Bothrops pirajai snake venom L-amino acid oxidase: in vitro effects on infection of Toxoplasma gondii in human foreskin fibroblasts

The effect of an L-amino acid oxidase isolated from Bothrops pirajai snake venom (BpirLAAO-I) was investigated on infection of Toxoplasma gondii in human foreskin fibroblasts (HFF). The cytotoxic activity of BpirLAAO-I on HFF cells showed a dose-dependent toxicity with median cytotoxic dose (TD50) of 11.8 µg/mL. BpirLAAO-I induced considerable dose-dependent decrease in the T. gondii infection index under two different conditions, treatment of tachyzoites before infection or treatment of HFF cells after infection. A maximal inhibition of infection (56 percent) was found for treatment before infection, with a median inhibitory dose (ID50) at 1.83 µg/mL and selectivity index (SI) at 6.45. For treatment after infection, it was observed a maximal inhibition of infection at 65 percent, ID50 of 1.20 µg/mL and SI of 9.83. The treatment before infection was also effective to reduce intracellular parasitism up to 62 percent, although presenting higher values of ID50 (3.14 µg/mL) and lower values of SI (3.76). However, treatment after infection was not effective, suggesting that the enzyme seems to have no effect on the parasite intracellular replication for this condition. In conclusion, BpirLAAO-I was more effective to inhibit the infection of neighboring cells and consequently parasite dissemination than primary infection and parasite replication. Thus, the effect of BpirLAAO-I described herein could be taken into account for the development of new synthetic anti-parasite therapeutic agents.

Eficácia clínica da imunoterapia nasal comparada com imunoterapia sublingual em pacientes com rinite alérgica / Clinical efficacy of nasal immunotherapy compared to sublingual immunotherapy in patients with allergic rhinitis

A eficácia da imunoterapia (IT) com extratos alergênicos em pacientes com rinite alérgica (RA) tem sido demonstrada por via subcutânea ou sublingual, não existindo comprovação da eficácia terapêutica da IT tópica nasal. Objetivo: Comparar a eficácia da IT sublingual com a IT tó¬pica nasal em pacientes com RA. Pacientes e Método: Quarenta indivíduos com RA persistente, leve ou moderada, foram divididos em dois grupos em estudo prospectivo, duplo-cego, randomizado, com duração de doze meses. O grupo I utilizou IT tópica nasal com extratos alergênicos de ácaros da poeira domiciliar + placebo sublingual e o grupo II foi submetido a IT sublingual com extratos alergênicos + placebo tópico nasal. Foram realizadas oito avaliações durante o estudo, determinando-se a gravidade da RA e o consumo de medicamentos, além das alterações das mucosas nasais ao exame físico. Níveis de IgE e IgG4 anti-Oermatophagoides pteronyssinus foram determinados em amostras de soro de 22 pacientes, antes e após tratamento. Resultados: Vinte e cinco pacientes concluíram o estudo (grupo I, n=l1 e grupo lI, n=14). Redução significante na gravidade da RA e no consumo de medicamentos foi observada após tratamento nos dois grupos, enquanto que a redução nas alterações da mucosa nasal só foi observada no grupo Il. Não se observaram alterações significantes nos níveis de IgE e IgG4 anti-D. pteronyssinus nos dois grupos. Conclusão: Ambos os procedimentos de IT (sublingual e nasal) são eficazes na redução dos sintomas e do consumo de medicamentos de pacientes com RA por alérgenos de ácaros da poeira domiciliar. No grupo de pacientes que receberam IT sublingual, houve redução nas alterações da mucosa nasal.

Several studies have demonstrated the efficacy of subcutaneous or sublingual immunotherapy (IT) with allergen extracts for the treatment of perennial allergic rhinitis (AR), but there are no actual data on nasal IT efficacy. Aim: Evaluate the efficacy of topical nasal IT compared to sublingual IT in AR patients. Patients and Methods: Forty patients with mild or mederate perennial AR were selected to participate on this prospective, one-year follow-up, doubleblind randomized study. They were divided in 2 groups: group I (n=20) was treated with sublingual IT containing mite allergen extracts plus placebo on nasal mucosa and group II (n=20) was treated with topical nasal IT containing mite allergen extracts plus placebo via sublingual. A total of eight evaluations were performed during the follow-up to determine rhinitis severity and medicine consumption, as well as abnormalities of nasal mucosa. IgE and IgG4 antibodies anti-Oermatophagoides pteronyssinus were determined in serum samples of 22 subjects before and after IT. Results: Twenty-five subjects concluded the study (group I, n=l1 and group lI, n=14). There was a significant reduction on rhinitis severity and medicine consumption before and after the treatment in both groups. In addition there was a significant reduction on nasal mucosa abnormalities before and after treatment in group II patients. There were no changes on leveis of IgE or IgG4 antibodies anti-D. pteronyssinus before and after IT in both groups. Conclusion: The efficacy of sublingual and nasal IT was demonstrated in patients with AR, by reducing symptoms and medicine consumption. In addition, sublingual IT also reduced nasal mucosa abnormalities.

