Coxsackievirus A6 strains causing an outbreak of hand-foot-and-mouth disease in Northeastern Brazil in 2018

ABSTRACT Hand-foot-and-mouth disease (HFMD) is a highly contagious viral disease commonly associated to Enteroviruses (EV). During 2018, Brazil faced massive HFMD outbreaks spread across the country. This study aimed to characterize the EV responsible for the HFMD outbreak that occurred in Paraiba State, Brazilian Northeastern region, in 2018, followed by a phylogenetic analysis to detail information on its genetic diversity. A total of 49 serum samples (one from each patient) collected from children ≤ 15 years old, clinically diagnosed with HFMD were tested for EV using conventional RT-PCR and RT-qPCR. EV infection was confirmed in 71.4% (35/49) of samples. The mean and median ages were 1.83 years and one year old, respectively. Twenty-two EV-positive samples were successfully sequenced and classified as EV-A species; 13 samples were also identified with the CV-A6 genotype. The phylogenetic analysis (VP1 region) of three samples revealed that the detected CV-A6 strains belonged to sub-lineage D3. The CV-A6 strains detected here clustered with strains from South America, Europe and West Asia strains that were also involved in HFMD cases during the 2017-2018 seasons, in addition to the previously detected Brazilian CV-A6 strains from 2012 to 2017, suggesting a global co-circulation of a set of different CV-A6 strains introduced in the country at different times. The growing circulation of the emerging CV-A6 associated with HFMD, together with the detection of more severe cases worldwide, suggests the need for a more intense surveillance system of HFMD in Brazil. In addition, this investigation was performed exclusively on serum samples, and the analysis of whole blood samples should be considered and could have shown advantages when employed in the diagnosis of enteroviral HFMD outbreaks.

Simple protocol for population (Sanger) sequencing for Zika virus genomic regions

BACKGROUND A number of Zika virus (ZIKV) sequences were obtained using Next-generation sequencing (NGS), a methodology widely applied in genetic diversity studies and virome discovery. However Sanger method is still a robust, affordable, rapid and specific tool to obtain valuable sequences. OBJECTIVE The aim of this study was to develop a simple and robust Sanger sequencing protocol targeting ZIKV relevant genetic regions, as envelope protein and nonstructural protein 5 (NS5). In addition, phylogenetic analysis of the ZIKV strains obtained using the present protocol and their comparison with previously published NGS sequences were also carried out. METHODS Six Vero cells isolates from serum and one urine sample were available to develop the procedure. Primer sets were designed in order to conduct a nested RT-PCR and a Sanger sequencing protocols. Bayesian analysis was used to infer phylogenetic relationships. FINDINGS Seven complete ZIKV envelope protein (1,571 kb) and six partial NS5 (0,798 Kb) were obtained using the protocol, with no amplification of NS5 gene from urine sample. Two NS5 sequences presented ambiguities at positions 495 and 196. Nucleotide analysis of a Sanger sequence and consensus sequence of previously NGS study revealed 100% identity. ZIKV strains described here clustered within the Asian lineage. MAIN CONCLUSIONS The present study provided a simple and low-cost Sanger protocol to sequence relevant genes of the ZIKV genome. The identity of Sanger generated sequences with published consensus NGS support the use of Sanger method for ZIKV population studies. The regions evaluated were able to provide robust phylogenetic signals and may be used to conduct molecular epidemiological studies and monitor viral evolution.

Group A rotavirus gastroenteritis: post-vaccine era, genotypes and zoonotic transmission / Gastroenterite por rotavírus do grupo A: era pós-vacinal, genótipos e transmissão zoonótica

ABSTRACT This article provides a review of immunity, diagnosis, and clinical aspects of rotavirus disease. It also informs about the changes in epidemiology of diarrheal disease and genetic diversity of circulating group A rotavirus strains following the introduction of vaccines. Group A rotavirus is the major pathogen causing gastroenteritis in animals. Its segmented RNA genome can lead to the emergence of new or unusual strains in human populations via interspecies transmission and/or reassortment events.

RESUMO Este artigo fornece uma revisão sobre imunidade, diagnóstico e aspectos clínicos da doença causada por rotavírus. Também aponta as principais mudanças no perfil epidemiológico da doença diarreica e na diversidade genética das cepas circulantes de rotavírus do grupo A, após a introdução vacinal. O rotavírus do grupo A é o principal patógeno associado à gastroenterite em animais. Seu genoma RNA segmentado pode levar ao surgimento de cepas novas ou incomuns na população humana, por meio de transmissão entre espécies e eventos de rearranjo.

