Agaricus brasiliensis polysaccharides stimulate human monocytes to capture Candida albicans, express toll-like receptors 2 and 4, and produce pro-inflammatory cytokines

Abstract Background Agaricus brasiliensis is a medicinal mushroom with immunomodulatory and antitumor activities attributed to the -glucans presented in the polysaccharide fraction of its fruiting body. Since -glucans enhance cellular immunoresponsiveness, in this study we aimed to evaluate the effect of an acid-treated polysaccharide-rich fraction (ATF) of A. brasiliensis on the ability of human monocytes to adhere/phagocyte C. albicans yeast cells, their expression of pattern recognition receptors and their ability to produce cytokines. Methods Adhesion/phagocytosis of FITC-labeled C. albicans was evaluated by flow cytometry. Cells were incubated with specific fluorochrome-labeled antibodies for TLR2 and 4, GR and MR and also evaluated by flow cytometry. Monocytes were cultured with ATF, and culture supernatants were collected for analysis of in vitro cytokine production by ELISA (TNF-, IL-1, IL-12 and IL-10). Results ATF significantly increased the adherence/phagocytosis of C. albicans by monocytes and this was associated with enhanced expression of TLR2 and TLR4, while no effect was observed on GR or MR. Moreover, expression of TLR4 and TLR2 was associated with higher levels of in vitro production of TNF- and IL-1, respectively. Production of IL-10 was also increased by ATF treatment, but we found no association between its production and the expression of Toll-like receptors. Conclusion Our results provided us with evidence that A. brasiliensis polysaccharides affect human monocytes probably through the modulation of Toll-like receptors.

Agaricus brasiliensis polysaccharides stimulate human monocytes to capture Candida albicans, express toll-like receptors 2 and 4, and produce pro-inflammatory cytokines

Agaricus brasiliensis é um cogumelo medicinal com atividades imunomoduladoras e antitumorais atribuídas aos ß-glucanos presentes na fração polissacarídica de seu corpo de frutificação. Uma vez que os ß-glucanos aumentam a imunorresponsividade celular, neste estudo objetivamos avaliar o efeito de uma fração rica em polissacarídeos tratados com ácido (ATF) de A. brasiliensis sobre a capacidade de monócitos humanos de aderir / fagocitar células de levedura C. albicans . expressão de receptores de reconhecimento de padrões e sua capacidade de produzir citocinas. Métodos: A adesão / fagocitose de C. albicans marcada com FITC foi avaliada por citometria de fluxo. As células foram incubadas com anticorpos marcados com fluorocromo específicos para TLR2 e 4, ßGR e MR e também avaliadas por citometria de fluxo. Os monócitos foram cultivados com ATF, e os sobrenadantes da cultura foram coletados para análise da produção de citocinas in vitro por ELISA (TNF-α, IL-1ß, IL-12 e IL-10). Resultados: ATF aumentou significativamente a aderência / fagocitose de C. albicans por monócitos e isso foi associado com expressão aumentada de TLR2 e TLR4, enquanto nenhum efeito foi observado em ßGR ou MR. Além disso, a expressão de TLR4 e TLR2 foi associada a níveis mais elevados de produção in vitro de TNF-α e IL-1, respectivamente. A produção de IL-10 também foi aumentada pelo tratamento com ATF, mas não encontramos associação entre sua produção e a expressão de receptores Toll-like. Conclusão: Nossos resultados nos forneceram evidências de que polissacarídeos de A. brasiliensis afetam monócitos humanos provavelmente através da modulação de receptores Toll-like.(AU)

Polysaccharide-rich fraction of Agaricus brasiliensis enhances the candidacidal activity of murine macrophages

A polysaccharide-rich fraction (ATF) of medicinal mushroom Agaricus brasiliensis was evaluated on the candidacidal activity, H2O2 and nitric oxide (NO) production, and expression of mannose receptors by murine peritoneal macrophages. Mice received three intraperitoneal (i.p.) injections of ATF and after 48 h their peritoneal resident macrophages were assayed against Candida albicans yeast forms. The treatment increased fungicidal activity and it was associated with higher levels of H2O2, whereas NO production was not affected. We also found that the treatment enhances mannose receptor expression by peritoneal macrophages, which are involved in the attachment and phagocytosis of non-opsonized microorganisms. Treatment of animals with ATF was able to enhance the clearance of C. albicans during the first 6 h after the experimental i.p. infection. Our results suggest that this extract can increase host resistance against some infectious agents through the stimulation of microbicidal activity of macrophages.

Determinaçäo por injeçäo direta no HPLC de cocaína em amostras de urina e em amostras de papelotes de cocaína e crack / Determination by direct injection into HPLC of cocaine, in urine samples, cocaine and crack unit samples

Desenvolveu-se um método analítico para a extraçäo e determinaçäo de cocaína em amostras de urina. O método permite a injeçäo direta da amostra de urina em uma coluna cromatográfica ISRP-C8 (100mm x 4,6mm DI), empregando uma fase móvel composta por uma soluçäo de fosfato dibásico de sódio 0,05mol.L (pH 8,0) e acetonitrila 70:30 (v/v)

Determinaçäo de cafeína em amostras de urina por injeçäo direta no HPLC / Determination of caffeine in urine samples by direct injection in to HPLC

Desenvolveu-se um método analítico para a extração e determinação das concentrações de cafeína em amostras de urina por cromatografia líquida de alta performance. O método envolve a injeção direta da amostra de urina em uma coluna cromatográfica ISRP (150mm X 4,6mm DI) empregando uma fase móvel composta por uma solução de fosfato dibásico de sódio 0,05 umol. L -1 (pH 8,0) e acetonitrila (90:10 v/v). As recuperações de cafeína presentes em amostras de urina fortificadas forma maiores que 98,40 mais ou menos 0,90 por cento com um desvio padrão relativo de 0,48 por cento. O limite de detecção para a determinação de cafeína foi de 0,1 mg.u L-1. O range de linearidade do detector foi determinado entre a s concentrações 0,1 a 18,0 ug.mL-1 para a cafeína.