Genotype 1 of human parvovirus B19 in clinical cases / Genótipo 1 do parvovírus humano em casos clínicos

Summary Introduction: Virus surveillance strategies and genetic characterization of human parvovirus B19 (B19V) are important tools for regional and global control of viral outbreak. In São Paulo, Brazil, we performed a study of B19V by monitoring the spread of this virus, which is an infectious agent and could be mistakenly reported as a rash and other types of infection. Method: Serum samples were subjected to enzyme immunoassay, real time polymerase chain reaction, and sequencing. Results: From the 462 patients with suspected cases of exanthematic infections, the results of the 164 serum samples were positive for B19V immunoglobulin M. Among these cases, there were 38 patients with erythema infections and B19-associated with other infections such as encephalitis, hydrops fetalis, chronic anemia, hematological malignancies. These samples were sequenced and identified as genotype 1. Conclusion: This study showed patients with infections caused by B19V and sequencing genotype 1. Continuous monitoring is necessary to detect all known genotypes, and the emergence of new genotypes of these viruses for case management in public health control activities.

Resumo Introdução: Estratégias de vigilância para o parvovírus humano B19 e caracterização genética são ferramentas importantes para o controle regional e global do surto viral. Em São Paulo, Brasil, foi realizado um estudo de parvovírus B19, monitorando a disseminação desse vírus, que é um agente infeccioso e poderia ser erroneamente relatado como uma erupção cutânea e outros tipos de infecções. Método: As amostras de soro foram submetidas ao ensaio imunoenzimático, PCR quantitativo em tempo real e sequenciamento. Resultados: Dos 462 pacientes com casos suspeitos de infecções exantemáticas, os resultados das 164 amostras de soro foram positivos para parvovírus B19 imunoglobulina M. Entre eles, 38 pacientes com eritema infeccioso apresentaram B19 associado com outras infecções, como encefalite, hidropisia fetal, anemia crônica, doenças hematológicas malignas. Essas amostras foram sequenciadas e identificadas como genótipo 1. Conclusão: Os pacientes foram infectados com parvovírus B19 e apresentaram genótipo 1. Monitoração contínua é necessária para detectar todos os genótipos conhecidos e o surgimento de novos genótipos para o controle de casos em saúde pública.

Prenatal diagnosis of congenital rubella infection in São Paulo / Diagnóstico pré-natal de infecção congênita por rubéola, em São Paulo, Brasil

Objective: rubella during the early stages of pregnancy can lead to severe birth defects known as congenital rubella syndrome (CRS). Samples collected from pregnant women with symptoms and suspected of congenital rubella infection between 1996 and 2008 were analyzed. Methods: a total of 23 amniotic fluid samples, 16 fetal blood samples, 1 product of conception and 1 placenta were analyzed by serology and RT-PCR. Results: all patients presented positive serology for IgG / IgM antibodies to rubella virus. Among neonates, 16 were IgG-positive, 9 were IgM-positive and 4 were negative for both antibodies. Of the 25 samples analyzed in this study, 24 were positive by RT-PCR. Changes in ultrasound were found in 15 (60%) of 25 fetuses infected with rubella virus. Fetal death and miscarriage were reported in 10 (40%) of the 25 cases analyzed. The rubella virus was amplified by PCR in all fetuses with abnormal ultrasound compatible with rubella. Fetal death and abortion were reported in 10 of 25 cases analyzed. Conclusion: this study, based on primary maternal rubella infection definitely confirms the good sensitivity and specificity of RT-PCR using amniotic fluid and ultrasound. The results showed that molecular assays are important tools in the early diagnosis of rubella and congenital rubella syndrome. .

Objetivo: a rubéola, durante os primeiros estágios da gravidez, pode levar a graves defeitos congênitos, conhecidos como síndrome da rubéola congênita (SRC). Amostras de gestantes com sintomas e suspeitas da rubéola congênita foram coletadas entre 1996 e 2008. Métodos: um total de 23 amostras de fluido amniótico, 16 amostras de sangue fetal, um produto da concepção e uma placenta foram analisados por sorologia e PCR. Resultados: todas as gestantes apresentaram sorologia positiva para IgG/IgM para o vírus da rubéola. Entre os recém-nascidos, 14 apresentaram anticorpos IgG positivos e 11 foram os anticorpos IgM positivos. Das 25 amostras analisadas neste estudo, 24 eram positivas por RT-PCR. Alterações na ultrassonografia foram encontradas em 15 (60%) dos 25 fetos infectados com o vírus da rubéola. Morte fetal e aborto espontâneo foram reportados em 10 (40%) dos 25 casos analisados. O vírus da rubéola foi amplificado por PCR em todos os fetos que apresentaram alterações na ultrassonografia, compatíveis com a rubéola. Morte fetal e aborto foram relatados em 10 dos 25 casos analisados. Conclusão: os resultados mostraram que os ensaios moleculares são ferramentas importantes para o diagnóstico precoce da rubéola e da síndrome da rubéola congênita. .