Rotavirus genotypes circulating in Brazil, 2007-2012: implications for the vaccine program / Genótipos de rotavírus circulando no Brasil, 2007-2012: implicações para o Programa de Vacinação

SUMMARYRegarding public health in Brazil, a new scenario emerged with the establishment of universal rotavirus (RV) vaccination programs. Herein, the data from the five years of surveillance (2007-2012) of G- and P-type RV strains isolated from individuals with acute gastroenteritis in Brazil are reported. A total of 6,196 fecal specimens were investigated by ELISA and RT-PCR. RVs were detected in 19.1% (1,181/6,196). The peak of RV incidence moved from June-August to September. RV was detected less frequently (19.5%) among children ≤ 5 years than in older children and adolescents (6-18 years) (40.6%). Genotype distribution showed a different profile for each year: G2P[4] strains were most prevalent during 2007-2010, G9P[8] in 2011, and G12P[8] in 2012. Mixed infections (G1+G2P[4], G2+G3P[4]+P[8], G2+G12P[8]), unusual combinations (G1P[4], G2P[6]), and rare strains (G3P[3]) were also identified throughout the study period. Widespread vaccination may alter the RV seasonal pattern. The finding of RV disease affecting older children and adolescents after vaccine implementation has been reported worldwide. G2P[4] emergence most likely follows a global trend seemingly unrelated to vaccination, and G12, apparently, is emerging in the Brazilian population. The rapidly changing RV genotype patterns detected during this study illustrate a dynamic population of co-circulating wildtype RVs in Brazil.

RESUMOEm relação à saúde pública no Brasil, um novo cenário emergiu com o estabelecimento dos programas universais de vacinação contra o rotavírus (RV). Os resultados de cinco anos (2007-2012) de vigilância dos genótipos G e P de cepas de RV detectadas em indivíduos com gastroenterite aguda no Brasil são descritos no presente estudo. Um total de 6196 amostras fecais foi investigado utilizando ELISA e RT-PCR. RVs foram detectados em 19,1% (1181/6196). O pico de incidência de RV se deslocou de junho-agosto para setembro. RV foi detectado com menor frequência entre crianças ≤ 5 anos (19,5%) quando comparado às crianças mais velhas e adolescentes (6-18 anos) (40,6%). A distribuição genotípica mostrou um perfil diferente a cada ano: a cepa G2P[4] foi prevalente durante 2007-2010, G9P[8] em 2011 e G12P[8] em 2012. Infecções mistas (G1+G2P[4], G2+G3P[4]+P[8], G2+G12P[8]), combinações não usuais (G1P[4], G2P[6]) e cepas atípicas (G3P[3]) também foram identificadas em todo o período do estudo. A vacinação em massa pode alterar o padrão sazonal do RV. A tendência do RV em infectar crianças mais velhas e adolescentes após a implementação da vacina tem sido relatada em todo o mundo. A emergência de G2P[4] segue provavelmente a tendência mundial e, aparentemente, não está relacionada à vacinação. G12 também parece estar emergindo na população brasileira. As rápidas mudanças nos padrões de genótipos dos RVs observados durante o período desse estudo ilustram a existência de uma população dinâmica de cepas selvagens co-circulando no Brasil.

Rotavirus in adults, Brazil, 2004-2011: G2P[4] dominance and potential impact on vaccination

Objectives: The aim of this study was to monitor rotavirus (RV) infections in adults >18 years with acute gastroenteritis during 2004–2011 national Brazilian RV surveillance. In addition, to characterize the RV group A (RVA) strains in order to gain insight into the supposed vaccine selective pressure imposed to Brazilian children population. Methods: A total of 2102 convenient fecal specimens were investigated by ELISA, PAGE, and RT-PCR. Results: RV was detected in 203 (9.6%) of 2102 specimens, and showed a marked peak of detection in September. RVA infection was detected in 9.4% (197/2102) and RV group C (RVC) in 0.3% (6/2102). The most frequent genotypes detected in 2004 and 2005 were G9P[8] (38.5%; 5/13) and G1P[8] (54.5%; 6/11), respectively. The dominant genotype identified from 2006 to 2011 was G2P[4] (64.4%; 116/180). Detection rate varied during the 8-year period of the study from 0.7% to 12.9%. Conclusion: The high detection rate of G2P[4] in adults provides further evidence that its dominance reflects the seasonality of RVA strains instead of the supposed selective advantage created by vaccination program. It also can be suggested that adult infections may serve as a reservoir to maintain RVA strains in childhood gastroenteritis. Considering the detection rate, the evident reduction of RVA frequency observed in children after vaccine introduction was not present in adults. .

