Apoptotic ratios and mitotic abnormalities in 17-Beta-estradiol-transformed human breast epithelial MCF-10F cells / Índices apoptóticos e anormalidades mitóticas em células epiteliais mamárias humanas MCF-10F transformadas pelo 17-Beta-estradiol

Treatment of human breast epithelial cells MCF-10F with 17-β-estradiol has been reported to result in E2-transformed cells which have given rise to highly invasive C5 cells that in turn generate tumors in SCID mice. From these tumors, various cell lines, among which C5-A6-T6 and C5-A8-T8, were obtained. Although different phases of the tumorigenesis process in this model have been studied in molecular biology and image analysis assays, no cytological data on apoptotic ratios and mitotic abnormalities have been established to accompany the various steps leading to 17-β-estradiol-treated MCF-10F cells to tumorigenesis. Here we detected that the apoptotic ratio decreases with the transformation and tumorigenesis progress, except for the tumor cell line C5-A8-T8, probably on account of its more intense proliferation rate and a more rapid culture medium consumption. Increased frequency of mitotic abnormalities contributed by triple- and tetrapolar metaphases, and by lagging chromosomes and chromosome bridges observed at the anaphase found by transformation and tumorigenesis progress. However, no difference was found under these terms when the C5-A6-T6 and C5-A8-T8 tumor cell lines were compared to each other. Present findings are in agreement with the nuclear instability and enrichment of dysregulated genes in the apoptotic process promoted by transformation and tumorigenesis in 17-β-estradiol-treated MCF-10F cells.

O tratamento das células epiteliais mamárias humanas MCF-10F com 17-β-estradiol tem sido relatado como resultando nas células transformadas E2, que deram origem às células C5, altamente invasivas, e que geraram tumores em camundongos SCID. A partir desses tumores foram originadas em cultura células tumorais, dentre as quais C5-A6-T6 e C5-A8-T8. Embora diversas fases do processo tumorigênico neste modelo tenham sido estudadas por ensaios de biologia molecular e análise de imagem, não foram ainda estimados dados citológicos referentes a índices apoptóticos e anomalias mitóticas que acompanhassem os vários passos que levam as células CF-10F tratadas com 17-β-estradiol à tumorigênese. Neste trabalho detectamos que o índice apoptótico decresce com a transformação e o avanço da tumorigênese, exceto na linhagem celular tumoral C5-A8-T8, provavelmente por causa de sua velocidade de proliferação mais intensa, que poderia levá-la a um consumo mais rápido do meio de cultura presente e à morte celular. Um aumento na frequência de anomalias mitóticas contribuídas por metáfases tripolares e tetrapolares e por pontes cromossômicas e cromossomos desgarrados, identificáveis na anáfase, foi observado com a transformação e o progresso da tumorigênese. Contudo não foram detectadas diferenças nesses parâmetros quando se compararam as linhagens tumorais C5-A6-T6 e C5-A8-T8 entre si. Os presentes achados estão de acordo com a instabilidade nuclear e o enriquecimento em desregulação de genes que atuam no processo apoptótico, promovidos pela transformação e tumorigênese nas células MCF-10F tratadas com 17-β-estradiol.

Evaluation of the cytotoxic and genotoxic potential of water from the River Paraíba do Sul, in Brazil, with the Allium cepa L. test / Avaliação do potencial citotóxico e genotóxico da água do Rio Paraíba do Sul através do teste Allium cepa

This work investigated the cytotoxic and genotoxic potential of water from the River Paraíba do Sul (Brazil) using Allium cepa roots. An anatomo-morphological parameter (root length), mitotic indices, and frequency of micronuclei were analysed. Eight bulbs were chosen at random for treatment for 24 to 120 hours with the River water collected in the years of 2005 and 2006 from sites in the cities of Tremembé and Aparecida (São Paulo state, Brazil). Daily measurements of the length of the roots grown from each bulb were carried out throughout the experiment. Mitotic index (MI) and frequency of micronuclei (MN) were determined for 2000 cells per root, using 3-5 root tips from other bulbs (7-10). Only in the roots treated with samples of the River water collected in 2005 in Tremembé city was there a decrease in the root length growth compared to the respective control. However, a reduction in MI values was verified for both sites analysed for that year. Considering the data involving root length growth and especially MI values, a cytotoxic potential is suggested for the water of the River Paraíba do Sul at Tremembé and Aparecida, in the year of 2005. On the other hand, since in this year the MN frequency was not affected with the river water treatments, genotoxicity is not assumed for the river water sampled at the aforementioned places.

