Genetic polymorphisms of NAT2, CYP2E1 and GST enzymes and the occurrence of antituberculosis drug-induced hepatitis in Brazilian TB patients

Isoniazid (INH), one of the most important drugs used in antituberculosis (anti-TB) treatment, is also the major drug involved in hepatotoxicity. Differences in INH-induced toxicity have been attributed to genetic variability at several loci, such as NAT2, CYP2E1, GSTM1 and GSTT1, that code for drug-metabolising enzymes. Our goal was to examine the polymorphisms in these enzymes as susceptibility factors to anti-TB drug-induced hepatitis in Brazilian individuals. In a case-control design, 167 unrelated active tuberculosis patients from the University Hospital of the Federal University of Rio de Janeiro, Brazil, were enrolled in this study. Patients with a history of anti-TB drug-induced acute hepatitis (cases with an increase to 3 times the upper limit of normal serum transaminases and symptoms of hepatitis) and patients with no evidence of anti-TB hepatic side effects (controls) were genotyped for NAT2, CYP2E1, GSTM1 and GSTT1 polymorphisms. Slow acetylators had a higher incidence of hepatitis than intermediate/rapid acetylators [22 percent (18/82) vs. 9.8 percent (6/61), odds ratio (OR), 2.86, 95 percent confidence interval (CI), 1.06-7.68, p = 0.04). Logistic regression showed that slow acetylation status was the only independent risk factor (OR 3.59, 95 percent CI, 2.53-4.64, p = 0.02) for the occurrence of anti-TB drug-induced hepatitis during anti-TB treatment with INH-containing schemes in Brazilian individuals.

Detection of Mycobacterium leprae DNA by polymerase chain reaction in the blood and nasal secretion of Brazilian household contacts

DNA samples from blood and nasal swabs of 125 healthy household contacts was submitted to amplification by polymerase chain reaction (PCR) using a Mycobacterium leprae-specific sequence as a target for the detection of subclinical infection with M. leprae.All samples were submitted to hybridization analysis in order to exclude any false positive or negative results. Two positive samples were confirmed from blood out of 119 (1.7 percent) and two positive samples from nasal secretion out of 120 (1.7 percent). The analysis of the families with positive individuals showed that 2.5 percent (n = 3) of the contacts were relatives of multibacilary patients while 0.8 percent of the cases (n = 1) had a paucibacilary as an index case. All positive contacts were followed up and after one year none of them presented clinical signs of the disease. In spite of the PCR sensitivity to detect the presence of the M. leprae in a subclinical stage, this molecular approach did not seem to be a valuable tool to screen household contacts, since we determined a spurious association of the PCR positivity and further development of leprosy.

Distribuição de Polimorfismos de Base única (SNPs) no gene de TNF-alfa (-238/-308) entre pacientes com TB e outras pneumopatias: marcadores genéticos de susceptibilidade a ocorrência de TB? / Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) of the TNF-alpha (-238/-308) gene among TB and nom TB patients: susceptibility markers of TB occurrence?

INTRODUÇAO: Fatores genéticos podem desempenhar um importante papel na susceptibilidade à tuberculose (TB) ativa, e polimorfismos de base única (SNPs) em diferentes genes que codificam para citocinas têm sido descritos e associados com doenças. OBJETIVOS: Investigar o quanto polimorfismo na região promotora do gene que codifica para TNF-alfa (-238 e -308) estão associados a ocorrência de TB ativa. MÉTODOS: SNPs dentro do gene de TNF-alfa foram analisados por PCR- RFLP em dois grupos de indivíduos: pacientes com TB (n = 234) e pacientes com pneumopatias não TB (n = 113). RESULTADOS: Neste estudo, o alelo -238A esteve associado significantemente com susceptibilidade à ocorrência de TB e gravidade das formas clínicas (p = 0,00002; OR = 0,15; IC = 0,06-0,36). Por outro lado, o alelo -308A esteve associado significantemente com a proteção a outras formas de doença pulmonar (p = 0,02; OR = 1,95; IC = 1,07-3,58). CONCLUSÕES: Estes resultados preliminares sugerem a importância de estudos genéticos na ocorrência da TB. São necessários outros estudos para melhorar a compreensão sobre a patogênese do M. tb.

Padronização de um teste "in house" para o diagnóstico molecular de tb pulmonar paucibacilar: resultados preliminares / Sandartization of an \"in house\" PCR-based test for the molecular diagnosis of paucibacillary tuberculosis: preliminary results

Introdução: a amplificação de ácido nucleico através da técnica de reaçã em cadeia da polimerase - PCR pode ser útil para o diagnóstico da tuberculose. O objetivo deste trabalho foi padronizar um método molecular para o diagnóstico da TB pulmonar. Material e métodos: iniciadores especificos foram usados para amplificação...

