Establecimiento de un cultivo discontinuo para la producción del factor de crecimiento epidérmico humano en levaduras: caracterización del producto / A bacth process for production of epidermal grow factor in yeast: product characterization

Se describe un proceso discontinuo para la producción del factor de crecimiento epidérmico humano (EGF-h) en Saccharomyces cerevisiae, con el promotor de la gliceraldehido 3-fosfato deshidrogensa (GAP) y el sistema de secreción del factor alfa. La proteina se excreta al medio de cultivo lo que facilita la purificación. Utilizando separaciones cromatográficas de intercambio iónico y exclusión molecular se obtuvo un producto de pureza superior al 95% según los análisis en cromtografía de fase inversa y electroforesis en geles SDF poliacrilamida. El proceso mostró un rendimiento de 36%. Se demostró que el producto obtenido fue biológicamente activo

Tratamientos analíticos de muestras de IFN alfa 2b h-rec, para su cuantificación por ELISA / Analyticaltreatments of rec-h alpha 2b interferon samples for their quantitation by ELISA

La obtención de interferón 2b humanos recombinante (IFN alfa 2b hr) en E. coli, en forma insoluble, hace necesario el estudio del ratamiento de las muestras para su cuantificación mediante un sistema inmunoenzimático tipo ELISA. De los sistemas analíticos ensayados para la extracción de proteina insoluble, el óptimo resultó una modificación del tapón L aemmli con un 1 % de SDS y 2,5 % de 2-merceptoetanol. Las proteinas de la cepa productora y la mayoría de los sistemas tampones empleados no influyeron sobre el reconocimiento inmunológico del interferón a diluciones mayores de 1/500

Control del proceso de purificación del factor de crecimiemto epidérmico humano recombinante (r-hEGF) mediante diferentes métodos analíticos / Control of the process of purification of the recombinant human epidermal growth factor with different analytical methods

Se aplicaron diferentes métodos analíticos al control del proceso de purificación del Factor de Crecimiento Epidérmico humano recombinante (r-hEGF). El radioinmunoensayo en fase liquida con anticuerpos policlonales permitió con sensibilidad de 0,5 ng/ml cuantificar la proteína durante el proceso de producción. Se demostró la factibilidad del uso de anticuerpos monoclonales en sistemas en solución y en fase sólida para sustitución de los anticuerpos policlonales. La separación con interacción hidrofóbica permitió la caracterización cromatográfica del r-hEGF evidenciando dos especies moleculares. Se estudió el comportamiento electroforético y se establecieron las condiciones óptimas para aplicar los sistemas elecforéticos en geles de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) como críterio de pureza del producto final