RESUMEN
ABSTRACT Objective: To verify the physiological action of triiodothyronine T3 on the expression of transforming growth factor α (TGFA) mRNA in MCF7 cells by inhibition of RNA Polymerase II and the MAPK/ERK pathway Materials and methods: The cell line was treated with T3 at a physiological dose (10−9M) for 10 minutes, 1 and 4 hour (h) in the presence or absence of the inhibitors, α-amanitin (RNA polymerase II inhibitor) and PD98059 (MAPK/ERK pathway inhibitor). TGFA mRNA expression was analyzed by RT-PCR. For data analysis, we used ANOVA, complemented with the Tukey test and Student t-test, with a minimum significance of 5%. Results: T3 increases the expression of TGFA mRNA in MCF7 cells in 4 h of treatment. Inhibition of RNA polymerase II modulates the effect of T3 treatment on the expression of TGFA in MCF7 cells. Activation of the MAPK/ERK pathway is not required for T3 to affect the expression of TGFA mRNA. Conclusion: Treatment with a physiological concentration of T3 after RNA polymerase II inhibition altered the expression of TGFA. Inhibition of the MAPK/ERK pathway after T3 treatment does not interfere with the TGFA gene expression in a breast adenocarcinoma cell line.
Asunto(s)
Humanos , Femenino , Triyodotironina/genética , Neoplasias de la Mama/genética , Adenocarcinoma/genética , Regulación Neoplásica de la Expresión Génica/genética , Factor de Crecimiento Transformador alfa/genética , Sistema de Señalización de MAP Quinasas/genética , Triyodotironina/metabolismo , Triyodotironina/farmacología , Proto-Oncogenes/genética , Neoplasias de la Mama/metabolismo , ARN Mensajero/genética , Adenocarcinoma/metabolismo , Factor de Crecimiento Transformador alfa/efectos de los fármacos , Factor de Crecimiento Transformador alfa/metabolismo , Línea Celular Tumoral/metabolismo , Células MCF-7/metabolismoRESUMEN
Devido ao diminuído potencial alergênico do leite de cabra, em relação ao leite de vaca, as proteínas do primeiro têm sido investigadas e mostram um amplo polimorfismos da ?S1-caseína, variando de produção nula até 7 g/L. No lócus gênico da ?S1-caseína já foram encontrados 18 alelos, sendo o alelo G relacionado a baixos níveis de ?s1-caseína (0,6 g/L), decorrente de uma transição G?A (guanina por adenina) no sítio doador de splice do intron 4, levando à perda do exon 4 durante o processamento do RNA mensageiro. No Brasil existem poucos relatos de estudos sobre o polimorfismo genético desta proteína. Assim, este trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo para detecção do alelo G do gene da ?S1- caseína e verificar sua existência em um grupo de animais caprinos. Para isto, leucócitos foram utilizados para isolamento de DNA com o reagente CTAB e um par de primer, desenhado com base na seqüência do GenBank (AJ504710), possibilitou a amplificação da região gênica de interesse, gerando produtos de PCR com tamanho de 550 pb. Após a digestão com a enzima AciI, foram observados dois fragmentos com tamanhos de 308 e 242 pb, indicando a presença da guanina no sítio doador de splice. Alguns animais, suspeitos de portarem o alelo G, tiveram amostras de DNA seqüenciadas. Os resultados mostraram inexistência da transição de base e, conseqüentemente, a inexistência do alelo G nos 80 animais estudados, indicando a necessidade de investigação de um número maior de animais, por se tratar de um alelo raro