Flow cytometry as a tool in the evaluation of blood leukocyte function in Chelonia mydas (Linnaeus, 1758) (Testudines, Cheloniidae)

Chelonia mydas is a sea turtle that feeds and nests on the Brazilian coast and a disease called fibropapillomatosis is a threat to this species. Because of this, it is extremely necessary to determine a methodology that would enable the analysis of blood leukocyte function in these sea turtles. In order to achieve this aim, blood samples were collected from C. mydas with or without fibropapillomas captured on the São Paulo north coast. Blood samples were placed in tubes containing sodium heparin and were transported under refrigeration to the laboratory in sterile RPMI 1640 cell culture medium. Leukocytes were separated by density gradient using Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. The following stimuli were applied in the assessment of leukocyte function: Phorbol Miristate-Acetate (PMA) for oxidative burst activity evaluation and Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate for phagocytosis evaluation. Three cell populations were identified: heterophils, monocytes and lymphocytes. Monocytes were the cells responsible for phagocytosis and oxidative burst.

Chelonia mydas é uma tartaruga marinha que freqüenta o litoral brasileiro para alimentação e nidificação e uma doença denominada fibropapilomatose é uma das mais importantes ameaças à sobrevivência dessa espécie. Desta forma, a definição de uma metodologia que permita analisar a função dos leucócitos sangüíneos torna-se extremamente necessária. Foram utilizadas amostras sangüíneas de C. mydas com e sem fibropapilomas capturadas no litoral norte do estado de São Paulo. As amostras sangüíneas foram colocadas em tubos contendo heparina sódica e transportadas em meio de cultura celular RPMI 1640 estéril e sob refrigeração. Os leucócitos foram obtidos por gradiente de densidade usando Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. Os estímulos aplicados foram Miristato Acetato de Phorbol (PMA) para avaliação de burst oxidativo e Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate para avaliação de fagocitose. Foram identificadas três populações celulares: heterófilos, monócitos e linfócitos. Os monócitos foram as células responsáveis pela fagocitose e pelo burst oxidativo.

Flow cytometry as a tool in the evaluation of blood leukocyte function in Chelonia mydas (Linnaeus, 1758) (Testudines, Cheloniidae) / A citometria de fluxo como ferramenta para avaliar a função celular de leucócitos sangüíneos de Chelonia mydas (Testudines, Cheloniidae)

Chelonia mydas is a sea turtle that feeds and nests on the Brazilian coast and a disease called fibropapillomatosis is a threat to this species. Because of this, it is extremely necessary to determine a methodology that would enable the analysis of blood leukocyte function in these sea turtles. In order to achieve this aim, blood samples were collected from C. mydas with or without fibropapillomas captured on the São Paulo north coast. Blood samples were placed in tubes containing sodium heparin and were transported under refrigeration to the laboratory in sterile RPMI 1640 cell culture medium. Leukocytes were separated by density gradient using Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. The following stimuli were applied in the assessment of leukocyte function: Phorbol Miristate-Acetate (PMA) for oxidative burst activity evaluation and Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate for phagocytosis evaluation. Three cell populations were identified: heterophils, monocytes and lymphocytes. Monocytes were the cells responsible for phagocytosis and oxidative burst.

Chelonia mydas é uma tartaruga marinha que freqüenta o litoral brasileiro para alimentação e nidificação e uma doença denominada fibropapilomatose é uma das mais importantes ameaças à sobrevivência dessa espécie. Desta forma, a definição de uma metodologia que permita analisar a função dos leucócitos sangüíneos torna-se extremamente necessária. Foram utilizadas amostras sangüíneas de C. mydas com e sem fibropapilomas capturadas no litoral norte do estado de São Paulo. As amostras sangüíneas foram colocadas em tubos contendo heparina sódica e transportadas em meio de cultura celular RPMI 1640 estéril e sob refrigeração. Os leucócitos foram obtidos por gradiente de densidade usando Ficoll-PaqueTM Plus, Amershan Biociences®. Os estímulos aplicados foram Miristato Acetato de Phorbol (PMA) para avaliação de burst oxidativo e Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate para avaliação de fagocitose. Foram identificadas três populações celulares: heterófilos, monócitos e linfócitos. Os monócitos foram as células responsáveis pela fagocitose e pelo burst oxidativo.

