Estudo comparativo da viabilidade de ovário criopreservado por congelamento lento e vitrificação em ratas / Comparative study of ovarian cryopreservation by slow freezing and vitrification in mice

INTRODUÇÃO: A criopreservação de células e tecidos germinativos objetiva proteger o potencial fértil em pacientes submetidas a tratamentos que induzam à infertilidade. Objetivo: Comparar congelamento lento e vitrificação de tecido ovariano e verificar o tipo folicular com maior viabilidade no tecido criopreservado. MATERIAL E MÉTODOS: 58 ratas tiveram seus ovários ressecados, dissecados e fragmentados e divididos em dois grupos: A (27 ratas): criopreservados por congelamento lento; e B (31 ratas) - vitrificados. As amostras foram submetidas à avaliação histológica geral pela coloração com H/E, e à avaliação imunohistoquímica com anti-Ki-67. RESULTADOS: Para análise estatística, os testes paramétricos Qui-quadrado de Student e o teste não-paramétrico de Wilcoxon, com nível de significância de 5% (p menor que 0,05). No momento 0 todas as amostras de ambos os grupos apresentaram histologia normal. Após a criopreservação, todas as amostras do Grupo A apresentaram alterações histológicas em diferentes níveis e, em 55,6% dos fragmentos houve sinais de necrose. Das amostras do Grupo B, 22,6% apresentaram alterações histológicas reversíveis e não houve necrose. A análise imunohistoquímica demonstrou que, na comparação entre os momentos, com relação à positividade para o Ki-67 em folículos primordiais, somente foi observada diferença significativa para o Grupo B. No momento 1, o Grupo B apresentou diferença significativa para a marcação em folículos primordiais (p igual a 0,026) e probabilidade limítrofe em folículos primários (p igual a 0,082). CONCLUSÃO: A vitrificação demonstrou menor grau de degeneração tissular e maior índice de viabilidade folicular. Folículos primordiais são os que apresentam maior viabilidade após a criopreservação

Marcador KI-67 como índice preditivo da viabilidade de ovário criopreservado por congelamento lento e vitrificação em ratas / Ki-67 marker used as a predictive index of the viability of cryopreserved ovaries through slow freezing and vitrification in rats

Avaliar duas técnicas de criopreservação de tecido ovariano: congelamento lento e vitrificação, por meio de marcação imunohistoquímica com anticorpo primário anti ki 67 e verificar o tipo folicular mais resistente à criopreservação. 58 ratas foram submetidas à ooforectomia bilateral e divididas em dois grupos: A: 27 ratas cujos fragmentos ovarianos foram criopreservados com a técnica de congelamento lento e B: 31 ratas cujas secções ovarianas foram criopreservadas por vitrificação. Amostras do tecido foram submetidas à avaliação imunohistoquímica com e observaram-se células foliculares positivas para o marcador. Analisaram-se os fragmentos no momento 0 (dia da ooforectomia) como controle e no 43 dia após esse procedimento, momento 1. Na comparação significativa para marcação em folículos primário e secundário, para ambos os grupos. Na comparação entre os grupos não foi observada diferença significativa no momentoO. No momento 1, o Grupo B apresentou diferença significativa para a marcação em folículos primordiais (p=0,026), ou seja, houve um número maior de amostras Ki67 positivas nesse grupo. A marcação com Ki67 demonstrou que, embora ambos os métodos de congelamento ovariano resultem em tecidos potencialmente viáveis, a vitrificação manteve maior número de folículos primordiais potencialmente funcionantes, podendo ser considerada melhor técnica de criopreservação de tecido ovariano do que o congelamento lento, em ratas. Os folículos primordiais são os que melhor resistem ao processo de criopreservação, tanto por congelamento lento como por vitrificação.