Potencial zoonótico dos rotavírus: diversidade genética e transmissãointerespecífica / Zoonotic potential of rotavirus: genetic diversity and interspecies transmission

Rotavirus do grupo A (RVA) foi detectado em 19,1% (1181/6196) dos casos, com menor frequência (19,5%) entre as crianças ≤5 anos quando comparado à crianças em idade escolar (6-18 anos) (40,6%). Os genótipos de RVA mostrou distribuição diferente a cada ano: G2P[4] em 2007-2010, G9P[8] em 2011 e G12P[8] em 2012. O pico deincidência das infecções causadas por RVA deslocou de junho-agosto para setembro. A vacinação em massa pode reduzir o número de indivíduos susceptíveis, retardando o tempo de atividade do RVA e alterando seu padrão sazonal em todo o país. A tendência do RVA em infectar crianças mais velhas após a implantação da vacina temsido observada em todo o mundo, provavelmente devido à imunidade coletiva. A emergência de G2P[4] segue uma tendência mundial ditada pelas flutuações oscilatórias dos genótipos de RVA e, provavelmente, não está relacionada à vacinação.Aparentemente, G12 está emergindo na população brasileira, assim como o observado em todo o mundo. Em 2009, cepas incomuns de RVA G8P[6] (IAL- RN376 e IALRN377) foram detectadas em crianças indígenas. A sequência G8 da cepa IAL-RN376 compartilha um clado com cepas bovinas e humanas, exibindo maior identidade de nucleotídeos com as cepas humanas africanas DRC86 (98,9% nt; 99,6% aa) e DRC88 (98,7% nt; 99,3% aa), seguido pela cepa bovina africana NGRBg8 (95,7% nt; 97% aa). As sequências P[6] das cepas IAL-RN376 e IAL-RN377 exibiram maior identidade genômica com a cepa humana R330 (99,4-99,6% nt; 98,4-99,2% aa) detectada na Irlanda e uma relação genética próxima com a cepa RVA de morcego africano KE4852/07 (94,6-94,7% nt; 94,2-95% aa). Estes dados sugerem que um rearranjo entre cepas de RVA de origem bovina e de quirópteros poderia ter ocorrido em hospedeiro(s) animai(s) antes de sua transmissão para os seres humanos. A cepa incomum de RVA G3P[3] (IAL-R2638) foi...

Group A Rotavirus (RVA) was detected in 19.1% (1181/6196); incidence peaked in September. RVA was detected less frequently (19.5%) among children ≤5 years than in older children (6-18 years) (40.6%). RVA Genotype distribution showed a different profile for each year: G2P[4] from 2007 to 2010, G9P[8] in 2011, and G12P[8] in 2012. The peak of RVA infections moved from June-August to September. Widespread vaccination may reduce the number of susceptible individuals, delaying the timing of RVA activity and altering its seasonal pattern across the country. A tendency of RVArelated cases to affect older children after vaccine implementation has been observed worldwide, probably due to herd immunity. G2P[4] emergence most likely follows a global trend dictated by the oscillatory fluctuations of RVA genotypes seemingly unrelated to vaccination. G12 apparently is emerging in Brazilian population as observed worldwide. In 2009, unusual strains of RVA G8P[6] (IAL-RN376 and IALRN377) genotype were detected in Brazilian indians children. IAL-RN376 G8 sequence shares a clade with bovine and human strains, displaying highest nucleotide identity to African human strains DRC86 (98.9% nt; 99.6% aa) and DRC88 (98.7% nt; 99.3% aa), and following by African bovine NGRBg8 strain (95.7% nt; 97% aa). IAL-RN376 and IAL-RN377 P[6] sequences showed highest identity to human R330 strain (99.4-99.6% nt; 98.4-99.2% aa) from Ireland, and closely genetic relationship to African fruit bat RVAstrain KE4852/07 (94.6-94.7% nt; 94.2-95% aa). These data su ggests that a reassortment between bovine and bat RVA strains could have occurred in animalhost(s) preceding the transmission to human. The unusual RVA G3P[3] (IAL-R2638) strain was detected from a 1-year-old child patient in 2011. The VP7 gene of the IALR2638 strain displayed the highest nucleotide...

Rotavirus G2P[4] and G2P[4]+[6] infections during norovirus gastroenteritis outbreak: summer season 2010, Brazil

Introduction This study aimed to monitor the seasonality of rotavirus infection, and gain insight into the variability of Brazilian strains. Methods A total of 28 stool samples were analyzed from 698 revised cases of gastroenteritis during a norovirus outbreak in the summer of 2010 in Guarujá, Brazil. Diagnosis was performed using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), and sequencing. Results Rotavirus infection was detected in 17.9% (5/28) of samples; 4 samples were G2P[4] genotype, and one G2P[4]+P[6] genotype. G2 and P[4] sequences showed a genetic relationship to strains from India and Russia, respectively. Conclusions The seasonal pattern of rotavirus may be a consequence of human activity apart from climate factors. .