Relación entre flexibilidad y fuerza muscular en isquiotibiales y su incidencia en lesiones musculares en jóvenes futbolistas / Relationship between flexibility and muscular strength and its incidence of hamstrings muscular injuries in young football players

Dentro de las lesiones en deportistas, las de tipo muscular corresponden al grupo de mayor frecuencia, sobre todo en futbolistas. Los isqulotibiales (IQT) son uno de los grupos musculares con mayor predisposición e incidencia de lesiones por sus características propias. Los factores de riesgo y mecanismos de lesión asociados a dicha injuria son numerosos, por In que se estima necesario jerarquizarlos con el fin de prevenir y disminuir la tasa de este tipo de lesiones. El objetivo de este estudio es asociar el factor fuerza, flexibilidad muscular o ambos, a la incidencia de lesiones musculares en IQT en futbolistas jóvenes, para intentar determinar cual de los dos prepondera sobre el otro. Para esto se realizó un estudio de tipo no experimental, longitudinal y prospectivo. La muestra (N=35) pertenece a las divisiones de fútbol joven del Club de Deportes Cobresal. Se evaluó: fuerza muscular de IQT (método dinámico de Delorme), flexibilidad pasiva (Test SLR) y flexibilidad activa (Test de AKE). Todas las mediciones fueron realizadas en ambas EEII. Tras un seguimiento post 6 meses en su temporada regular, se constataron las distintas lesiones musculares que aparecieron en este periodo. Utilizando t-student, se busca determinar la existencia de diferencias en ambos factores en relación a los futbolistas sanos y lesionados. Los resultados obtenidos demuestran que no existe relación alguna entre flexibilidad adecuada y la prevención de lesiones musculares en IQT de futbolistas jóvenes. Sin embargo, se observa una leve tendencia en los jugadores lesionados a presentar mayores valores de flexibilidad en ambos tests (AKE y SLR) con mayor influencia en el componente activo.

In the sportsmen injuries, those of muscular type correspond to the group of major frequency, especially in football players. The hamstrings, because of its own characteristics, are ones of the muscular groups with more predisposition to injuries and incidence. The risk factors and injury mechanisms associated with the above mentioned damage are several, for what it is necessary to rank them in order to prevent and reduce the rate of this type of injuries. The objective of this study is to associate the force factor, muscular flexibility or both to the incidence of hamstring muscular injuries in young football players, to try to determine which one prevails on the other one. Therefore, a non experimental, longitudinal and prospective study was carried out. The sample (N=35) belongs to the young football divisions of Club Deportes Cobresal. It was evaluated: hamstring muscular force (Delorme’s dynamic method), passive flexibility (Test SLR) and active flexibility (AKE’s Test). All the measurements were performed in both EEII. After a follow-up of 6 months in its regular season, the different muscular injuries appeared in this period was stated. To determine the existence of differences in both factors related to healthy and injured football players, the t-Student was carried out. The obtained results demonstrate that there is no relation between adequate flexibility and the muscular injuries prevention in hamstring of young football players. However, a slight trend is observed in the injured players to show more flexibility values in both tests (AKE and SLR) with more influence in the active component.

Inmunoensayo de capa fina (ICF) en el serodiagnóstico de la tripanosomiasis bovina causada por el trypanosoma vivax / Thin layer immunoassay (TIA) for the serodiagnosis of cattle Trypanosomiasis caused by trypanosoma vivax

El Trypanosoma vivax es el agente causal de la tripanosomiasis bovina. Las bajas parasitemias y sus oscilaciones típicas en la enfermedad, limitan el uso de métodos de diagnóstico directo. La prueba de ELISA es una técnica serológica con buena sensibilidad, especificidad y valor predictivo, pero con ciertos inconvenientes debido a su alto costo y difícil transferencia al campo. Dada la optimización previa de la técnica de ELISA para la detección de anticuerpos de bovino anti-T. vivax utilizando antígenos del Trypanosoma evansi, el objetivo de este trabajo fue el de optimizar la prueba de Inmunoensayo de Capa Fina (ICF) y aplicarla junto con la prueba de ELISA en un estudio seroepidemiológico comparativo. A manera general, los antígenos del T. evansi se sensibilizaron en las placas a distintas concentraciones en tampón carbonato 0,05 M pH 9,6, para posteriormente incubarlas en presencia de los sueros problema y de referencia, positivos y negativos, al T. vivax. El excedente de antígenos y sueros se eliminó por lavados con agua destilada y las reacciones antígeno-anticuerpo, se revelaron con los vapores de un baño de María en el caso del ICF y por incubación con anticuerpos secundarios conjugados a peroxidasa y un sustrato cromogénico para el ELISA. La seroprevalencia obtenida por ICF y ELISA fue del 38,66% y 36% respectivamente, a la vez que la distribución de la seroprevalencia por localidad, es similar en ambas pruebas. La fiabilidad del ICF en relación al ELISA quedó demostrada con una sensibilidad del 89,36% y especificidad del 75%. Los resultados demuestran que la prueba de ICF tiene una alta correlación con la prueba de ELISA, por ello la postulamos como una técnica alternativa en los estudios seroepidemiológicos de la tripanosomiasis bovina.

