Efecto de Maytenus macrocarpa “Chuchuhuasi” en el sistema reproductor masculino del ratón (Mus musculus)

Maytenus macrocarpa (Chuchuhuasi) es un árbol nativo de la región Amazónica del Perú utilizado como planta medicinal para el tratamiento de muchas enfermedades, sin embargo su efecto sobre el sistema reproductor masculino aún no ha sido elucidado. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del extracto acuoso de M. macrocarpa en dosis diarias durante 7 días sobre los parámetros reproductivos de ratones machos. Se utilizó machos maduros de la cepa C57BL divididos en 2 grupos (n=10), Grupo Control (C): NaCl 0.9% y Grupo Tratamiento (T): Extracto acuoso de Chuchuhuasi, ambos suministrado diariamente vía sonda esofágica y al octavo día fueron eutanizados. Se registraron el peso corporal y de los órganos reproductivos: testículo, epidídimo y conducto deferente, se evaluaron la concentración, movilidad y morfología espermática. En nuestros datos observamos diferencias significativas (Prueba t- Student P=0.05) en el peso de la cabeza y cuerpo del epidídimo (C: 19.25±1.1 vs T: 21.26±2.0), el peso del conducto deferente (C: 10.62±0.7 vs T: 11.75±0.5), movilidad espermática progresiva (C: 42.16±5.2 vs T: 25.82±8.4) e Inmóviles (C: 36.05±4.9 vs T: 48.51±7.2). No se observaron diferencias en el recuento espermático entre ambos grupos. La morfología espermática normal disminuyó con la ingesta de M. macrocarpa (Prueba t-Student p<0.05) (C: 39.72±1.3 vs T: 30.78±4.9). Concluimos que el extracto acuoso de M. macrocarpa presenta un efecto negativo en el sistema reproductivo masculino de ratones.

Maytenus macrocarpa (chuchuhuasi) is native tree of the Peruvian Amazon used as traditional medicine for the treatment of many diseases, but its effect on the male reproductive system has not yet been elucidated. The aim of this study is evaluate the effect of aqueous extract of M. macrocarpa in daily doses for 7 days on reproductive parameters of male mice. We used C57BL mature male mice divided into 2 groups (n= 10), Control Group (C): 0.9% NaCl and Treatment group (T): Aqueous extract of Chuchuhuasi, both supplied daily via oral gavages. At the eight day of treatment the mice were euthanized. The weight of the body and reproductive organs: testis, epididymis and vas deferens, were registered. Concentration, motility and sperm morphology were evaluated. The results showed significantly differences (t- Student test P<0.05) in the weight of the head and body epididymis (C: 19.25±1.1 vs T: 21.26±2.0), vas deferens (C: 10.61±0.7 vs T: 11.75±0.5), progressive sperm motility (C: 42.16±5.2 vs T: 25.82±8.4) and immobile sperm (C: 36.05±4.9 vs T: 48.51±7.2). No difference in sperm count was observed. The sperm normal morphology diminished with ingest of M. macrocarpa (t-Student test p <0.05) (C: 39.72±1.3 vs T: 30.78±4.9). We conclude that the aqueous extract of chuchuhuasi, has a negative effect on the male reproductive system of mice.

Dosis única de ciclofosfamida disminuye la calidad espermática y el epitelio germinal masculino en ratones