Profile of Brazilian scientific production on A/H1N1 pandemic influenza / Perfil da produção científica brasileira sobre a gripe pandemica de influenza A/H1N1

In the last few years, bibliometric studies have proliferated, seeking to provide data on world research. This study analyzes the profile of the Brazilian scientific production in the A (H1N1) influenza field between 2009 and 2011. The research was conducted in MEDLINE, SciELO and LILACS databases, selecting papers in which the term "H1N1" and "Brazil" were defined as the main topics. The data were analyzed taking into consideration the Brazilian state and institution in which the articles were produced, the impact factor of the journal and the language. The research revealed 40 documents (27 from MEDLINE, 16 from SciELO and 24 from LILACS). The journal impact factor ranged from 0.0977 to 8.1230. A similar amount of articles were written in English and Portuguese and São Paulo was the most productive state in the country, with 95% of the Brazilian production originating from the Southern and Southeastern regions. Linguistic data indicate that previous efforts made in order to improve the scientific production of Brazilian researchers making their observations attain a broader scientific audience produced results. It is necessary to assess the scientific studies, especially those conducted with public funds, in order to ensure that the results will benefit society.

Nos últimos anos, estudos bibliométricos proliferaram, procurando prover dados sobre a pesquisa mundial. O presente estudo analisou o perfil da produção científica brasileira no campo da influenza A (H1N1) durante o período de 2009 a 2011. A pesquisa foi conduzida através das bases de dados Medline, SciELO e Lilacs, selecionando artigos onde os termos "H1N1" e "Brazil" foram definidos como tópicos principais. Os dados foram analisados considerando-se: o estado brasileiro e a institutição onde o trabalho foi produzido, o fator de impacto de periódico e a língua. A pesquisa revelou 40 documentos (27 provenientes do Medline, 16 do SciELO e 24 do Lilacs). O fator de impacto do periódico variou de 0.0977 a 8.1230. Uma quantidade similar de artigos foi escrita em inglês e em português. São Paulo foi o estado mais produtivo no país e 95% da produção eram provenientes das regiões Sul e Sudeste. Os dados linguísticos indicam que esforços anteriores para melhorar a produção científica dos pesquisadores brasileiros, fazendo com que suas observações atingissem um público científico mais amplo, foram alcançados. É necessário avaliar os estudos científicos, especialmente os realizados com fundos públicos, a fim de assegurar que os resultados beneficiem a sociedade.

Caracterização molecular de cepas de rotavírus e norovírus: um estudo de 6 anos (2004-2009) / Characterization of rotavirus and norovirus strains: a 6-year study (2004-2009)

OBJETIVO: Monitorar infecções causadas por rotavírus (RV) e norovírus (NoV) em crianças hospitalizadas < 5 anos com gastroenterite aguda provenientes do estado de São Paulo durante um período de 6 anos (2004-2009). MÉTODOS: Este estudo retrospectivo foi realizado em 61 centros médicos, utilizando amostras fecais coletadas por conveniência, analisadas por ensaio imunoenzimático, eletroforese em gel de poliacrilamida, transcrição reversa seguida de reação em cadeia pela polimerase e sequenciamento para caracterização dos genótipos. RESULTADOS: Infecções por RV e NoV foram detectadas em 29,6 por cento (144/487) e 29,2 por cento (26/89) das amostras, respectivamente. Os genótipos de RV detectados com maior frequência foram: G9P[8] em 2004; G1P[8] em 2005; G9P[8] em 2006; e G2P[4] durante os anos de 2007, 2008 e 2009. A taxa de detecção diminuiu de 36,3 por cento (33/91) em 2004 para 4,2 por cento (4/95) em 2009. NoV pertencente ao genogrupo GII foi encontrado em 61,6 por cento (16/26) das amostras, e GI em 11,5 por cento (3/26). Infecções mistas por NoV e RV foram observadas em 2,2 por cento (2/89) das amostras, envolvendo as cepas GI+G9P[8] e GI+G2P[4]. CONCLUSÕES: A distribuição dos genótipos de RV variou com os anos, acompanhada pela redução no número de casos detectados. Ė necessário intensificar a vigilância pós-implantação da vacina contra RV, visando monitorar as cepas circulantes e sua eficácia contra possíveis genótipos emergentes. Os NoVs têm sido cada vez mais identificados como agentes etiológicos relevantes entre crianças hospitalizadas e exercem um papel importante na etiologia viral da gastroenterite pediátrica aguda no estado de São Paulo.

