HPV 16 detection in cervical lesions, physical state of viral DNA and changes in p53 gene

CONTEXT: Persistent infection with high risk human papillomavirus (HPV) has been linked to cervical carcinoma. Integration of viral DNA into host cell DNA is essential for this cancer development, promoting disruption of the HPV E2 gene, thus leading to unregulated increases in E6 and E7 proteins and inactivating the products of p53 and Rb tumor suppressor genes. OBJECTIVE: To investigate HPV 16 infection in cervical lesions, physical state of viral DNA and p53 gene alterations in a group of women attending a public health service. DESIGN: Prospective, non-controlled, transversal study. SETTING: Gynecological clinic of the School od Medicine, Universidade Federal Fluminense. SAMPLE: 43 consective patients with cervical lesions referred to our service. MAIN MEASUREMENTS: Cases were classified via cytology/histology as normal, HPV infection, condyloma, low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL), high-grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) and carcinoma. HPV infection was studied via polymerase chain reaction (PCR) using two PCR primer sets, to determine DNA integration. p53 gene changes were investigated by single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis. RESULTS: One normal case, 7 HPV infections, 6 condylomas, 7 LSIL, 14 HSIL and 8 cancers were found, with 95 percent positive for HPV genome when tested using both L1 and E6 primers. HPV 16 was most prevalent (73.1 percent). HPV 16 DNA was integrated within the host genome in 3 LSIL. One LSIL progressed to HSIL by 13 months after first diagnosis. Among HPV 16-positive HSIL cases, 50 percent contained integrated viral DNA. HPV 16 E2 gene disruption was seen in 7 cancers (87.5 percent). Only smal-cell carcinoma showed intact HPV 16 E2 gene. Abnormal p53 bands detected by PCR/SSCP were observed in 4 cases: 2 squamous carcinoma with parametrium (exon 8) and two cervical intraepithelial neoplasia (CIN) III (exons 5 and 7). All cases presented HPV 16 E2 gene loss. CONCLUSIONS: The sample had a high rate of high-risk HPV detected in benign and malignant lesions; high cervical cancer burden; HPV 16 DNA integration in all except one case of cancer; p53 gene changes in CIN III and in invasive cancer cases associated with DNA integration

Caracterização do estado físico do ADN de papilomavírus humanos em lesões cervicais pré-malignas e malignas / Characterization of the physical state of human papillomavirus DNA in cervical lesions premalignant and malignant

A integração do ADN do papilomavírus humano ao genoma celular é um fator essencial para progressão maligna. Este processo usualmente interrompe ou deleta as regiões de sequências de leitura aberta de E1 ou E2, o qual leva à superexpressão das oncoproteínas virais E6/E7 e subsequente transformação maligna...Controle positivos e negativos foram utilizados. Oligonucleotídeos que amplificam a região do ADN humano de 330 bp para a beta-actina foram usados como controle interno. O HPV 16 foi o tipo predominantemente encontrado nas lesões cervicais pré-malignas (87,5%) e nas lesões malignas (77%) e a integração de seu ADN ocorreu em vinte e duas pacientes (71%). Nove (29%) dos casos demonstraram a existência da forma epissomal. O ADN do HPV 18 foi visto em 12,5% das HSIL e em 27% dos carcinomas com integração em 50% dos casos. A diferença entre as formas epissomal e integrada do ADN do HPV 16 foi estatisticamente significativa (p,= 0,05). Apesar das limitações da técnica de PCR em identificar a coexistência das formas epissomal e integrada, nossos resultados sugerem que a integração do ADN do HPV 16 deve ser um útil marcador para progressão maligna.

Expressão da proteína Bel-2 e sua relação com a apoptose espontânea e induzida pelo etoposido nas leucemias / Expression of protein Bel-2 and its relationship to spontaneous apoptosis and induced by etoposide in leukemias

BCL-2 pertence a uma família de proteínas reguladoras da apoptose, que podem ser antagonista à morte celular (BCL-2, BCL-x1, Mcl-1, A1) ou agonista a morte (Bax, Bak, Bcl-xs, Bad). No entanto, na LMA foi encontrado uma correlação entre os altos níveis de Bcl-2 e os baixos índices de apoptose espontânea e apoptose induzida pelo ETO, sugerindo que o aumento da expressão da proteína Bcl-2, parece conferir resistância à drogas, podendo resultar num prognóstico desfavorável aos pacientes...