Sequence analysis of the 2009 pandemic influenza A H1N1 virus haemagglutinin gene from 2009-2010 Brazilian clinical samples

In this paper, we analysed the haemagglutinin (HA) gene identified by polymerase chain reaction from 90 influenza A H1N1 virus strains that circulated in Brazil from April 2009-June 2010. A World Health Organization sequencing protocol allowed us to identify amino acid mutations in the HA protein at positions S220T (71 percent), D239G/N/S (20 percent), Y247H (4.5 percent), E252K (3.3 percent), M274V (2.2 percent), Q310H (26.7 percent) and E391K (12 percent). A fatal outcome was associated with the D239G mutation (p < 0.0001). Brazilian HA genetic diversity, in comparison to a reference strain from California, highlights the role of influenza virus surveillance for study of viral evolution, in addition to monitoring the spread of the virus worldwide.

Growth of rubella virus into SIRC (rabbit cornea cell line) using various culture media

The present study evaluated the efficacy of various culture media for performing the isolation and growth of the rubella virus inoculated into SIRC cells. Rubella virus RA-27/3 strain and RVi/São Paulo/BRA99 wild type strain (Gen Bank number DQ458965) were inoculated into SIRC cell line and cultivated in 199, DMEM, MEM and RPMI media. The inoculated cells when examined on phase contrast microscopy showed the characteristic rounded and multipolar cells. The CPE was observed at the first 48 hours cultivation in the respective tested media. The curve of the infectivity increase was higher in the cultures maintained in DMEM and RPMI media. Hence, the SIRC cellular lineage cultivated in DMEM or RPMI media is an excellent substratum for performing the rubella virus isolation. These findings are relevant since the SIRC has been one of the few cell lines described in the literature which presents a cytopathic effect, and on that account it can be useful for carrying out the virus isolation from clinical specimens.

Detection of human parvovirus B19 in cases of hydrops fetalis in São Paulo, Brazil / Detecção de parvovírus humano B19 em casos de hydropsia fetal em São Paulo, Brasil

Human parvovirus B19 infection is known to be one of the causes of hydrops fetalis. The maternal infection caused by the virus may be symptomatic or asymptomatic. In this study, 40 pregnant women with gestational age of approximately 25 weeks, prenatal diagnosis of non immune hydrops fetalis and suspected of human parvovirus B19 infection were studied between January 1999 and December 2005. Serology results and detection of DNA in the maternal serum, foetal serum and amniotic fluid confirmed that 20 pregnant women had been infected by human parvovirus B19. The ultrasound examination demonstrated foetal hydrops, anaemia, hepatosplenomegaly, ascites, cardiopathy and amniotic fluid disorders. Among the positive cases, there were three fatal losses, one by miscarriage and two by intrauterine foetal death.

A infecção por parvovírus humano B19 é um dos responsáveis pela hidropsia fetal. A infecção materna causada pelo vírus pode ser sintomática ou assintomática. Neste estudo 40 mulheres com idade gestacional de aproximadamente 25 semanas, diagnóstico pré-natal de hidropsia fetal e suspeita de infecção por parvovírus humano B19 foram avaliadas durante o período de janeiro de 1999 a dezembro de 2005. Os resultados de sorologia e detecção de DNA no soro materno, fetal e fluido amniótico confirmaram 20 mulheres grávidas com infecção por parvovírus humano B19. A análise de ultra-som demonstrou hidropsia fetal, anemia, hepatosplenomegalia, ascite, cardiopatia e desordens amnióticas. Entre os casos positivos, ocorreram três perdas fetais: uma por aborto e duas por morte fetal intra-uterina.