OBJECTIVE: To monitor rotavirus (RV) and norovirus (NoV) infections in hospitalized children < 5 years with acute gastroenteritis in the state of São Paulo, Brazil, during a 6-year period (2004- 2009). METHODS: This retrospective study was conducted with 61 medical centers with convenient surveillance fecal specimens, investigated by enzyme-linked immunosorbent assay, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, reverse polymerase chain reaction and sequencing to genotype characterization. RESULTS: RV and NoV infections were detected in 29.6 percent (144∕487) and 29.2 percent (26/89) of the samples, respectively. The most frequent RV genotypes detected were G9P[8] in 2004; G1P[8] in 2005; G9P[8] in 2006; and G2P[4] during 2007, 2008, and 2009. Detection rate declined from 36.3 percent (33∕91) in 2004 to 4.2 percent (4/95) in 2009. NoV genogroup GII was found in 61.6 percent (16/26) of the samples, and GI in 11.5 percent (3/26). Mixed NoV-RV infections were observed in 2.2 percent (2/89) of the samples, involving GI+G9P[8] and GI+G2P[4] strains. CONCLUSIONS: Genotype distribution varied according to collection year, accompanied by a reduction in detection rate. Use of RV vaccine requires implementation of post-marketing surveillance to monitor RV strain diversity and its efficacy against possible new emerging genotypes. NoVs have been increasingly identified as relevant etiological agents among hospitalized children and play an important role in the viral etiology of pediatric acute gastroenteritis in the state of São Paulo.

Apoptose e modelos in vivo para estudo das moléculas relacionadas a este fenômeno / Apoptosis and in vivo models to study the molecules related to this phenomenon

Apoptosis or programmed cell death is a physiological process, essential for eliminating cells in excess or that are no longer necessary to the organism, acting on tissue homeostasis, although the phenomenon is also involved in pathological conditions. Apoptosis promotes activation of biochemical pathways inside cells called caspase pathway, of the proteins responsible for the cleavage of several cell substrates, leading to cell death. Antiapoptotic members of the Bcl-2 family (B cell CLL/lymphoma 2), that belong to the intrinsic route of the activation of caspases, such as Bcl-xL (extra-large B-cell lymphoma) and Bcl-w (Bcl-2-like 2), act predominantly to prevent that pro-apoptotic members, such as Bax (Bcl-2-associated X protein) and Bak (Bcl-2 relative bak) lead to cell death. Antiapoptotic molecules are considered potentially oncogenic. Murine models are known to be valuable systems for the experimental analysis of oncogenes in vivo, and for the identification of pharmacological targets for cancer and to assess antitumor therapies. Given the importance of tumorigenesis studies on the immune responses to cancer and the possibility of investigating the participation of antiapoptotic molecules in tumor progression in vivo, the development of new models may be platforms for studies on tumorigenesis, immune antitumor responses, investigation of the ectopic expression of antiapoptotic molecules and immunotherapies for tumors.

A apoptose, ou morte celular programada, é um processo fisiológico essencial para a eliminação de células em excesso ou que não são mais necessárias ao organismo, atuando na homeostase dos tecidos; entretanto, esse fenômeno também está envolvido em condições patológicas. A apoptose promove a ativação de vias bioquímicas dentro das células, denominada via das caspases, proteínas responsáveis pela clivagem de diversos substratos celulares, levando as células à morte. Membros antiapoptóticos da família Bcl-2 (B cell CLL/lymphoma 2), pertencentes à via intrínseca de ativação das caspases, como Bcl-xL (B-cell lymphoma-extra large) e Bcl-w (Bcl-2-like 2) atuam predominantemente prevenindo que os membros pró-apoptóticos, como Bax (Bcl-2-associated X protein) e Bak (Bcl-2 relative bak) ocasionem a morte celular. Moléculas antiapoptóticas são consideradas potencialmente oncogênicas. Sabe-se que os modelos murinos são sistemas valiosos para a análise experimental de oncogenes in vivo, bem como para a identificação de alvos farmacológicos do câncer e para avaliar terapias antitumorais. Em vista da importância dos estudos de tumorigênese e respostas imunes contra o câncer e da possibilidade de investigar a participação de moléculas antiapoptóticas na progressão tumoral in vivo, o desenvolvimento de novos modelos poderá servir como plataforma para estudos de tumorigênese, respostas imunes antitumorais, investigação de expressão ectópica de moléculas antiapoptóticas e imunoterapias contra tumores.

