Análisis de orina: estandarización y control de calidad / Urine analysis: standardization and quality control / Análise de urina: padronização e controle de qualidade

El examen de orina completa data de los tiempos de Hipócrates. En la actualidad se basa en la utilización de tiras reactivas y la visualización al microscopio, careciendo de una estandarización actualizada y control de calidad. En el presente trabajo se realizó un estudio comparativo entre observadores, estandarizando el proceso y elaborando una solución control junto con una colección fotográfica del sedimento para enseñanza, entrenamiento y control interno. Se evaluaron 200 muestras de orinas de pacientes al azar. Los parámetros fisicoquímicos se determinaron en un equipo Urisys 2400 (Roche). El análisis microscópico fue realizado por dos operadores experimentados. Se preparó una solución control positiva de los parámetros usuales de tiras reactivas. Los resultados fueron analizados mediante el test Kappa, p<0,05. La correlación entre observadores, utilizando el procedimiento propuesto, fue siempre mayor que con el proceso de rutina. La solución control fue estable durante los 4 meses que duró la experiencia, dando positivas las determinaciones de glucosa, proteínas, hemoglobina, cetonuria y leucocitos, manteniéndose el valor de pH y de densidad. Se concluye que con la estandarización se logró aumentar el grado de correlación entre observadores, por lo tanto se propone el uso de esta metodología para uniformar criterios; además, la preparación de la sustancia control y de una colección fotográfica permitió controlar el procedimiento de una forma más económica sin dejar de lado la confiabilidad.

Urine analysis is one of the most ancient tests. It dates back from Hyppocrates times. Nowadays it is based on the use of reactive dipsticks and visual examinations in the microscope, with no quality control or adjusted standardization. In the present work, a standardized procedure, a positive control solution for dipsticks and a photographic collection of urine sediment were performed for teaching, training and control of the laboratory staff. Urisys 2400 (ROCHE) was used to analyze 200 samples randomly. The microscopic analysis was made by two experienced operators. A positive control solution of usual parameters of reactive dipsticks was performed. Data analysis was fulfilled by Kappa test p<0.05. The correlation between observers, using the proposed procedure, was always higher than in the routine process. The control solution was stable over the 4-month experience, yielding positive results in glucose, protein, hemoglobin, ketonuria and leukocyte, keeping pH and density values. It can be concluded that with standardization, the degree of correlation between observers was increased, for which reason this methodology is proposed to unify criteria; besides, elaboration of the control substance and a photographic collection makes it possible to control the procedure in a more economic fashion without leaving aside reliability.

O exame de urina completa data dos tempos de Hipócrates. Atualmente é baseado no uso de tiras-teste e a visualização no microscópio, carecendo de uma padronização atualizada e controle de qualidade. No presente trabalho foi realizado um estudo comparativo entre observadores padronizando o processo e elaborando uma solução de controle juntamente com uma coleção de fotografias do sedimento para ensino, treinamento e controle interno. 200 amostras de urinas de pacientes selecionados aleatoriamente foram avaliadas. Os parâmetros físico-químicos foram determinados em um equipamento Urisys 2400 (Roche). A análise microscópica foi realizada por dois operadores experientes. Foi realizada uma solução controle positiva dos parâmetros usuais de tiras-teste. Os resultados foram analisados através do teste Kappa, p<0,05. A correlação entre observadores, utilizando o procedimento proposto, foi sempre maior que com o processo de rotina. A solução controle manteve-se estável durante os 4 meses em que foi levada a cabo a experiência, dando positivas as determinações de glicose, proteínas, hemoglobina, cetonúria e leucócitos, mantendo o valor de pH e de densidade. Conclui-se que com a padronização foi possível aumentar o grau de correlação entre observadores, portanto se propõe o uso desta metodologia para uniformizar critérios; além disso, a elaboração da substância controle e de uma coleção fotográfica permite controlar o procedimento de uma maneira mais econômica, sem deixar de lado a confiabilidade.

Diagnóstico de polineuropatía amiloidótica familiar tipo I en la Argentina / Diagnosis of familial amyloid polyneuropathy type I in Argentina

La polineuropatía amiloidótica familiar (PAF) es un tipo de amiloidosis hereditaria. Constituye un desorden autosómico dominante caracterizado por el depósito sistémico de material amiloide en tejidos especialmente en nervios periféricos. El principal componente del amiloide es una variante mutada de la transtiretina (TTR), proteína transportadora de tiroxina y retinol. Han sido descriptas numerosas mutaciones en el gen TTR que causan alteración de la secuencia primaria de la proteína. La PAF portuguesa o PAF Tipo I se origina por la variante TTR Val30Met en la cual una valina en posición 30 es reemplazada por una metionina. Es fundamental la identificación temprana de portadores de la mutación porque una vez declarada la enfermedad el único tratamiento efectivo es el trasplante hepático, órgano de síntesis de la TTR. La PAF Tipo I ha sido muy estudiada en la Argentina debido al hallazgo de un área endémica donde habitan familias descendientes de inmigrantes portugueses. El presente trabajo ha sido enfocado a resolver la necesidad diagnóstica de la comunidad, ya que la ausencia de una metodología apropiada en nuestro país ha impedido, hasta ahora, que individuos con antecedentes familiares de PAF puedan tener un diagnóstico precoz y acceder al trasplante hepático temprano. En consecuencia, nuestro objetivo fue optimizar una metodología para detectar la mutación Val30Met adaptando técnicas previamente descriptas. La fiabilidad, sencillez y rapidez en la obtención de los resultados, así como el requerimiento de pequeño volumen de muestra, hacen que la técnica desarrollada en este trabajo sea una herramienta apropiada para procedimientos de screening, permitiendo contar con un marcador preclínico de la enfermedad.

