección.
The spraying dehydration conditions of a Papaic hydrolisate from an animal muscle were studied, and it was proved that the parameter with the highest direct influence on the apparent density of the powder was the concentration of total solids (43 percent), followed by the temperature at the inlet of the chamber (140 °C) and the speed of the atomizer (21 500 rev/min), both in an inverse form. The apparent density reached approximately 400 kg m-3 compared with the obtained before the study of 50 kg m-3. As to the apparent density, better results were obtained on dehydrating the hidrolisate at 122 °C in the inlet of the machine and at 90 °C in the outlet, in comparison with 140 °C in the inlet of the equipment. It was proved that the product obtained had physical, chemical and biochemical characteristics that favored the growth of different microbial species of collection.
Asunto(s)
Hidrolisados de Proteína/biosíntesis , Hidrolisados de Proteína/químicaRESUMEN
Se caracterizó para su empleo en calidad de base nutritiva un extracto de Ipomoea batatas, obtenido por hidrólisis enzimática con alfa amilasa. Se destacó entre sus indicadores de calidad, el contenido de carbohidratos totales con valores superiores a 50 por ciento respecto a su masa nominal, determinado por el método fenol-sulfúrico. Se detectó igual contenido de nitrógeno amínico, cuantificado por el método de valoración potenciométrica en presencia de formaldehído, y del nitrógeno total (0,23 por ciento), valorado por el método de Kjeldahl. El contenido de elementos minerales necesarios para el cultivo microbiano se determinó por el método de absorción atómica. El estudio de la reactividad biológica del extracto vegetal mostró la presencia de aminoácidos esenciales para los microorganismos, como son triptófano, cistina y cisteína. Se demostró la capacidad del extracto vegetal, empleado como única fuente de nutrientes a diferentes concentraciones (2, 4 y 10 por ciento), de promover el crecimiento de bacterias y levaduras. El incremento de biomasa, determinado en un medio especialmente diseñado (SIGMA, EE. UU.), alcanzado para 2 cepas de Candida albicans fue significativamente superior al logrado con otras bases nutritivas, como peptona de soya, extracto de levadura, triptona y peptona micológica. Se evidenció que el extracto vegetal como componente de un medio de cultivo no contiene compuestos con efecto antibacteriano, porque a concentraciones desde 15 hasta 30 g/L, logró promover el crecimiento microbiano hasta valores (UFC/mL) similares a los obtenidos con el medio de referencia agar triptona soya.
An Ipomoea batatas extract obtained by enzymatic hydrolysis with alpha amylase was characterized to be used as nutrient basis. Among its quality indicators, it had a content of over 50 percent whole carbohydrates with respect to the nominal mass, estimated by phenol-sulphur method. The same content of aminonitrogen detected and quantified by potentiometric titration using formaldehyde and of total nitrogen (0.23 percent) by Kjeldahl method were detected. The content of necessary mineral elements for microbial culture was determined by the atom absorption method. The study of biological reactivity of the vegetal extract showed the existence of essential aminoacids such as triptophane, cystine and cysteine for microorganisms. It was proved that the vegetal extract, when used as the only source of nutrients at various concentration levels (2, 4 and 10 percent), is capable of stimulating the growth of bacteriae and yeasts. The increase of two Candida albicans biomass, determined in a specially designed medium (SIGMA, USA), was significantly higher to that of other nutrient bases like soy peptone, yeast extract, triptone and micological peptone. It was evinced that the vegetal extract as a culture medium component did not have antimicrobial effect compounds since at 15-30 g/L concentrations, this extract did stimulate the microbial growth up to values (UFC/mL) similar to those of the reference media called agar triptone soy.