Evaluation of enterovirus 71 immune status in São Paulo state, Brazil / Avaliação da situação imunitária contra enterovírus 71 no estado de São Paulo, Brasil

Antibodies to Enterovirus 71 (EV71) were evaluated in São Paulo State during 1999-2005. The titer of neutralizing antibodies against EV71 was determined by microneutralization assay, and a titer of > 1:8 was defined as indicative of protected immunity. Neutralizing antibodies to EV71 were observed in 12.4 percent (55/442) of sera samples, a low protective rate, suggesting that EV71 infection is uncommon in this region, but that there is a relatively high susceptibility to EV71 related diseases, which is worrying considering the recent Asian outbreaks. Also, a significant location-specific difference in seropositivity was observed. Neutralizing antibodies to EV71 were observed in 8.7 percent (21/241) of São Paulo metropolitan area sera samples, and 16.9 percent (34/201) of the sera samples from other municipalities. A high number of Brazilian residents live in country and coastal areas without adequate access to piped water or sanitation. This situation may contribute to the EV71 dissemination in these zones. The analysis of environmental samples could possibly make a valuable contribution to studies on the epidemiology of EV71.

Anticorpos para Enterovírus 71 (EV71) foram avaliados no Estado de São Paulo durante 1999-2005. O título de anticorpos neutralizantes contra EV71 foi determinado pelo ensaio microneutralização, e um título de > 1:8 foi definido como indicador de imunidade protetora. Anticorpos neutralizantes para EV71 foram observados em 12,4 por cento (55/442) das amostras de soro, uma baixa taxa de proteção, sugerindo que a infecção pelo EV71 é incomum nesta região e que existe alta susceptibilidade a doenças relacionadas ao EV71, o que é preocupante considerando os recentes surtos asiáticos. Ainda, foi observada diferença significativa na soropositividade em relação à localização, onde 8,7 por cento (21/241) e 16,9 por cento (34/201) das amostras provenientes da região metropolitana de São Paulo, e demais municípios, respectivamente, apresentaram anticorpos neutralizantes para EV71. Um grande número de brasileiros vive em áreas rurais e à beira-mar, sem acesso adequado à água encanada ou saneamento. Essa situação pode contribuir para a disseminação de EV71 nessas regiões. A análise de amostras ambientais poderia gerar contribuição valiosa para estudos sobre a epidemiologia da EV71.

Câncer e modelos experimentais de tumores murinos / Cancer and experimental models of mouse tumor

Nos últimos anos, a pesquisa do câncer proporcionou avanços importantes quanto à complexidade de desenvolvimento do tumor, em particular, sobre os mecanismos moleculares que são a base da transformação progressiva de células normais em derivados altamente malignos. A análise molecular do desenvolvimento tumoral em pacientes não é trivial, pois necessita da disponibilidade de biópsias em diversos estágios de transformação. Além disso, os estudos dos processos de metástase, de angiogênese e da resposta imune contra os tumores in vitro não mimetizam o que ocorre in vivo. Por esta razão, os modelos murinos experimentais de câncer têm desempenhado papel vital na compreensão da tumorigênese e suas relações com o ambiente in vivo, em que existe a dificuldade de avaliação de novos métodos diagnósticos e as ações terapêuticas de drogas contra tumores em pacientes. Nesta revisão, são discutidas as abordagens experimentais, técnicas e estratégias utilizadas no estudo de tumores em modelos murinos com ênfase na resposta imune contra o câncer e, ainda, as limitações conceituais e clínicas de cada sistema na sua aplicação no estudo do câncer em humanos.

Over the past years, cancer research has gained important insights on the complexity of tumor development,particularly on the molecular mechanisms that underlie the progressive transformation of normal cellsinto malignant derivatives. The molecular analysis of tumor development in patient is not meaningless,because of the unavailability of biopsies from different tumor transformation stages. Furthermore, studies onmetastasis, angiogenesis and the immune response to in vitro tumors processes, do not simulate what occurin vivo. For this reason, the murine experimental cancer models have played a vital role in understandingthe tumorigenesis and its relation with the in vivo environment, because it is difficult to assess the noveldiagnostic methodologies and the anticancer therapeutic drugs in patients. In the present review, theexperimental approach, techniques and strategies used in the study on murine cancer models are considered,emphasizing the immune response against cancer, and also the conceptual and clinical limitations of eachsystem and their applications in the human cancer study.Key words. cancer, immunology, experimental tumor, murine models, tumorigenesis, tumor cells.