IgA production, coliforms analysis and intestinal mucosa morphology of piglets that received probiotics with viable or inactivated cells

Two types of probiotics were used in piglets. One product is a mixed culture of viable Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecium e Bifidobacterium bifidum. The second product is composed of inactivated Lactobacillus acidophilus cells. The piglets received two weekly oral doses for 30 days while a control group did not receive probiotics. All piglets were euthanized at the 30th day of life and the mesenteric lymph nodes, the small intestine, and blood samples were collected. The tissue samples were studied by light microscopy and the blood serum was analyzed by ELISA method. The treatment with the probiotic with viable cells produced higher serum levels of IgA (P<0.05) and more IgA expressing cells were found in the mesenteric lymph nodes than observed in the inactivated cells treatment or control groups (P<0.05). Also, intestinal villi were longer, crypts were deeper (P<0.05) and fecal coliform count was lower than found in the inactivated product (P<0.05). These results suggest that viable probiotics are more efficient than inactivated probiotics to induce immunostimulation and intestinal modifications in piglets, thus improving their health and development.

Dois probióticos foram usados em leitões recém nascidos: um constituído por cultivo viável misto de Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecium e Bifidobacterium bifidum e o segundo composto por células inativadas de Lactobacillus acidophilus. Os animais receberam duas doses orais por semana, por 30 dias; um grupo controle não recebeu probióticos. Os leitões foram abatidos aos 30 dias de idade e foram colhidos os linfonodos mesentéricos, o intestino delgado e amostras de sangue. Os tecidos foram estudados por microscopia de luz e as amostras de soro foram analisadas pelo método ELISA. O probiótico com células viáveis produziu níveis mais altos de IgA no soro sangüíneo (P<0,05) e mais células IgA positivas foram encontradas nos linfonodos mesentéricos que no tratamento com células inativadas ou no controle (P<0,05). Igualmente, as vilosidades intestinais eram mais alongadas e criptas mais profundas (P<0,05), com menor contagem de coliformes fecais que no tratamento com células inativadas (P<0,05). Estes resultados sugerem que o probiótico com bactérias viáveis é mais eficiente que o probiótico inativado para induzir imunoestimulação e modificações intestinais nos leitões, melhorando a saúde em geral e o desenvolvimento.

Heterogeneidade da resposta de anticorpos IgE aos alérgenos principais de Dermatophagoides pteronyssinus entre pacientes com alergia respiratória: Implicações para a imunoterapia específica com alérgenos / Heterogeneity of the IgE antibody response to major allergens from Dermatophagoides pteronyssinus among patients with respiratory allergy: Implications for allergen-specific immunotherapy