Surveillance epidemiological: parvovirus B19 genotype 1

O parvovirus humano B19 foi isolado e caracterizado de amostra clínica de um paciente, infectado no Japão, e que apresentou os sintomas de febre e erupção cutânea após sua chegada ao Brasil. A infecção por parvovírus foi confirmada por meio de seguintes ensaios: Elisa para detecção de anticorpos IgM antiparvovirus B19 e técnica de polymerase chain reaction (PCR). Um fragmento da região NS1-VP1 foi diretamente submetido ao seqüenciamento do nucleotídeo. A análise filogenética parcial do B19, frente às várias seqüências disponíveis no GenBank, indicou que PV B19 isolado correspondeu ao genótipo 1.

Human parvovirus B19 was identified and characterized in sample collected from a patient who was infected in Japan, and the symptoms as fever and rash appeared after arriving to Brazil. The occurrence of virus infection was confirmed by both assays: Elisa parvovirus B19-specific IgM antibody detection andpolymerase chain reaction (PCR). A fragment of NS1-VP1 region was directly submitted to nucleotide sequencing. Partial phylogenetic analysis of B19 sequences, including several sequences available in GenBank, indicated that the isolated HPV B19 corresponded to genotype 1.

Molecular surveillance of an imported measles virus infection in São Paulo, Brazil

No estado de São Paulo, Brasil, em função da eficiente estratégia para a vigilância do vírus do sarampo(VS), não houve registro de casos nativos de sarampo no período de 2001 a 2007. No estado de São Paulo foram registrados casos de sarampo importados, sendo 01 paciente em 2001, outro em 2002 e em 2005 foi alvo de investigação uma criança não vacinada, de 18 meses de idade com exantema e febre, que foi admitida em hospital privado. O Centro de Vigilância Epidemiológica descobriu que o irmão desta criança teve uma doença semelhante uma semana antes. A infecção pelo vírus do sarampo foi confirmada no Instituto Adolfo Lutz pela detecção de anticorpo IgM anti-VS, isolamento do vírus por meio de cultivo em células Vero/hSLAM e amplificação de RNA viral por RT-PCR. A região do gene da nucleoproteína do vírus isolado foi amplificada. O resultado da análise filogênica mostrou que o vírus isolado correspondeu ao genótipo D5. Este genótipo circula no continente da Ásia e há relatos sobre sua anterior circulação em São Paulo.

Owing to the efficient strategies for measles virus (MV) surveillance in São Paulo State, Brazil, no circulation of native measles virus was registered during the period from 2001 to 2007. In Sao Paulo State the imported measles cases were registered, being one in 2001, one in 2002, and in 2005 an unvaccinated 18-month-oldchild presenting fever and exanthema admitted to a private hospital was the target of epidemiological study. The Center of Epidemiological Surveillance found out that a brother of this child had had a similar disease one week before. The measles virus infection was confirmed at Adolfo Lutz Institute by detecting the MV-specific IgM antibody, by virus isolation on Vero/hSLAM cells culture, and by means of MV-RNA amplification on RT-PCR technique. A region of nucleoprotein gene from isolated virus was amplified. The phylogenetic analysis data showed that the isolated virus corresponded to genotype D5. This genotype circulates in the...

Influência de diferentes sombreamentos e nutrição foliar no desenvolvimento de mudas de Palmeiras Ráfia Rhapis excelsa (Thunberg) Henry ex. Rehder / Influence of differents shading and fertilizer foliar in development of seedlings of lady palm Rhapis excelsa (Thunberg) Henry ex. Rehder

A palmeira ráfia (Rhapis excelsa), possui elevado valor comercial, sendo utilizada na composição de vasos e jardins, principalmente em interiores. No entanto, poucas são as informações sobre sua exigência em adubação ou mesmo sobre as condições ótimas de sombreamento. Para sombreamento, além do tradicional sombrite, estão disponíveis atualmente no mercado as malhas fotoconversoras, que estimulam o desenvolvimento das espécies vegetais. Objetivou-se nesse trabalho avaliar a influência de diferentes porcentagens e tipos de sombreamentos e a nutrição foliar no desenvolvimento de mudas desta palmeira. Utilizaram-se plantas com aproximadamente 4 anos, em vaso contendo terra, areia e esterco (1:1:1), acrescido de 10 g de superfosfato simples por litro de substrato. Determinou-se o incremento em altura e o número de folhas aos 105 e 195 dias. Foi determinado também o número e altura dos brotos, largura do folíolo e altura final das plantas aos 195 dias. Em relação à adubação foliar, não foi observado efeito dessa sobre o desenvolvimento das mudas. As malhas para sombreamento também não exerceram efeitos significativos na altura final de plantas, indicando que o desenvolvimento das mudas de palmeira ráfia pode ser realizado sob qualquer tipo de sombreamento.