Caracterização de genótipos de rotavírus em creches: era pré e pós-vacinação contra o rotavírus / Characterization of rotavirus strains from day care centers: pre-and post-rotavirus vaccine era

OBJETIVOS: Em 2006, a vacina contra rotavírus foi incluída no Programa Nacional de Imunização. Este estudo teve como objetivo analisar os resultados da vigilância de genótipos de rotavírus em crianças < 5 anos com gastrenterites agudas provenientes de creches no estado de São Paulo por um período de 5 anos. MÉTODOS: Este estudo retrospectivo foi realizado em 30 creches no período de 2004 a 2008, com amostras fecais convenientes da vigilância das diarreias agudas, analisadas por ELISA, SDS-PAGE, RT-PCR e sequenciamento genético para caracterização do genótipo. RESULTADOS: Infecções por rotavírus foram detectadas em 28,3 por cento de amostras (38/134). Os genótipos mais frequentes detectados foram: G9P[8] e G1P[8] em 2004; G1P[8] em 2005; GNTP[NT] em 2006; G2P[4] em 2007; e nenhum caso foi relatado em 2008. Infecções mistas não foram observadas. A taxa de detecção diminuiu de 65,7 por cento (23/35) em 2004 para 50 por cento (9/18) em 2007. CONCLUSÕES: A distribuição do genótipo variou de acordo com os anos, acompanhada pela redução no número de casos detectados. É necessário intensificar a vigilância pós-implantação da vacina contra rotavírus, visando monitorar as linhagens circulantes e sua eficácia contra possíveis genótipos emergentes.

OBJECTIVES: In 2006 the rotavirus vaccine was included in the Brazilian Immunization Program. The aim of this study was to report the results of a 5-year surveillance study of rotavirus strains in children < 5 years with acute gastroenteritis from day care centers in the state of São Paulo, Brazil. METHODS: This retrospective study was conducted with 30 day care centers from 2004 to 2008 with convenient surveillance fecal specimens, investigated by ELISA, SDS-PAGE, RT-PCR and gene sequencing to genotype characterization. RESULTS: Rotavirus infection was detected in 28.3 percent of samples (38/134). The most frequent genotypes detected were G9P[8] and G1P[8] in 2004; G1P[8] in 2005; GNTP[NT] in 2006; G2P[4] in 2007; and there were no cases in 2008. Mixed infections were not observed. Detection rate declined from 65.7 percent (23/35) in 2004 to 50 percent (9/18) in 2007. CONCLUSIONS: Genotype distribution varied according to collection year, accompanied by a reduction in detection rate. Use of rotavirus vaccine requires implementation of post-marketing surveillance to monitor rotavirus strain diversity and its efficacy against possible new emerging genotypes.

Echovírus 6 associado à doença exantemática / Echovirus 6 associated with exanthematic disease

Exantema viral é considerado problema comum em regiões tropicais, afetando principalmente crianças. Diversos exantemas cutâneos estão associados a infecções por Enterovirus. Amostras biológicas provenientes de uma criança apresentando exantema generalizado foram enviadas ao Laboratório de Vírus Entéricos do Instituto Adolfo Lutz para a realização do diagnóstico laboratorial. Amostra viral isolada em RD (human rhabdomyosarcoma cells) foi submetida à reação em cadeia pela polimerase apresentando um produto de 437 pares de base, característico de gênero Enterovirus. O sorotipo echovirus 6 (E-6) foi identificado por ensaio de imunofluorescência indireta. Em adição, as amostras pareadas de soro apresentaram soroconversão para E-6. Até o momento, não há relatos do envolvimento de E-6 associado a doenças exantemáticas no Brasil, enfatizando a importância da vigilância epidemiológica para essas doenças e suas complicações.

Viral exanthems are a common problem in tropical regions, particularly affecting children. Various skin rashes have been reported in acute infections caused by Enterovirus. Biological samples from a child who presented generalized rashes were sent to the Enteric Virus Laboratory of the Adolfo Lutz Institute for laboratory diagnosis to be performed. A viral sample isolated from RD (human rhabdomyosarcoma cells) was subjected to the polymerase chain reaction and showed a 437-base pair product that was characteristic of the Enterovirus genus. Echovirus 6 (E-6) serotype was identified using the indirect immunofluorescence test. In addition, paired serum samples presented seroconversion to E-6. So far, there have not been any reports of E-6 involvement in exanthematic diseases in Brazil. Thus, the importance of epidemiological surveillance for these diseases and their complications is emphasized.

Echovirus 6 associated to aseptic meningitis outbreak, in São Joaquim da Barra, São Paulo, Brazil

An aseptic meningitis outbreak occurred during a period from February to May 2004 in São Joaquim da Barra, a town in the northern region of São Paulo State. A total of 40 cases were reported to the Epidemiological Surveillance Center of São Paulo State. Cerebrospinal fluid samples obtained from 23 patients were sent to the Adolfo Lutz Institute for isolation of the virus. These samples were inoculated into RD, HEp2 and Vero cell lineages and those presenting a cytopathogenic effect were selected for analysis by indirect immunofluorescence assay (IFA), neutralization testing (Nt) and reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Cytopathogenic effects were observed in 52.2 percent (12/23) of these samples. All isolated viruses were identified as human enterovirus by IFA and RT-PCR and echovirus 6 was typed by IFA and Nt. Our results confirmed the participation and importance of echovirus as the etiological agent responsible for this outbreak and the serotype diversity of human enteroviruses circulating in São Paulo State.