Objetivo: Analisar os níveis de IgE sérica específica aos alérgenos Der p 1 e Der p 2 de Dermatophagoides pteronyssinus (Dpt) em pacientes com alergia respiratória e comparar com as sensibilizações in vivo (teste cutâneo de puntura - TCP) e in vitro (ELISA- IgE) ao extrato total de Dpt. Métodos: Um total de 73 pacientes atópicos apresentando rinite alérgica com ou sem asma moderada e TCP positivo ao extrato total de Dpt foram estudados. Trinta indivíduos saudáveis com TCP negativo a ácaros da poeira domiciliar foram incluídos como controles. Níveis de IgE total e IgE específica a Dpt, Der p 1 e Der p 2 foram determinados por ELISA em pacientes atópicos (TCP+) e indivíduos controles não atópicos (TCP-). Resultados: Dos 73 pacientes atópicos, 38 (52 por cento) foram IgE duplo positivos aos alérgenos Der p 1 e Der p 2 (Der p 1+/Der p 2+), 11 (15 por cento) foram IgE positivos somente para Der p 1 (Der p 1+/Der p 2–), 7 (10po9r cento) foram IgE positivos somente para Der p 2 (Der p 1–/Der p 2+) e 17 (23 por cento) foram IgE duplo negativos para ambos alérgenos (Der p 1–/Der p 2–). Correlações significativas foram encontradas entre os níveis de IgE anti-Dpt e seus alérgenos (Der p1 ou Der p 2) bem como entre IgE anti-Der p 1 e anti-Der p 2 (P < 0,0001), mas não entre IgE específica a Dpt, Der p 1 ou Der p 2 e resultados do TCP. Pacientes com IgE duplo negativos apresentaram níveis de IgE anti-Dpt (IE = 1,4 ± 0,9) significativamente menores que os outros grupos, embora com altos níveis médios de IgE sérica total e valores de TCP. Conclusões: Os pacientes com alergia respiratória que apresentaram TCP+ ao extrato Dpt mostraram grande heterogeneidade da resposta de anticorpos IgE aos alérgenos principais de D. pteronyssinus, particularmente Der p 1 e Der p 2 e portanto, a determinação desses anticorpos específicos pode ser de grande valia para indicação e/ou seguimento de pacientes sensibilizados a ácaros sob imunoterapia específica com alérgenos.

Exposição alergênica em cinemas na cidade de Goiânia, GO / Allergen exposure in cinemas of Goiânia, Brazil

Objetivo: Avaliar a presença e nível dos alérgenos de Dermatophagoides pteronyssinus (Der p 1), Dermatophagoides farinae (Der f 1), Canis familiares (Can f 1), Felis domesticus (Fel d 1) e Blattella germanica (Bla g 2) em cinemas na cidade de Goiânia, GO, Brasil. Métodos: Foram coletadas amostras de poeira do chão e dos assentos da frente, do meio e do fundo de salas de cinemas, num total de 30 amostras após consentimento informado dos proprietários. A detecção dos alérgenos foi realizada pelo método ELISA.Resultados: As concentrações médias de alérgenos encontradas nos cinemas em 1g/g foram 0,35, 6,87, 0,65 e 0,07, respectivamente para Der p 1, Der f 1, Can f 1 e Fel d 1. Em nenhuma amostra foi possível a detecção de alérgenos de barata. Níveis sensibilizantes de alergénos foram observados em 76,6 per cent das amostras de Der f 1, mas também ocorreram para Der p 1 (3,33 per cent) e Can f 1 (10,0 per cent). Em 20 per cent das amostras, osníveis de Der f 1 encontrado foram superiores os considerados de risco para exacerbações das doenças alérgicas. Conclusões: As salas de cinema são ambientes fechados nas quais indivíduos susceptíveis podem entrar em contato com alérgenos e desencadearem exacerbações. Medidas para a redução dos níveis de alérgenos em locais públicos devem ser adotadas como estratégia global de controle ambiental para a melhoria da qualidade de vida em indivíduos atópicos.

Exposição alergênica em veículos privados de passeio e de transporte escolar em Uberlândia, MG / Allergen exposure in private cars and school transportation vehicles in Uberlandia, Brazil

Objetivo: Determinar o nível dos alérgenos de Dermatophagoies pteronyssinus (Der p 1), Dermatophagoies farinae (Der f 1), Canis familiaris (Can f 1) e Felis domesticus (Fe d 1) em veículos privados de passeio (VPP) e em veículos de transporte escolar (VT ) na cidade de Uberlândia, MG. Métodos: Foram coletadas amostras de poeira dos assentos de 60 VPP e 60 VT após consentimento informado dos proprietários e aplicação de questionários relativos às características dos veículos, propriedade e transporte de animais, bem como número de passageiros. A quantificação dos alérgenos foi realizada pelo método LISA de duplo anticorpo. Resultados: Baixos níveis de Der p 1 e Der f 1 foram detectados em ambos os tipos de veículos. Can f 1 foi o alérgeno predominante, com médias geométricas de 1,51 8g/g (IC 95: 0,99 menos 2,31 8g/g) em VPP e 1,03 8g/g (IC 95: 0,66 menos1,62 8g/g) em VT . Níveis sensibilizantes ³ mg/g de poeira) de Can f 1 foram encontrados em 32/60 (53,3) dos VPP e 36/60 (60) dos VT , enquanto níveis sensibilizantes de Fel d 1 foram detectados em 12/60 (20) dos VPP e 16/60 (27) os VT. Conclusões: Os veículos apresentam níveis sensibilizantes de alérgenos de animais domésticos, principamente Can f 1. A realização de medidas para redução desses alérgenos, haja visto a freqüência de uso desses veículos, é importante para uma adequada estratégia global de controle ambienta em pacientes atópicos.

Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in goats by the indirect haemagglutination, immunofluorescence and immunoenzymatic tests in the region of Uberlândia, Brazil

A comparative study of the indirect haemagglutination (IHA), immunofluorescence (IFAT) and immunoenzymatic (ELISA) tests was carried out to determine the prevalence of Toxoplasma gondii antibodies in goats. One hundred seventy-four serum samples were obtained from four goat herds from the region of Uberlândia, State of Minas Gerais. The distribution of the animals, according to their origin, was as follow: 71 from herd I; 39 from herd II; 37 from herd III; and 27 from herd IV. Serum samples were analyzed by IHA, IFAT and ELISA, considering the reactivity of the serum samples at dilution ≥ 1:64 as cut off titer for the three tests. A global seroprevalence of 18.4 percent was observed, with significantly higher positivity rate in the herd II (66.7 percent) and older animals (> 36 months). A high and significant positive correlation was found between the titers obtained by the IHA versus IFAT, IHA versus ELISA, and ELISA versus IFAT. Therefore, it can be concluded that the three analyzed tests have shown to be highly concordant and appropriate for epidemiological surveys of Toxoplasma infection in goats. Although the seroprevalence of T. gondii infection in goats is relatively low in this region as compared to other regions of the country, adequate management might be useful and essential to control the infection in the goat herds

Sensibilizaçäo a alérgenos inaláveis domiciliares em pacientes asmáticos em Uberlândia, MG / Sensibilization to indoor allergens among asthmatic patients living in Uberlândia, MG

Objetivo: Avaliar a sensibilizaçäo aos alérgenos domiciliares em 89 pacientes asmáticos adultos em Uberlândia/MG, por testes cutâneos (punctura e intradérmico) e ELISA para anticorpos IgE específicos. Métodos: Testes de punctura (P) foram relizados com extratos de D. pteronyssinos (Dp), B. tropicalis (Br), barata, cäo e gato. Testes intradérmicos (ID) foram realizados somente para Dp e Bt. IgE sérica específica aos referidos alérgenos foi determinada por ELISA. Resultados: Foi observada maior sensibilizaçäo aos ácaros Dp (50,6 por cento) e Bt (33,7 por cento) quando comparado à sensibilizaçäo à barata (23,6 por cento), gato (4,5 por cento) e cäo (3,4 por cento) por testes P. Analisando-se o grau de reatividade do teste ID, 78,9 por cento e 61,4 por cento pacientes foram positivos respectivamente a Dp e Bt, com extratos contendo concentraçöes=< 1 Unidades Alergênicas (AU)/ml para Dp e 0,2 µg/ml para Bt. Pelo ELISA, 34,8 por cento pacientes tiveram IgE positiva ao Dp comparados aos 13,5 por cento para B. Menor percentual de IgE específica foi observado para barata (16,8 por cento), cäo (7,9 por cento) e gato (5,6 por cento). A positividade para Dp foi significativamente maior que para Bt para os testes P e ELISA. Observou-se alto índice de concordância (71,9 por cento para Dp e 60,7 para Bt) entre os três testes realizados. Resultados discordantes foram observados principalmente com testes cutâneos positivos (P e/ou ID) e ELISA negativos. Conclusöes: A maior sensibilizaçäo dos pacientes asmáticos adultos em Uberlândia ocorreu com ácaros, especialmente D.pteronyssinus. A sensibilizaçäo pode ser avaliada por testes in vivo e in vitro, levando em consideraçäo os dados clínicos para se obter um diagnóstico etiológico presuntivo e uma conduta apropriada.

Detection of Toxoplasma gondii soluble antigen, SAG-1(p30), antibody and immune complex in the cerebrospinal fluid of HIV positive or negative individuals

Active infection by T. gondii was evaluated by immunoassay for soluble SAG-1 (p30), the major surface antigen from T. gondii, specific antibodies and immune complexes in human cerebrospinal fluid (CSF) samples. A total of 263 samples of CSF were collected from hospitalized patients presenting neurological disorders and analyzed for antibodies to HIV. Patients were divided into two groups: HIV positive (n = 96) or HIV negative (n =167). The results of the assays showed that 45 of all samples were positive for soluble SAG-1. Toxoplasma Ag/Ab immune complexes were detected in 19 of the CSF samples and 62 were positive for T. gondii- specific IgG. A combination of these assays in the presence of clinical findings consistent with active Toxoplasma infection may predict the presence of toxoplasmic encephalitis. Moreover, detection of soluble SAG-1 in the CSF of these individuals appears consistent with active infection.