Lady palm (Rhapis excelsa) has high commercial value, specially in ornaments of vases and gardens located on shade. However, the information about its requirements in fertilizer and great terms of shading are little. To shade, the common used material is shade net black. The color shade net stimulate the vegetal growth and it is recently used in the commercial system. The aim of this work was to evaluate the influence of different percents and types of shades and foliar fertilizer in development of seedlings this palm. The plants used in this experiment were cultivated in recipients with soil, organic matter and sand (1:1:1), with the addition of 10 g of fertilizer by liter of substrate. These plants were four years old approximately. The measurements of increasing of height and number of leaves were taken at 105 and 195 days since the beginning of the experiment. It was also observed the number and height of seedlings, width from leaflets, as well as the final plant height at 195 days. The foliar fertilizer was not affected in growth of seedlings. The different types of screening either affect significantly the final height of the plants, indicating than the growth of palm Rhapis can be under any kind of shade.

Effect of cell culture system on the production of human viral antigens

Foi realizado estudo comparativo na produção de diferentes antígenos virais usando sistema de microcarregador e sistema tradicional. Células Vero, BHK e MA-104 foram cultivadas em microcarregadores (2mg/ml) utilizando-se biorreatores com capacidade de 3,7 litros e, em paralelo, no sistema convencional com garrafas Roux. Após quatro dias de cultura para as células BHK e sete dias para as células Vero e MA-104, as células foram infectadas com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de vírus da raiva, vírus do sarampo, poliovírus e rotavírus. Foi determinado o rendimento das células e dos vírus em microcarregadores e sistema convencional. Foi observado no sistema de microcarregador um aumento médio obtido de vinte vezes mais células/ml em relação à cultura convencional em monocamadas, usando garrafas Roux. Por outro lado, as células que cresceram em garrafas Roux apresentaram 1,6 a 6,7 mais vírus/ml em culturas do que no sistema de microcarregador. Contudo o total das amostras em termos de vírus por grupo foi estatisticamente similar para ambos os sistemas (p > 0,05). O rendimento na produção de antígeno viral pode depender não somente da concentração das células, mas também de outros fatores da cultura, como características do suporte no crescimento. Assim, o estudo deste parâmetro pode proporcionar uma linha de base para um futuro melhoramento e estratégias para se estabelecer um aumento em escala na produção de vírus, já que, dependendo do tipo de vírus, a ótima condição encontrada para uma produção de vírus em pequena escala pode não ser adequada para a produção em grande escala, requerendo novas padronização e avaliação.

Measles serodiagnosis: production and evaluation of the IgM-measles ELISA(IAL) reagent

Recent measles outbreaks in different countries led to an increase of laboratory measles diagnosis. Thus, we developed the IgM-Measles ELISAIAL, using measles virus antigens obtained from cell cultured in microcarriers in order to supply reagent kits to Brazilian public health laboratories. A batch of antigenic reagent was produced and evaluated in the enzyme immunoassay in comparison with clinical diagnosis and with as reference assay (IgM Capture ELISA(CDC)) data. This study was performed in a positive panel with 70 serum samples from patients with measles, and a negative panel with 132 samples from patients with unrelated diseases and without recent measles or vaccination history. In relation to other diagnostic methods, the IgM ELISAIAL presented sensitivity higher than 97.1 per cente, specificity and precision of 97 per cente, and agreement kappa (k) index higher than 0.94 (P < 0.05). Moreover, the IgM antibody profile from measles acute phase revealed by the assay was similar to the reference assay. A practical analysis system for checking the quality of new reagent batches was proposed based on the diagnostic features and agreement kappa index. Our findings suggest that measles antigenic reagents can be produced with reliable quality control system, and supplied to public health laboratories for routine serodiagnosis or population surveys.

Clinical and laboratory evaluation of measleslike rash in children and young adults

A clinical and laboratory evaluation of 11 childrens and young adults with measleslike rash was done during the measles outbreak in the Greater São Paulo Metropolitan area at the end of 1996 and spread over the country during 1997. Measles was laboratory confirmed in 07 patients by specific IgM detection in acute serum specimens using an IgM-capture EIA, by specific IgG seroconversion in serum pairs, and by reverse transcription PCR and virus isolation in peripheral blood lymphocytes. Clinical presentations were not always classic; one of the 07 cases had received measles vaccine and corresponded to modified clinical case of measles. The 4 remaining cases were negative for measles and were diagnosed as exanthem subitum (2 cases), scarlet fever and Kawasaki disease. The present study reinforces the view that clinical features alone are not sufficient for establishing an accurate diagnosis in the post-vaccine era, and a surveillance system based on sensitive laboratory results is needed so that it can confirm IgM-negative measles cases.

