Purificación de la fracción antigénica 27-28 KDa a partir del antígeno metabólico secretado-excretado de Fasciola hepatica / Purification of antigenic fraction 27-28 KDa from the metabolic antigen from metabolic secreted-excreted from Fasciola hepatica

En el presente estudio, las fracciones antigénicas de 27-28 KDa de Fasciola hepatica fueron purificadas por cromatografía de exclusión molecular para su aplicación en el diagnóstico de la fascioliasis humana. Se obtuvieron antígenos de excreción y secreción a partir de fasciolas adultas vivas obtenida de hígado de ovino y bovino, y cultivados en medio mínimo esencial. La reactividad y eficacia del antígeno purificado fueron evaluadas por la prueba de inmunoblot empleando cuatro sueros con fascioliasis humana; cuatro sueros con otras parasitosis, y dos sueros negativos. Se concluye que las fracciones antigénicas purificadas no presentan reacción cruzada con otras parasitosis, por inmunoblot, por lo que se considera a las proteínas purificadas como potenciales candidatas a ser utilizadas para el diagnóstico de fascioliasis humana.

Antigenic fractions of 27-28 kDa from Fasciola hepatica were purified by size-exclusion chromatography for use in the diagnosis of human fasciolosis. Excretion and secretion antigens were obtained from living adult flukes collected from sheep and cattle liver, and cultured in minimum essential medium. The reactivity of the purified antigen and efficacy were assessed by immunoblot test using four sera with human fascioliasis; four sera with other parasites, and two negative sera. We conclude that the purified antigenic fractions do not cross-react with other parasites by immunoblot. Therefore, purified proteins are considered as potential candidates to be used for the diagnosis of human fascioliasis.

Evaluación de una prueba de ELISA con antígeno metabólico de Fasciola hepatica para el diagnóstico de fasciolosis humana en Cajamarca, Perú / Evaluation of an ELISA test with Fasciola hepatica metabolic antigen for diagnosis of human fascioliasis in Cajamarca, Peru

Se obtuvo el antígeno metabólico (antígeno excreción - secreción) de Fasciola hepatica de ovinos infectados de Cajamarca, con una concentración proteica de 1 005 μg/μL, compuesta principalmente por proteνnas de peso molecular entre 1,2 y 170 KDa. Se detectaron bandas de 170; 150; 31; 24; 18-14 y 10 kDa. Con este antνgeno se desarrollσ una prueba de ELISA y se determinσ su punto de corte en 0,140. Se evaluσ 33 sueros de pacientes con fasciolosis confirmada por visualización de huevos en heces, 177 sueros de pacientes sin fasciolosis provenientes de áreas endémicas de Cajamarca y 88 sueros de pacientes con otras infecciones parasitarias y bacterianas. Se encontró una sensibilidad de 97,0 por ciento, especificidad de 96,6 por ciento, valor predictivo positivo de 78,1 por ciento y valor predictivo negativo de 99,6 por ciento. Se encontró reacción cruzada en 9/88 sueros evaluados. Se recomienda la implementación y uso de esta prueba para el diagnóstico de fasciolosis.

Metabolic (excretion/secretion) antigen was obtained from sheep infected with Fasciola hepatica, with a 1005 μg/μL of protein concentration, composed principally by proteins of molecular weight between 1.2 and 170 KDa. Bands of 170, 150, 31, 24, 18-14 and 10 kDa were detected. With this antigen an ELISA test was developed and the cut off was determined in 0.140. We evaluated 33 serums of patient with fascioliasis confirmed by visualization of eggs in feces, 177 serums of persons without fascioliasis from endemic rural areas of Cajamarca and 88 serums of patients with others parasitic and bacterial infections. We found a 97.0 percent of sensitivity, 96.6 specificity, 78.1 percent predictive positive value, 99.6 percent predictive negative value. In 9/88 serums was found cross reactions. We recommended the implementation and use of this test for the fascioliasis diagnosis.