Detection of Mycobacterium leprae DNA by polymerase chain reaction in the blood of individuals, eight years after completion of anti-leprosy therapy

Thirty eight patients with indeterminate leprosy (HI), at least 4 to 6 years after discharge from multibacillary (MB) or paucibacillary (PB) schemes of anti leprosy multidrug therapy (MDT), were submitted to traditional diagnostic procedures for leprosy and to polymerase chain reaction (PCR) analysis of different clinical samples for detection of Mycobacterium leprae DNA. No significant difference was observed for any of the parameters analyzed between PB or MB schemes of treatment and no indications were found for more efficient outcome of HI using the MB scheme. Remarkably, 18 (54.5 percent) of the individuals were PCR positive in at least one of the samples: positivity of PCR was highest in blood samples and four individuals were PCR positive in blood and some other sample. Upon comparison of PCR results with clinical and histopathological parameters, no correlation was found between PCR-positivity and eventual relapse. This is the first report on detection of M. leprae DNA in PB patients, more than half a decade after completion of MDT, suggesting that live bacilli are present and circulating much longer than expected, although reinfection of the individuals can not be excluded. Overall, we feel that because of the high sensitivity of the assay, extreme care should be taken about association of PCR results, efficacy of treatment and disease status

Aplicação da tecnica de PCR (polymerase chain reaction) na pesquisa da hanseniase / ?

Embora com a introdução da poliquimioterapia, a prevalencia da hanseniase esteja diminuindo a nivel mundial, a doença ainda é considerada um problema de saude publica em muitos paises. No Brasl, a situação é de muita preocupação, pois o pais ocupa o segundo lugar no mundo em termos de numero de casos registrados. Com o objetivo de contribuir no controle e na erradicação desta endemia, aplicamos a tecnica de reação de polimerase em cadeia (PCR) diretamente em amostras clinicas de pacientes hansenianos, na tentativa de detecção da infecção subclínica, um dos mais importantes problemas para o controle epidemiologico da doença. Utilizando um sistema de amplificação especifico para M. leprae, foi possivel detectar em um primeiro rastreamento, a presença de bacilos em biopsia, linfa e sangue de 87% dos pacientes virgens de tratamento com uma positividade de 84% nos pacientes multibacilares e 100% nos paucibacilares, sugerindo a utilização do PCR como metodo de apoio para diagnostico. Diferentes protocolos para tratamento de amostras clinicas não invasivas tais como mucosa nasal e pêlo foram padronizados e apos a realização da PCR, detectamos a presença de bacilos em 87,5% dos pacientes paucibacilares. Concluimos que pêlo é uma amostra com alto potencial para detecção de infecção subclinica, uma vez que permite a detecção de M. leprae mesmo quando coletado de areas não lesadas da pele. Através da detecção de M. leprae em mucosa nasal e sangue de um individuo com suspeita clinica de hanseniase, demonstramos a utilização do PCR como metodo de suporte laboratorial a clinica em casos de dificil diagnostico. Mostramos ainda um diagnostico precoce de possivel recidiva em paciente paucibacilar apos longo tempo de tratamento, sugerindo a utilização da tecnica como metodo de apoio na diferenciação entre recidiva e reação reversa. Finalmente, avaliamos a eficacia da multidrogaterapia em individuos com 4 a 6 anos de alta terapeutica através da comparação entre avaliação clinica e laboratorial com PCR em sangue, linfa e pêlo, demonstrando a presença de DNA amplificavel em 54% dos individuos. Detectamos bacterias no sangue de 71% destes individuos sem sintomatologia clinica, sugerindo a existencia de bacterias viaveis. Embora a tecnica de PCR tenha apresentado alta sensibilidade e especificidade sugerindo a utilização para detecção sub-clinica da doença, a possibilidade de um carreamento passivo de bacilos em certas amostras e a falta de correlação entre PCR...

Desenvolvimento de método para extração de acidos nucleicos de micobacterias e utilização da técnica de PCR (polymerase Chain Reaction) para o diagnostico de hanseniase / ?

Desenvolvemos durante este trabalho um eficiente protocolo para a extração de acidos nucleicos de micobacterias. A alta qualidade do DNA extraido por este procedimento foi mostrada através de eletroforese em gel de agarose, espectrofotometria, construção de bibliotecas genômicas de Mycobacterium leprae, M. tuberculosis e M. bovis-BCG, bem como através de sua utilização como alvo para a amplificação com "Polimerase chain reaction" (PCR). Utilizando oligonucleotideos para uma sequencia repetitiva, específica de M. leprae localizada na região 3', não-codificante do antígeno de 65 kDa, obtivemos uma amplificação altamente sensível e especifica, tanto com DNA de M. leprae purificado quanto com DNA obtido de amostras clinicas de pacientes com hanseniase, otimizando para isto, protocolos para o processamento das diferentes amostras clínicas. Um total de 27 pacientes com espectro clinico e indice baciloscopico definido foram rastreados por PCR para a presença ou ausencia de M. leprae utilizando como amostras clinicas, biopsias, linfa e células mononucleares isoladas do sangue oeriferico. Os resultados foram analisados por visualização em gel de eletroforese e por hibridização com oligonucleotideos ou com um fragmento clonado da sequencia repetitiva. 25 pacientes foram positivos para a infecção com M. leprae em pelo menos um dos testes e umja avaliação preliminar do uso de PCR foi realizada.