Familial amyloid polyneuro- pathy (FAP) is an autosomal dominant inherited disease, characterized by systemic deposition of amyloid fibrils in various tissues, especially in peripheral nerves, being a variant of transthyretin (TTR) the principal component of amyloid fibrils. TTR is a normal plasma protein (previously called prealbumin) that functions as a transport protein binding tiroxine and retinol. Among many mutations that have been found in the TTR gene, the variant with a single amino acid substitution of methionine for valine at position 30 (TTR Val30Met) is the responsible of the Portuguese-type Familial Amyloidotic Polyneuropathy (FAP Type I). Interest in this pathology has arisen in Argentina because of the finding of an endemic area where a group of Portuguese immigrant families is localized. Since liver transplantation is a widely accepted treatment because it results in the disappearance of variant transthyretin from plasma, an early detection of the altered gene is essential. Thus, the objective of the present work was to optimize a methodology to detect the Val30Met mutation introducing modifications into techniques that were previously developed. The simple method here described is useful to confirm the diagnosis of the potential disease and, therefore, make it possible for patients to gain access to early liver transplantation.

El óxido nítrico y las enzimas en trasplante hepático: perfiles evolutivos / Nitric oxide and enzymes in liver transplantation: evolutive profiles

El óxido nítrico, radical libre y potente vasodilatador, inhibe la adhesión y agregación plaquetarias, reduce la adhesión de los leucocitos al endotelio e inhibe la proliferación de las células del músculo liso vascular. Una forma inducible de la óxido nítrico sintetasa puede generar grandes cantidades de óxido nítrico, y puede ser activada por la acción de citoquinas y lipopolisacáridos. El óxido nítrico puede liberarse desde el endotelio vascular hepático, plaquetas y células de Kupffer como respuesta al shock circulatorio y al daño inducido por isquemia-reperfusión. Se determinaron los niveles séricos de óxido nítrico y de algunas enzimas en muestras de suero obtenidas antes del trasplante hepático ortotópico, y luego de él, cada 48 horas hasta 15 días post-trasplante, en 20 pacientes, con la finalidad de evaluar la evolución y la posible correlación entre éstos parámetros. Siguiendo un perfil característico, los niveles de aspartato aminotransferasa y de alanina aminotransferasa variaron desde elevados en el comienzo hasta casi la normalidad al finalizar el estudio mientras que los de óxido nítrico se mantuvieron elevados, en la mayoría de los casos, quizás por la ocurrencia de episodios isquémicos que contribuyeron a la expresión de la óxido nítrico sintetasa inducible, así como a su activación por citoquinas

Diferenciación de proteinurias mediante electroforesis en gel de poliacrilamida / Differentation of proteinurias interceding polyacrylamide gel electrophoresis

El análisis de la distribución de las proteínas urinarias de acuerdo con sus masas moleculares relativas, constituye una información valiosa para el diagnóstico de enfermedades renales y extrarrenales. Se detalla el fraccionamiento de las proteínas presentes en muestras de orina de 24 h, sin concentrar. Se utiliza la técnica de electroforesis vertical en geles de policrilamida 10% con dodecil-sulfato de sodio (SDS-PAGE). El desarrollo electroforético se realiza entre 25 y 50 mA (V max = 200 V), durante 4-5 h,revelando con azul brillante de Coomassie R-250. Los perfiles proteicos obtenidos permiten diferenciar proteinurias tubulares, glomerulares y mixtas con distintos grados de selectividad y proteinurias extrarrenales. La buena resolución y sensibilidad de la técnica permite analizar muestras sin concentrar (concepción proteica > 0,3 g/l) y resulta adecuada para una correcta caracterización de proteinurias.

Efectos adversos de la inhalación subanestésica / Adverse effects of the subanesthetic inhalatión

La exposición a contaminantes químicos ambientales como los anestésicos, pueden constituir un riesgo para salud de población expuesta a ellos, que es importante evaluar y prevenir. Entre los riesgos potenciales de las substancias químicas se encuentran la producción de daño genético, capaz de traducirse en diversas manifestaciones clínicas como: cáncer, envejecimiento prematuro, esterilidad, anomalias congénitas y muerte embrionaria, fetal o perinatal. Además del peligro de mutaciones que pueden ser transmitidas a las generaciones futuras a través de portadores clínicamente sanos

Estandarización de un método analítico: aplicación a la determinación de glicosaminoaglicanos urinarios / Standardization of a analytical method: aplication to the determination of urinary glycosaminoglycans

Se presenta la estandarización de un método para la determinación cuantitativa de glicosaminoglicanos (GAGs) urinarios, empleando una combinación de los métodos descriptos por Di Ferrante y Bitter y Muir, con algunas modificaciones que debieron ser introducidas para adecuarlo a nuestras condiciones experimentales. La determinación se basa en la precipitación de los GAGs por acción de bromuro de cetiltrimetilamonio, seguida de la hidrólisis del polímero y la posterior reacción colorimétrica con carbazol de los ácidos hexurónicos liberados. Se describen, detalladamente, los estudios de estandarización: determinación de la precisión de las distintas etapas del método, linealidad y carta de control de las pendientes de las curvas de calibración, ensayos de recuperación, investigación de interferencias y variaciones en las condiciones de trabajo. Esta metodología puede servir de base para establecer protocolos de control de cualquier procedimiento analítico