Trypanosoma vivax is the aethiological agent of bovine trypanosomiasis. The low parasitic burden and typical fluctuations, limit the direct diagnosis of the disease. The ELISA is a serological technique that has been used for the detection of trypanosomiasis. However, despite its good sensibility, specificity and predictive value, the high cost of this test has restricted its applicability under field conditions. Given the previous standardization of the ELISA assay for the detection of bovine antibodies against T. vivax using T. evansi antigens, the aim of this work was to standardize the Thin Layer Immunoassay (TIA) and apply it in conjunction with the ELISA test in a serological and epidemiological comparative study. Briefly, T. evansi antigens were sensitized in Petri dishes at different protein concentrations in 0.05 M carbonate buffer (pH 9.6). Subsequently, the Petri dishes were incubated in the presence of problem and reference sera, which were either positive or negative to T. vivax. The excess antigen and sera was eliminated by washes in distilled water and the antigen-antibody reactions were developed with a water steam in the TIA, followed by incubation with secondary antibodies (anti-bovine IgG) conjugated to Horseradish Peroxidase (HRP) and a chromogenic substrate in the ELISA. Results show that the values of seroprevalence obtained by both techniques were similar (38.66% and 36% for ICF and ELISA, respectively). Also, seroprevalence distribution in each locality was similar for both tests. The relative trustability of TIA was demonstrated with a sensibility of 89.36% and a specificity of 75%, respectively. These results suggest that TIA has a high correlation with ELISA and is suitable to be used in serological and epidemiological studies of bovine trypanosomiasis.

Síndrome paratraumático: estudio en treinta y siete fallecidos por traumatismo encefalocraneano / Paratraumatic syndrome: study in 37 died patients due to encephalocraneal trauma

El trauma se acompaña frecuentemente de alteraciones en parénquimas alejados de la causa principal derivadas tanto de sus propias características, como de nuestras acciones terapéuticas. A este conjunto de manifestaciones le hemos dado el nombre de síndrome paratraumático. Se estudia 37 pacientes fallecidos de TEC, sobrevivientes, por al menos 24 horas y sometidos a ventilación mecánica. Mediante protocolo se registró alteraciones a nivel de aparato digestivo, respiratorio y sistemas vascular y urinario. Los resultados más relevantes muestran traqueítis purulenta en 50 por ciento, complicaciones infecciosas pulmonares en 35 por ciento. Reacción inflamatoria de esófago, estómago y duodeno en 60 por ciento. Llama la atención la alta incidencia de tromboflebitis profunda 40 por ciento, complicadas de tromboembolismo pulmonar en un 50 por ciento. Se trata de extrapolar estos hallazgos a pacientes vivos, haciendo consideraciones acerca de prevención y tratamiento precoz de estas patologías asociadas a trauma, a fin de reducir la tasa de complicaciones que agravan el pronóstico de estos pacientes

Calcificaçöes pancreáticas em criança associada a ingestäo crônica de álcool: relato de caso / Pancreatic calcifications in child with association of chronic ingestiion of alcohol: a case report

Calcificaçöes pancreáticas em crianças tem sido descritas com pouca frequência, sendo a associaçäo com ingestäo crônica de álcool ainda mais rara. Os autores apresentaram o caso de uma criança de nove anos de idade com calcificaçöes pancreáticas e dores abdominais recorrentes, causadas pela pancreatite crônica alcoólica. Essa etiologia foi determinada por anamnese, dados epidemiológicos, exames laboratoriais e diagnóstico por imagem

Plástica mitral / Mitral valvuloplasty

Foram estudados 101 pacientes submetidos a plástica da valva mitral em seis anos, com seguimento de 100 por cento. Entre eles, 36 eram do sexo masculino e 65 do sexo feminino, com idade variando de dois a 62 anos (M = 28 ñ 16,4). Desses, 57 (56,4 por cento) foram submetidos apenas a abordagem valvar mitral. Os demais foram submetidos a procedimentos associados, como plástica tricúspide (9,9 por cento), revascularizaçao do miocárdio (4,0 por cento), entre outros. Nao foi registrado óbito imediato. O índice de mortalidade tardia foi de 2 por cento (AVC hemorrágico após cinco anos e septicemia), no primeiro ano. As complicaçoes nao fatais foram representadas pela endocardite evidenciada em dois pacientes (2 por cento), sendo tratados e curados, e um paciente com reestenose mitral pós-plástica por reagudizaçao da doença reumática. O estudo atuarial revelou um índice de 79,0 ñ 17,7 por cento de sobrevida, um total de 76,3 + 17,8 por cento de pacientes livres de complicaçoes, 80,0 + 17,9 por cento de reoperaçoes, 100,0 por cento livres de tromboembolismo. Os resultados ecodoplercardiográficos registraram que 89 por cento dos pacientes evoluíram com ausência de insuficiência. Dos ll por cento restantes, 7,4 por cento apresentram insuficiência mitral discreta, 2,4 por cento moderada e 2 por cento importante. De acordo com a classificaçao da NYHA, os pacientes das classes III (83,8 por cento) e IV (l6,2 por cento) passaram para as classes I (33,3 por cento), II (60,6 por cento), III (4,1 por cento) e IV (2 por cento). Os autores concluem que o anel de pericárdio flexível conforma-se perfeitamente com o anel valvar, nao produz hemólise e se endoteliza completamente a médio prazo.