Este trabalho é parte de uma investigação sobre o potencial citotóxico e genotóxico da água do Rio Paraíba do Sul (Brasil) utilizando raízes de Allium cepa. Foi analisado um parâmetro anátomo-morfológico (crescimento das raízes), bem como o índice mitótico e a frequência de micronúcleos. Aleatoriamente oito bulbos foram submetidos aos tratamentos de 24 a 120 horas com água do Rio proveniente dos pontos de coleta das cidades de Tremembé e Aparecida nos anos de 2005 e 2006. O comprimento das raízes de cada bulbo foi acompanhado diariamente ao longo do experimento. O índice mitótico (IM) e a frequência de micronúcleos (MN) foram determinados pela análise de 2.000 células por raiz, sendo utilizadas 3-5 raízes de outros bulbos (7-10). Somente as raízes tratadas com amostras de água coletadas em 2005 na cidade de Tremembé, apresentaram decréscimo no comprimento das raízes quando comparadas com o controle. Entretanto, foi observada redução do IM nas raízes tratadas com água de ambos os pontos de coleta no mesmo ano. Considerando os dados de crescimento de raiz e especialmente IM, um potencial citotóxico é sugerido para a água do Rio Paraíba do Sul em Tremembé e Aparecida, no ano de 2005. Por outro lado, para este mesmo ano, a frequência de micronúcleos não foi alterada; assim, a genotoxicidade não foi assumida para a água do Rio nos pontos mencionados.

Eye pigments of the blood-sucking insect, Triatoma infestans klug (Hemiptera, Reduviidae)

A pigmentação de olhos pretos (forma selvagem) e vermelhos (forma mutante) de Triatoma infestans foi estudada por espectrofotometria e comparada à de olhos vermelhos (selvagem) e brancos (mutante) de Drosophila melanogaster. Os perfis do espectro de absorção dos pigmentos de olho preto e vermelho de T. infestans foram semelhantes entre si e ao dos olhos de tipo selvagem de D. melanogaster. A similaridade com a forma selvagem de D. melanogaster indicou que ambos os tipos de olho de T. infestans continham omocromos do tipo xantomatina, o que foi confirmado por cromatografia ascendente em papel. Não foram detectadas pteridinas, melaninas e ominas como pigmentos de olho em T. infestans. A diferença na cor de olho em T. infestans foi considerada uma função da concentração de xantomatina, sendo menor o conteúdo de omocromo nos olhos vermelhos, embora isso provavelmente não afete a acuidade visual do inseto. Esses resultados estão de acordo com dados de outros autores quanto a semelhanças envolvendo outras características entre espécimes de olho preto e vermelho de T. infestans.

Experimentally induced heat- and cold-shock tolerance in adult Panstrongylus megistus (Burmeister) (Hemiptera, Reduviidae)

The survival rate of domestic male and female adult Panstrongylus megistus was studied after sequential heat and cold shocks in order to investigate shock tolerance compared to that previously reported for nymphs. Sequential shocks were such that a milder shock (0ºC, 5ºC, 35ºC, or 40ºC for 1 h) preceded a severe one (0ºC or 40ºC for 12 h), separated by intervals of 8, 18, 24, and 72 h at 28ºC (control temperature). The preliminary thermal shock induced tolerance to the more severe one, although tolerance intensity depended on the initial shock temperature and the interval between treatments. Despite the observed tolerance, the survival rate for insects subjected to both shocks decreased when compared to that of individuals subjected to a single mild shock. When tolerance differed with sex, females showed greater values than males. In contrast to the response detected in nymphs, for which higher heat tolerance values were sustained for intervals of up to 24 h (preliminary shock, 35ºC) or even longer (preliminary shock, 40ºC) between sequential shocks, significant values were verified in adults only for shock intervals of up to 8 h (preliminary shock, 40ºC). While findings for nymphs exhibited considerable cold-shock tolerance under conditions in which preliminary shocks were given at 5ºC or 0ºC and the periods between shocks were up to 72 h long, the adults were shown to be capable of acquiring a substancial tolerance response to a more severe cold shock only when the preliminary shock was given at 0ºC and shock interval surpassed 18 h. It is assumed that the mechanisms involved in the cellular protection of P. megistus under sequential temperature shocks (heat shock protein action?) may loose effectiveness with insect development.

Critical electrolyte concentration of spermatozoal chromatin containing histone H1 variants

The critical electrolyte concentrations (CEC) of sperm chromatin from animal species known or suspected to contain histone H1 variants were compared by examining the affinity of their DNA-protein complexes for toluidine blue in the presence of Mg2+. Bullfrog, sea urchin, bee and bumblebee spermatozoa were studied. The CEC for Rana catesbeiana and two sea urchin species were similar to that of histone H5-containing chromatin from chicken erythrocytes, thus confirming the biochemical and structural similarities of these DNA-protein complexes. The CEC for bees and the bumblebee, Bombus atratus, showed no particular phylogenetic relationship. We concluded that the CEC of histone H1-containing sperm cell chromatin is a useful indicator of variability in DNA-protein complexes but is of little phylogenetic value.

Effect of chloramine-T on the Feulgen-DNA response of bull spermatozoa

Valores Feulgen-DNA e áreas absorventes nucleares foram determinados por citofotometria de varredura em esfregaços de espermatozóides de touro tratados com uma soluçäo a 2% de cloramina-T (agente utilizado para remoçäo do muco presente no sêmen) por 5 a 15 min. Pôde ser demonstrado que o tratamento por cloramina-T mesmo por curtos períodos de tempo näo é recomendável para preparados a serem usados na detecçäo de conteúdos de DNA, pois o mesmo remove proteínas nucleares, afetando a cinética de hidrólise de Feulgen da cromatina de modo näo homogêneo