Influencia adrenérgica y colinérgica sobre la producción de especies reactivas de oxígeno en neutrófilos humanos* / Adrenergic and cholinergic influence on the production of reactive oxygen species in human neutrophils*

RESUMEN Objetivos. Determinar y comparar el efecto de fármacos agonistas adrenérgicos y colinérgicos sobre la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) en neutrófilos de individuos sanos. Materiales y métodos. Se tomaron muestras de sangre total de cinco participantes para purificar los neutrófilos mediante el método de gelatina. Se midió la producción de ROS por quimioluminiscencia (QLM) usando un contador de centelleo y forbol-12-miristato-13-acetato (PMA) como estímulo. También se realizaron pruebas sin PMA para medir la producción espontánea. Posteriormente, con el mismo método se midió la formación de ROS en presencia de nicotina (agonista colinérgico), salbutamol y clonidina (agonistas adrenérgicos), cada uno en concentraciones de 10-2 M, 10-3 M, 10-4 M y 10-5 M. Se calculó el área integrada bajo las curvas de QLM y se halló el porcentaje de inhibición o de estimulación según sea el caso. Se comparó el efecto provocado por las drogas con sus controles correspondientes y se realizó el análisis estadístico. Resultados. Se obtuvo una disminución de la producción de ROS como efecto de las sustancias estudiadas con una diferencia significativa entre los controles y el efecto producido a 10-2 M, 10-3 M y 10-4 M. Este efecto aumentó de intensidad conforme la concentración de las drogas se incrementó. Los mayores porcentajes de inhibición se mostraron a 10-2 M y 10-3 M. Salbutamol presentó los máximos valores con todas las concentraciones con diferencia significativa entre su inhibición y la generada por las demás drogas. Conclusiones. Los estímulos adrenérgico y colinérgico tienen un efecto inhibitorio de la producción de ROS en neutrófilos de individuos sanos.

ABSTRACT Objectives. To determine and compare the effect of adrenergic and cholinergic agonist drugs on the production of reactive oxygen species (ROS) in neutrophils of healthy individuals. Materials and Methods. Whole blood samples were taken from five participants to purify neutrophils using the gelatin method. The production of chemiluminescent (QLM) ROS was measured using a scintillation counter and phorbol-12-myristat-13-acetate (PMA) as a stimulus. Non-PLA tests were also conducted to measure spontaneous production. Subsequently, with the same method, ROS formation was measured in the presence of nicotine (cholinergic agonist), salbutamol, and clonidine (adrenergic agonists), each in concentrations of 10-2 M, 10-3 M, 10-4 M, and 10-5 M. The area integrated under the QLM curves was calculated and the percentage of inhibition or stimulation was found as the case may be. The effect of the drugs was compared with their corresponding controls and statistical analysis was carried out. Results. A decrease in the production of ROS was obtained as an effect of the substances studied with a significant difference between the controls and the effect produced at 10-2 M, 10-3 M, and 10-4 M . This effect increased in intensity as drug concentration increased. The highest percentages of inhibition were shown at 10-2 M and 10-3 M. Salbutamol presented the maximum values with all the concentrations with a significant difference between its inhibition and that generated by the other drugs. Conclusions. Adrenergic and cholinergic stimuli have an inhibitory effect on the production of ROS in neutrophils of healthy individuals.

Efecto vasodilatador e inhibidor de vasoconstricción del extracto hidroalcohólico de hojas de Olea europaea (olivo) sobre anillos aórticos de ratas / Vasodilator and vasoconstriction inhibitor effect of Olea europaea (olive) leaf hydroalcoholic extract on rat aortic rings

Objetivos: Evaluar el efecto vasodilatador, la inhibición de la vasoconstricción, así como el mecanismo responsable, del extracto hidroalcohólico de hojas de Olea europaea (olivo), sobre anillos aórticos en ratas. Diseño: Experimental. Lugar: Centro de Investigación y Desarrollo Científico, Facultad de Medicina, Universidad Nacional de San Agustín, Arequipa, Perú. Material biológico: Hojas de Olea europea y anillos aórticos de Rattus norvegicus, variedad albina swiss. Intervenciones: Se obtuvo un extracto hidroalcohólico de las hojas de Olea europaea. Se usó anillos aórticos de rata en cámara de órganos aislados y se registró la actividad vasomotora con un transductor de tensión isométrica. Se produjo contracción basal máxima con CaCl2 6 mM y se determinó el efecto vasodilatador con dosis de 25, 50 y 100 mg/mL de extracto hidroalcohólico de las hojas de Olea europaea. Se usó 1H-[1,2,4] oxadiazolo [4,3 alquinoxalin-1-one] (ODQ) y nifedipino para determinar el mecanismo de acción. Se comparó la inhibición de la vasoconstricción tras la incubación durante 30 minutos con extracto 100 mg/mL y con captopril 10 µM. Principales medidas de resultados: Porcentaje de vasodilatación y de vasoconstricción. Resultados: Se obtuvo una vasodilatación de 7,20 ± 1,49%, 9,84 ± 1,42% y 12,31 ± 1,16% para las dosis de 25, 50 y 100 mg/mL, respectivamente, siendo significativa con la dosis de 100 mg/mL. La vasodilatación se incrementó tras la administración de ODQ 100 mM. La vasodilatación se inhibió tras la incubación con ODQ 100 mM más nifedipino 5 µM. No se encontró diferencia significativa entre la inhibición de la vasoconstricción con captopril 10µM y extracto a 100 mg/mL. Conclusiones: El extracto hidroalcohólico de hojas de Olea europea, a una dosis de 100 mg/mL, tiene efecto vasodilatador sobre anillos aórticos de ratas, mediado por el bloqueo de canales de calcio; además, posee efecto inhibidor de la vasoconstricción.

Objectives: To determine the vasodilator and anti-vasoconstrictor effect of Olea europaea (olive) leaf hydroalcoholic extract on rat aortic rings and the mechanism involved. Design: Experimental. Location: Research and Scientific Development Center, Faculty of Medicine, Universidad Nacional de San Agustin, Arequipa, Peru. Biological material: Leaves of Olea europaea and aortic rings of Rattus norvegicus, swiss albina variety. Interventions: Hydroalcoholic extract was obtained from Olea europaea leaves. Rat aortic rings were placed in isolated organ chambers and the vasomotor activity was recorded with isometric tension transducer. Maximum basal contraction occurred at CaCl2, and 6 mM vasodilator effect was determined at 25, 50, and 100 mg/mL doses of the hydroalcoholic extract. 1H-[1,2,4] oxadiazole [4,3-alquinoxalin-1-one] (ODQ) and nifedipine were used to determine the mechanism of action. We compared the inhibition of vasoconstriction after incubation for 30 minutes with the extract 100 mg/mL and with captopril 10 µM. Main outcome measures: Percentage of vasodilation and vasoconstriction. Results: There was vasodilatation of 7.20 ± 1.49%, 9.84 ± 1.42%, and 12.31 ± 1.16% for respectively 25, 50, and 100 mg/mL doses of hydroalcoholic extract; it was significant at doses of 100 mg/ mL. Vasodilation increased after administration of ODQ 100 mM. Vasodilation was inhibited after incubation with ODQ 100 mM plus nifedipine 5 µM. No significant difference was found between vasoconstriction inhibition with captopril 10 µM or extract 100 mg/mL. Conclusions: Olea europaea leaves hydroalcoholic extract at 100 mg/mL dose had calcium channel blockade-vasodilator effect and vasoconstriction inhibitory effect on rat aortic rings.