Produçäo de um antígeno de sarampo por multiplicidade de infecçäo, com rendimento e reprodutibilidade / The role of m.o.i. in standardization of measles antigen preparation

Sarampo é uma doença potencialmente grave e comum, cuja vacinaçäo previne ou atenua as manifestaçöes clínicas. Métodos sorológicos utilizados na detecçäo de anticorpos para o vírus do sarampo têm sido empregados, como o teste de inibiçäo da hemaglutinaçäo e ELISA. Para produçäo de antígeno do sarampo com maior rendimento, e melhor reprodutibilidade, realizamos estudos com diferentes multiplicidades de infecçäo (M.I). Nossos resultados levam-nos a sugerir que a produçäo de antígenos de sarampo é mais eficiente com a utilizaçäo de multiplicidade de infecçäo (M.I) de 0,01 com boa reprodutibilidade, tanto na preparaçäo de ensaios de HA como de ELISA, devendo servir de parâmetro na preparaçäo de antígenos em larga escala para uso em ensaios diagnósticos

Frequência de anticorpos específicos para herpes simples e citomegalovírus em soro e líquido cefalorraquidiano de pacientes com síndrome de imunodeficiência adquirida - AIDS / Herpes simplex virus and cytomegalovirus antibodies frequency in serum and cerebrospinal fluid from patients with Acquired Immunodeficiency Syndrome - AIDS

De janeiro a dezembro de 1988, foram submetidas a exame 865 amostras de soro e 475 amostras de líquido céfalo-raquidiano -LCR de pacientes com Síndrome de Imunodeficiência Adquirida-AIDS, para pesquisa de anticorpos específicos para herpes simples e citomegalovírus, respectivamente pelas técnicas de imunofluorescência indireta e fixaçäo do complemento. Dos pacientes estudados, 87,4% eram do sexo masculino e 65,7% pertenciam a faixa etária de 20 a 39 anos; 61,5% das amostras de soro e 7,5% das amostras de LCR apresentaram anticorpos para herpesvírus. Para citomegalovírus, registrou-se a presença de anticorpos específicos em 42,6% das amostras de soro e em 2,7% das amostras de LCR. As frequências de anticorpos específicos para ambos os vírus nas amostras de soro estudadas foram significativamente menores (p<0,05) que os valores indicados pela literatura especializada como padroes da populaçäo normal. A presença de anticorpos específicos para herpesvírus e citomegalovírus no LCR sugere uma possível infecçäo por esses vírus no Sistema Nervoso Central dos pacientes com AIDS.

Correlaçäo entre giardíase e grupo sanguíneo (sistema ABO) no município de Säo Caetano do Sul, SP / Correlation between giardiasis and blood group (ABO system) in the municipality of Säo Caetano do Sul, Säo Paulo State, Brazil

Foram analisadas amostras de fezes e sangue de 580 escolares do Município de Säo Caetano do Sul, Säo Paulo, com vistas ao estudo da frequência de giardíase naquele grupo populacional e sua correlaçäo com o Sistema ABO. Foi testada, através de metodologia estatística, a hipótese aventada pela literatura especializada, segundo a qual a giardíase apresentaria incidência mais elevada entre os indivíduos do grupo sanguíneo A. Foram utilizados como grupos controle o conjunto de escolares incluídos na investigaçäo e a populaçäo das cidades de Säo Paulo e Santo André. Ao exame parasitológico de fezes, verificou-se que 102(17,59%) escolares estavam parasitados por Giardia lamblia; 166 (28,62%) apresentavam outras enteroparasitoses, e 312 (53,79%) näo manifestaram quaisquer infecçoes parasitárias. A distribuiçäo por grupo sanguíneo dos escolares com giardíase näo variou significativamente (p<0,05) em relaçäo à mesma distribuiçäo dos grupos populacionais selecionados para controle. Tais resultados diferem daqueles divulgados por outras comunicaçoes científicas, e indicam a necessidade de novos e mais extensos levantamentos populacionais, bem como estudos imunológicos, que confirmem ou descartem definitivamente a hipótese em questäo