RESUMEN
Objetivos: estandarizar una prueba molecular basada en PCR semianidada para el diagnóstico de candidemia Metodología: se desarrolló un estudio piloto en que se optimizó el protocolo de extracción y utilización de ADN ribosomal, amplificando la región ITS-2 completa de Candida spp. Y mediante PCR semianidada, reamplificando segmentos específicos de nueve especies clínicamente relevantes de Candida. Se utilizaron muestras clínicas de plasma de pacientes críticamente enfermos con candidemia documentada microbiológicamente del Hospital de la Samaritana en Bogotá. Se utilizó una muestra de candidemia simulada utilizando una cepa de Candida obtenida de orina. Resultados: se logró protocolizar dicha técnica y tener a partir de muestras clínicas de plasma una sensibilidad probable de 90% y especificidad teórica cercana a 100%. La capacidad de detección de este ensayo es hasta de una célula por 200 μl de plasma. Conclusiones: se estandarizó una prueba molecular para detección de candidemia en pacientes críticamente enfermos (Acta Med Colomb 2011; 36: 135-140).
Objectives: to standardize a molecular test based on semi-nested PCR for diagnosis of candidemia. Methods: we developed a pilot study by means of optimizing the extraction protocol and use of ribosomal DNA, amplifying the complete ITS-2 region of Candida spp. And by semi-nested PCR reamplifying specific segments of nine clinically relevant Candida species. Clinical samples of plasma of critically ill patients with microbiologically proven candidemia from a third level hospital in Bogotá. Another sample of simulated candidemia was used with Candida strain form a urine sample. Results: we were able to standardize this technique and achieved from clinical samples of plasma a likely sensitivity of 90% and a theoretical specificity of 100%. The detection capability of this test is up to 1 cell per 200 μl of plasma. Conclusion: a molecular test for detection of candidemia among critically ill patients was standardized (Acta Med Colomb 2011; 36: 135-140).