Entre fevereiro e maio de 2004, em São Joaquim da Barra, Estado de São Paulo, foi notificado ao Centro de Vigilância Epidemiológica (CVE) um surto de meningite asséptica (MA) envolvendo 40 indivíduos. Foram enviadas ao Instituto Adolfo Lutz amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) de 23 pacientes com MA para tentativa de isolamento viral. Estas amostras foram inoculadas em 3 linhagens celulares: RD, HEp2 e Vero. Culturas celulares que apresentaram efeito citopático (ECP) foram submetidas a ensaio de Imunofluorescência Indireta (IFI), reação de Neutralização (Nt) e RT-PCR (Transcrição Reversa Reação em Cadeia da Polimerase). Em 52,2 por cento (12/23) das amostras foi observado ECP. Todos os vírus isolados foram identificados como gênero HEV por IFI e RT-PCR e o sorotipo echovirus 6 (E-6) por IFI e Nt. Nossos resultados confirmam a participação e importância dos echovirus como agente etiológico responsável pelo surto ocorrido e a diversidade de sorotipos circulantes no Estado de São Paulo.

Transdução de sinal: um olhar sobre a insulina / Signal transduction: an overview on insulin

Os esforços de muitos laboratórios têm concentrado no desenvolvimento de pesquisas e na descoberta de vias moleculares que atuam na mediação da resposta pleiotrópica da insulina. Os estudos sobre o mecanismo de ação insulínico levaram a descoberta do receptor tirosina quinase e várias proteínas ligantes que são diretamente ativadas por meio de sítios de tirosinas fosforiladas existentes nesses receptores. A família dos substratos do receptor de insulina (IRSs) são as principais proteínas envolvidas na transdução do sinal intracelular desencadeado pela insulina as quais são encontradas em uma grande variedade de células e tecidos. Esse trabalho de revisão versa sobre o tema referente ao complexo do receptor de insulina e a cascata de sinalização induzida por esse hormônio.

Echovirus 4 associated to hand, foot and mouth disease / Echovirus 4 associado à doença de mão, pé e boca

Hand, foot and mouth disease (HFMD) is a contagious enteroviral infection occurring primarily in children and characterized by vesicular palmoplantar eruptions and erosive stomatitis. Echovirus 4 (EV-4) has been commonly associated with aseptic meningitis. The association of HFMD with EV-4 has not been reported previously. Two samples of a 14-month child who presented mild fever, sores in the mouth, rash with blisters on the palm of hands and soles of feet were sent to Enteric Viruses Laboratory of Adolfo Lutz Institute. Clinical samples were inoculated in three different cell lines, and those which presented cytopathic effect (CPE), were submitted to Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) and "one step" RT-PCR. Agarose gel electrophoresis from RT-PCR product, showed a product with 437 bp, which is characteristic of Enterovirus group. Echovirus 4 was identified by IFA. Although HFMD is a viral infection associated mainly with Enterovirus 71 (HEV-71) and Coxsackievirus A16 (CV-A16), our results demonstrate a diversity of serotype related to HFMD and stress the importance of epidemiological surveillance to this disease and its complications.

A Doença de Mão, Pé e Boca (DMPB) é uma infecção enteroviral contagiosa que ocorre principalmente em crianças sendo caracterizada por erupções palmoplantares vesiculares e estomatite. Echovirus 4 (EV-4) é comumente associado a meningite asséptica. A associação de DMPB por EV-4 não foi descrita anteriormente. Duas amostras provenientes de uma criança de 14 meses apresentando febre, secreções na garganta e exantemas nas palmas das mãos e dos pés, foram enviadas para o Laboratório de Vírus Entéricos do Instituto Adolfo Lutz. As amostras foram inoculadas em três diferentes linhagens celulares; aquelas que apresentaram efeito citopático (ECP), foram submetidas a ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) e "one step" RT-PCR. A eletroforese em gel de agarose realizada com o produto de PCR apresentou um produto de 437pb, característico de grupo Enterovirus. O sorotipo EV-4 foi identificado por IFI. Apesar da DMPB ser uma infecção viral associada principalmente com Enterovirus 71 (HEV-71) e Coxsackievirus A16 (CV-A16), nossos resultados enfatizam a necessidade de estudos epidemiológicos e laboratoriais direcionados ao EV-4 como agente causador de DMPB.