Ciclofosfamida (CP) es un agente alquilante comúnmente utilizado como fármaco antineoplásico e inmunosupresor. El uso de CP, en el tratamiento de cáncer es limitado debido a su severa toxicidad. El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de una única dosis de CP (220 mg/kg peso corporal) administrada intraperitonealmente después de 7 días, sobre parámetros espermáticos y el epitelio germinal masculino en ratones. Se utilizó machos maduros de la cepa C57BL divididos en 2 grupos (n= 10), Grupo Control (C): NaCl 0,9 % y Grupo Tratamiento (T): CP a 220 mg/kg pc en dosis única y después de 8 días fueron eutanizados. Se registró el peso corporal y de órganos reproductivos: testículos, epidídimos y conducto deferente, se evaluaron la concentración, movilidad y morfología espermática e histología testicular. Se encontraron diferencias significativas (Prueba t- student p<0,05) en el peso corporal (T: 20,18±1,9 g vs C: 23,35±1,2 g); peso testicular (T: 59,71±5,40 mg vs C: 72,90±2,8 mg), cola del epidídimo (T: 9,83±1,54 mg vs C: 14,30±2,20mg, conducto deferente (T: 8,27±0,80 mg vs C: 10,61±0,76 mg respectivamente), concentración (T: 9,2±1,9 vs C: 14,4±3,3 x 10(6) espermatozoides/mL), Movilidad progresiva (T: 25,98±6,4% vs C: 42,96±5,2%). En la morfología espermática no se observó diferencias significativas (Prueba t- student p<0,05), sin embargo en anomalías de la cola y espermatozoides inmaduros se observó un aumento significativo (T vs. C: 36,24±7,8% vs 31.73±9,1%; 27,44±2,1% vs 18,51±8,6%; respectivamente) y a su vez se observó severos daños en los túbulos seminíferos. Concluimos que una dosis única de CP (220mg/kg pc) disminuye la calidad reproductiva de ratones macho.

Cyclophosphamide (CP) is an alkylating agent commonly used as antineoplastic and immunosuppressive drug. The use of CP in the treatment of cancer is limited due to its severe toxicity. The aim of this study was to determine theeffectof a single dose of CP (220 mg/kg b.w.) intraperitoneally administered after 7 days,on sperm parameter and male germinal epithelium in mice. We used C57BL mature male mice divided into 2 groups (n= 10); Control Group (C): 0.9% and NaCl Treatment group (T): CP to 220 mg/kg cw in single dose. After 8 days all the mice were euthanized. The weight of the body and reproductive organs: testis, epididymis and vas deferens, were registered. Concentration, motility and sperm morphology and testicular histology were evaluated. Significant differences were found in body weight (student t-test p<0.05) (T: 20.18±1.9 g vs C: 23.35±1.2 g; testicular weight (T: 59.71±5.40 mg vs C: 72.90±2.8 mg), epididymis tail weight (T: 9.83 ± 1.54 vs C: 14.30 ± 2.20, vas deferens weight (T: 8.27±0.80 mg vs C: 10.61±0.76 mg respectively), concentration (T: 9.2±1.9 vs. C: 14.4±3.3 x 10(6) sperm / mL), progressive motility (T: 25.98±6,4% vs C: 42.96±5.2%). There wasn´t significant differences in sperm morphology (student t-test p<0.05), but there was a significant increase in abnormal tail and immature sperm (T vs. C: 36,24±7,8% vs 31.73±9,1%; 27,44±2,1% vs 18,51±8,6%; respectively) and also severe damage seminiferous tubules was observed. We conclude that single dose of CP (220mg/kg b.w.) decreased the reproductive quality of male mice.

Aplicación de dos biomarcadores para el análisis de lesiones en el DNA de bivalvos marinos

El presente trabajo describe la estandarización de las técnicas del Test de Micronúcleo (MN) y Ensayo Cometa para la evaluación del daño en el DNA de bivalvos marinos. La importancia de estas técnicas radica en que permiten evaluar la respuesta temprana al estrés ocasionado por agentes contaminantes y cambios ambientales. Tejidos branquiales de Semimytilus algosus y Aulacomya ater fueron utilizados para tratamientos in vivo e in vitro. Los tejidos fueron expuestos a los agentes mutagénicos Mitomicina C en concentraciones de 0,02; 0,04 y 0,06 x 10-6 M y H2O2 en una concentración de 100 mM con tiempos de evaluación de 1, 3, 6, 24 y 48 h. Diferentes soluciones para la colecta del tejido y aislamiento celular fueron evaluados obteniendo una mayor viabilidad celular en la solución salina CMFS, pH 7,3; en frío. El Test de Micronúcleo se modificó en la forma de obtener el disgregado celular, realizando la hipotonización en Citrato de sodio 0,9%, fijación en metanol por segundos posterior al frotis y la tinción con Giemsa 2%. La estandarización del Ensayo Cometa Alcalino, descrita por Wilson et al. (1998), se realizó modificando la suspensión celular en agarosa LMP (1% en solución Kenny, pH 7,5), la exposición a solución de lisis (pH 10 con DMSO y Tritón) con variaciones en el tiempo de 1 a 16 h, y la electroforesis en solución alcalina pH 13,7 y tinción con Bromuro de etidio y Nitrato de plata para geles de agarosa. Los cambios realizados en ambas técnicas permitieron obtener un alto número celular con morfología definida, observándose macrolesiones como la formación de MN y aberraciones nucleares, y la determinación cualitativa de microlesiones observadas por fragmentación y migración del DNA.

