RESUMEN
Abstract Entamoeba infections occur worldwide, with higher frequency in countries of low socioeconomic status and poor public health. Since Entamoeba histolytica has long been recognized as the only pathogenic species, making a differential diagnosis of other morphologically identical Entamoeba is important. This study aimed to determine the prevalence of Entamoeba species in two populations from Argentina, make a differential diagnosis by PCR and characterize Entamoeba isolates at the SSU rRNA gene. A total of 493 serial fecal samples were obtained from individuals in the provinces of Buenos Aires (n=210) and Misiones (n=283). Samples were examined by conventional methods (formalin-ethyl acetate and Willis flotation) and specific PCRs to differentiate Entamoeba species. Entamoeba isolates were characterized by sequencing a fragment of the SSU rRNA gene. The overall prevalence of Entamoeba infection was 12.4%, being more prevalent in Buenos Aires than in Misiones (14.8% vs. 10.6%). A case of E. histolytica confirmed by PCR and sequence analysis was reported for the first time in Buenos Aires. Moreover, new genetic data on Entamoeba coli and Entamoeba dispar were recorded. The phylogenetic analysis revealed a congruence between morphological characteristics and SSU rRNA gene sequences. This study increases the amount of information on the distribution of these species in Argentina and the region of the Americas.
Resumen Las infecciones por Entamoeba se producen en todo el mundo, con mayor frecuencia en países de bajo nivel socioeconómico y salud pública deficiente. Dado que se ha reconocido a Entamoeba histolytica como la única especie patógena del género, es importante realizar un diagnóstico diferencial respecto de otras especies de Entamoeba morfológicamente idénticas. Este estudio tuvo como objetivos determinar la prevalencia de especies de Entamoeba en 2 poblaciones de Argentina, realizar su diagnóstico diferencial por PCR y caracterizar los aislados de Entamoeba secuenciando un fragmento del gen SSU ARNr. Se obtuvieron 493 muestras fecales seriadas de individuos de las provincias de Buenos Aires (n=210) y Misiones (n=283). Las muestras se examinaron por métodos convencionales (sedimentación de formalina-etil acetato y flotación de Willis) y mediante PCR específicas para diferenciar especies de Entamoeba. Los aislamientos de Entamoeba se caracterizaron por secuenciar un fragmento del gen SSU ARNr. La prevalencia general de la infección por Entamoeba fue del 12,4% y fue mayor en Buenos Aires que en Misiones (14,8 vs. 10,6%). Se informó por primera vez un caso de Entamoeba histolytica en Buenos Aires, confirmado por PCR y análisis de secuencia. Además, se registraron nuevos datos genéticos sobre Entamoeba coli y Entamoeba dispar. El análisis filogenético reveló una congruencia entre las características morfológicas y las secuencias del gen SSU ARNr. A través de este estudio, hemos sumado información acerca de la distribución de estas especies en nuestro país y en la región de las Américas.
RESUMEN
Abstract Hookworm infection is endemic in many countries throughout the world; however,the information about the prevalence of each species, Necator americanus and Ancylostomaduodenale, is inaccurate in many South American countries. We aimed to determine the preva-lence of human hookworm species by combining the results of both microscopy and PCR amongendemic populations in Argentina, represented by natives and immigrants. A total of 140 serialfecal specimens were obtained from natives in the province of Misiones and an immigrantcommunity living in the province of Buenos Aires. Samples were examined using the formalin-ethyl acetate concentration technique (FECT) and one flotation technique (screening tests)and specific PCRs for N. americanus and A. duodenale. We characterized samples containingN. americanus by sequencing a fragment of the cytochrome b gene. The observed hookwormprevalence as assessed by the screening tests and PCR were 24.3% and 32.8%, respectively. PCRpositive samples were identified as N. americanus. PCR had 100% sensitivity compared with73.9% of screening tests. A total of 12 samples from individuals with hookworm-infected house-hold members were positive only by PCR. N. americanus sequences showed 90.5% identity, beingmore similar to each other than to any of the sequences obtained from GenBank. This is thefirst study that provides molecular data and characterization of N. americanus in Argentina.The complementary use of FECT and one flotation technique to screen hookworm infections,followed by PCR to differentiate the species contribute to produce better prevalence estimates.
Resumen La infección por Ancylostomideos es endémica en muchos países del mundo, pero la información sobre la prevalencia de las especies que la causan, Necator americanus y Ancylostoma duodenale, es inexacta en América del Sur. Nuestro objetivo fue determinar la prevalencia de especies de Ancylostomideos humanos en poblaciones de Argentina nativas o provenientes de áreas endémicas, combinando los resultados de microscopía y PCR. Un total de 140 muestras fecales seriadas fueron obtenidas de individuos nacidos en la provincia de Misiones con residencia en esta y de miembros de una comunidad oriunda del Paraguay establecida en la provincia de Buenos Aires. Las muestras fueron examinadas por la técnica de formol-acetato de etilo (FAE) y una técnica de flotación como pruebas de cribado, y se efectuaron PCR específicas para N. americanus y A. duodenale. Caracterizamos muestras que contienen N. americanus secuenciando un fragmento del gen del citocromo b. La prevalencia de Ancylostomideos según las pruebas de cribado y el método PCR fueron del 24,3 y 32,8%, respectivamente. Las muestras positivas por PCR se identificaron como N. americanus. La PCR tuvo una sensibilidad del 100,0% en comparación con el 73,9% de las pruebas de detección. Hubo 12 muestras de individuos con miembros de la familia infectados con anquilostomas que solo por PCR fueron positivas. Las secuencias de N. americanus mostraron un 90,5% de identidad y fueron más similares entre sí que a cualquiera de las secuencias obtenidas de GenBank. Este es el primer estudio que proporciona datos moleculares y la caracterización de N. americanus en Argentina. El uso complementario de FAE y una técnica de flotación para detectar infecciones por anquilostomas, seguido de PCR para diferenciar las especies, contribuye a producir mejores estimaciones de prevalencia.