Efeito do estímulo de substâncias liberadas por cimentos endodônticos sobre macrófagos em cultura / Effect of stimulation by substances leached from endodontic sealers on macrophages cells in culture

O selamento biológico dos canais radiculares, almejado pelo tratamento endodôntico, depende não somente dos passos operatórios e substâncias utilizadas nesse processo, mas também do sistema imune do paciente. Portanto, o objetivo desse trabalho in vitro foi analisar a viabilidade de macrófagos previamente ativados com interferon-gama (IFN-g) e lipopolissacarídeos (LPS) e estimulado por substâncias liberadas por 3 cimentos endodônticos. Material e Métodos - Meio de cultura foi condicionado por cimentos comumente utilizados em Endodontia (à base de óxido de zinco e eugenol, resinoso e à base de hidróxido de cálcio) durante 1h ou 24h. Macrófagos foram obtidos de líquido de ascite do peritônio de camundongos e semeados em 42 poços (2 x 105 células/poço) em placas de 96 poços. Após a ativação com IFN-g e LPS de E. coli a mensuração da citotoxicidade de substâncias liberadas dos cimentos foi obtida através do teste de redução do MTT. A absorbância dos poços foi lida em espectrofotômetro usando um filtro de 562 nm. Os dados de seis réplicas foram comparados pelo teste estatístico de Friedman. O nível de significância foi de 5%. Resultados - A viabilidade de células controle e das tratadas pelas substâncias liberadas pelos cimentos foi similar. Os grupos tratados com o cimento de óxido de zinco e eugenol apresentaram diferenças significantes na viabilidade celular. A viabilidade de células de células tratadas com meios condicionados por 1h foi menor do que o daquela de células tratadas com meio condicionado por 24h. Conclusão - Independentemente do tempo de condicionamento (1h ou 24h) as substâncias liberadas durante a presa dos cimentos endodônticos testados não foram citotóxicas aos macrófagos peritoniais de camundongos ativados e em cultura

Efeito da terapia com laser em baixa intensidade (LILT) na produção de proteínas por macrófagos estimulados por cimentos endodônticos / Effect of low level laser therapy (LILT) on the protein secretion by endodontic sealers stimulated macrophages

A terapia endodôntica visa o selamento biológico do complexo sistema apical, contribuindo para isso, as substâncias usadas no tratamento e a resposta imune do paciente. A LILT tem mostrado atividade antiinflamatória, favorecendo o processo reparacional. Sendo assim, este trabalho objetivou analisar o efeito da LILT na atividade secretória de macrófagos, previamente ativados por IFN-? e LPS de E.coli, e estimulados por substâncias liberadas de três tipos de cimentos endodônticos, um a base de óxido de zinco e eugenol, outro a base de hidróxido de cálcio e um terceiro resinoso. A citotoxicidade dessas substâncias foi avaliada usando a técnica de análise do MTT. Macrófagos ativados foram estimulados por essas substâncias ou não (controle) e então, irradiados ou não (controle) e a secreção de proteínas próinflamatórias (interleucina-1 , fator de necrose tumoral-e metaloproteinase da matriz- 1) foram analisadas pelo teste ELISA. As irradiações foram realizadas com um laser GaAlAs (780 nm, 70 mW, ponta da fibra de 4 mm2, 1.67 seg, 3 J/cm2). Foram usadas duas aplicações de irradiação com intervalo de 6 h. Os dados obtidos foram tratados por Análise de Variância, quando de distribuição normal, ou teste de Friedman, quando de distribuição não normal, com nível de significância de 5 por cento (p = 0,05). A viabilidade dos controles e células tratados pelos cimentos endodônticos foi similar. Produção de IL-1 e TNF-foram observadas. Houve alta produção de MMP-1. Entretanto, sem diferenças estatísticas entre os grupos experimentais. Os grupos irradiados apresentaram resultados similares aos não irradiados. Substâncias liberadas pelos cimentos endodônticos testados não se mostraram citotóxicas nas condições deste experimento. Essas substâncias, bem como a LILT, no parâmetro utilizado, não causam alteração na atividade de secreção de MMP-1, IL-1 e TNF-por macrófagos ativados.

Obtenção de macrófagos ativados para trabalhos científicos / Obtaining activated macrophages for scientific use

O estudo em célula tem sido sempre um grande desafio em qualquer nível da ciência. O surgimento da cultura celular in vitro veio na tentativa de minimizar as dificuldades inerentes ao estudo in vivo. Sabendo disso, seria de importância estudar qual a maneira mais prática de obtenção da célula escolhida antes do início de qualquer pesquisa na área celular. Com interesse de trabalhar com a inflamação crônica escolheu-se os macrófagos, células predominantes desse processo. O objetivo deste estudo foi testar uma metodologia de obtenção e manutenção dessas células, como um estudo piloto e de treinamento da técnica, para serem usados em experimentos científicos de dissertações e teses. Métodos - Seis camundongos receberam injeção intraperitoneal de 2 ml e meio tioglicolato a 5 por cento e após cinco ou sete dias foram sacrificados e receberam injeção intraperitoneal de 5 ml de solução tampão fosfato-salina (PBSA). Após massagem na cavidade abdominal o exsudato peritoneal induzido foi recuperado por aspiração, transferido para tubos de ensaio e centrifugados a 300 g, por dez minutos. As suspensões celulares em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DME) foram identificadas através da coloração de May-Grünwald e Giemsa modificada por Rosenfeld e semeadas em frascos e mantidas em estufa a 37o C, com atmosfera úmida contendo 5 por cento de CO2. Resultados - Foram encontrados somente macrófagos após dezoito horas do plaqueamento. Conclusões - Conclui-se que com essa metodologia é possível a obtenção simples e rápida de população de macrófagos que poderão ser utilizados para análise em pesquisas e que a prática é fundamental para evitar perdas de amostras desnecessárias