This work describes the standardization of Micronucleus Assay (MN) and Comet Assay techniques used for the evaluation of the DNA damage on marine bivalves. These techniques are important because they can evaluate the early stress response caused by pollutant agents and environmental changes. Branchial tissues of Semimytilus algosus and Aulacomya ater were used for in vivo and in vitro treatments. Tissues were exposed to the mutagenetic agents Mitomicine C in concentrations of 0,02; 0,04 and 0,06 x 10-6 M and H2O2 in concentration of 100 mM evaluated at 1, 3, 6, 24 and 48 h. Different solutions for the tissue collection and cell isolation were evaluated, obtaining more cell viability with cold CMFS pH 7,3 saline solution. Micronucleus Assay were modified in the obtaining of suspension cell, we used 0,9% Sodium citrate hipotonic solution, fixation in methanol for seconds after the spread and dyed with 2% Giemsa. The Alkaline Comet Assay protocol described by Wilson et al. (1998) was standardized modifying the single-cell suspension embedded in LMP Agarose (1% in Kenny solution, pH 7,5), the exposure at lysing solution (pH 10 with DMSO and Triton) with changes from 1 to 16 h, electrophoresis in alkaline solution pH 13,7 and dyed with Ethidium bromide and Silver nitrate for agarose gels. Changes made at both techniques allowed us to obtain a high cell number with a defined morphology, recognizing macrolessions like the MN formation and nuclear aberrations, and the qualitative determination of microlessions observed by the fragmentation and migration of the DNA.

Observaciones morfohistológicas del testículo y espermatozoides de Microlophus peruvianus (Lesson, 1826) (Sauria:Tropiduridae)

El presente trabajo proporciona información morfohistológica de los testículos y espermatozoides de 5 individuos de la lagartija peruana Microlophus peruvianus (Lesson, 1826), procedentes de Huaral, Lima (11º 26´S; 77º24´W); colectados durante el mes de setiembre de 2005. El trabajo de campo se combinó con el análisis de laboratorio de las gónadas. La longitud promedio hocico-cloaca fue de 91,3mm ± 13,655, encontrándose todos los individuos con gran actividad meiótica en la línea espermatogénica con un grosor del epitelio germinativo de 126,33 μm ± 0,092, lo que sugiere que el mes de colecta estaría dentro de su ciclo activo de reproducción. La línea espermatogénica presenta los tipos celulares típicos de la espermatogénesis: espermatogonias (3,544 μm ± 0,4513), espermatocitos primarios (4,864 μm ± 0,5292), espermátides (2,85 μm ± 0,4071); no se encontraron espermatocitos secundarios. La morfología y biometría del espermatozoide de M. peruvianus propone su importancia como valor taxonómico.

The present work provides morphological and histological information of the testicles and spermatozoon of 5 specimens of the Peruvian small lizard Microlophus peruvianus (Lesson, 1826), from Huaral, Lima (11º 26´S; 77º24´W); collected during September, 2005. The fieldwork was combined with the gonads analysis at the laboratory. The snout-sewer length average was 91,3mm ± 13.655; all specimens deals a great spermatogenic meiotic activity showing a germinative epithelium thickness of 126.33 mm ± 0.092, which suggests that the month of collect would be within its active cycle of reproduction. The spermatogenic cells present the typical cellular types of the spermatogenesis: spermatogonias (3.544 mm ± 0.4513), primary espermatocitos (4.864 mm ± 0.5292), spermatids (2.85 mm ± 0.4071); No secondary spermatocytes where founded. The morphology and biometry of the spermatozoon of M. peruvianus proposes its importance as taxonomic value.