Experimental infection of Calomys callosus (Rodentia, Cricetidae) by Toxoplasma gondii

Calomys callosus, Renagger 1830 (Rodentia, Cricetidae), a wild rodent found in Central Brazil, was studied to investigate its susceptibility to Toxoplasma gondii experimental infection and its humoral immune response against this protozoa. The electrophoretic profile of the serum proteins of C. callosus showed that IgG, which shows no affinity to Protein A, has higher cross reactivity with rat IgG than with IgG from other rodents. The susceptibility assay was performed by inoculation groups of animals with various suspensions of T. gondii tachyzoites from 10² to 10 6 parasites. All animals died between 3 and 9 days after infection and the kinetics of andibody synthesis was determined. Basically, they recognized predominantly the immunodominant antigen SAG-1 (P30). The immunohistochemistry assays revealed that the liver was the most heavily infected organ, followed by the spleen, lungs, intestine, brain and kidneys. It can be concluded that C. callosus is an excellent experiment model for acute phase of Toxoplasma infection.

Detection of Toxoplasma gondii specific antibodies in dogs: a comparative study of immunoenzymatic, immunofluorescent and haemagglutination titers

We evaluated the titers os anti-T. gondii antibodies by various serological testes in 40 serum samples from dogs exhibiting clinical signs of infectios diseases. Indirect immunoflurescence (IgG-IFI), indirect haemagglutination (IHA and M-Toxo) and immunoenzymatic (ELISA and PA-ELISA) tests were carried out. Titers > 64 were considered as positive. Anti-Toxoplasma antibodies were found in 9 (22.5 per cent), 14 (35 per cent) and 12 (30 per cent) samples, respectively for IHA, IgG-IFI, ELISA and PA-ELISA. The results showed that 57 per cent were negative in all tests and 43 per cent of the dogs presented antibodies to T. gondii; from these, 20 per cent were positive in all three tests with high titers of antibodies and 23 per cent were positive in only one or two tests with low titers of antibodies and mainly related to the IFI and ELISA tests. We observed 5 (12.5 per cent) and 1 (2.5 per cent) reactive samples, respectively, by M-Toxo and IHA with or wihout 2-mercapthoethanol, in the attempt to detect specific IgM. We can conclude that serodiagnosis of toxoplasmosis in dog have to be based on the combination of serological tests (IFI and ELISA) and with emphasis at the determination of the titers and the classes of specific antibodies.

Ensaio imunoenzimático (ELISA) para detecçäo de toxina botulínica tipo D / Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of botulinum typy D toxin

Foi desenvolvido um teste imunoenzimático (ELISA) capaz de detectar toxina botulínica tipo D. A técnica empregada foi a de Duplo Anticorpo (ELISA "Sandwich") utilizando-se antitoxinas botulínicas tipo D de referência (Statens Seruminstitut, Dinamarca) tanto na fase de sensibilizaçäo das microplacas de polivinilcloreto como para a produçäo do conjugado imunoenzimático (antisoro botulínico tipo D ligado à peroxidase). A sensibilidade do teste foi verificada através de titulaçöes de toxina botulínica tipo D em fluidos de cultura e adicionada a "pool" de soro bovino normal, resultando em reatividade correspondendo respectivamente a 15,6 DL50/ml e 31,2 DL50/ml para camundongos, determinada espectrofotometricamente em leitor de microplacas. A especificidade, por sua vez, foi demonstrada pela ausência de reatividade com os diferentes tipos de toxinas botulínicas A, B e E, toxinas tetânica e deftérica. Entretanto, foi observado reatividade cruzada parcial com a toxina botulínica tipo C, devido às semelhanças antigênicas entre as toxinas tipos C e D. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que o referido teste pode ser utilizado como um método de triagem, sensível, rápido e eficaz para a detecçäo de toxina botulínica tipo D, embora, especificamente para o diagnóstico direto do botulismo do bovino, o método tem as mesmas limitaçöes do bioensaio em camundongos por causa da baixa concentraçäo de toxina circulante